Herstellung und Optimierung von Virosomen als Vektoren zur Einschleusung von Transgenen in Bullenspermien:
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| Published: |
Berlin
Mensch-&-Buch-Verl.
2007
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| Item Description: | Paralleltitel: Production and improvement of virosomes for the use as vectors transfering transgenes into bovine sperm cells |
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|---|---|
| adam_text | Inhalt
Abkürzungen 7
1. Einführung 9
1.1. Influenza Viren 9
1.1.1. Aufbau von Influenza A-Viren 9
1.1.2. Struktur des Influenzahämagglutinin 10
1.1.3. Influenza A-Virus induzierte Fusion 12
1.2. Sendaivirus 14
1.3. Virosomen 14
1.4. Spermien-vermittelter Gentransfer (SMGT) 16
1.4.1. Aufnahme von DNA in Spermien 16
1.4.2. Transfektion der Spermien mittels Inkubation in DNA-haltigen 18
Medien und SMGT
1.4.3. Transfektion der Spermien mittels Elektroporation und SMGT 22
1.4.4. Transfektion der Spermien mittels kationischer Lipide und SMGT 24
1.4.5. Transfektion der Spermien mittels Liposomen und SMGT 26
1.4.6. Transfektion der Spermien mittels viraler Vektoren und SMGT 27
1.4.7. Transfektion der Spermien mittels Virosomen und SMGT 27
1.4.8. Weitere Spermien-vermittelte Gentransfermethoden 28
1.5. Herstellung und Nutzen transgener Tiere 29
2. Zielsetzung 33
3. Material und Methoden 34
3.1. Material 34
3.1.1. Chemikalien, Enzyme und Immunreagenzien 34
3.1.2. Viren und Zellkultur 36
3.1.3. Spezielle Geräte und Testbestecke 37
3.2. Methoden 37
3.2.1. Virusanzucht,-reinigung und-Charakterisierung 37
3.2.2. Herstellung der Virosomen 40
3.2.3. Biochemische Charakterisierung der Virosomen und Spermien 43
3.2.4. Elektronenmikroskopie der Virosomen 47
3.2.5. Fusion mit Spermien 47
3.2.6. Fluoreszenzmikroskopie fusionierter Spermien 50
3.2.7. Statistik 52
4. Ergebnisse 54
4.1. Optimierung der Virosomen bezüglich der Fusion mit 54
gefrierkonservierten Bullenspermien
4.1.1. Einfluss des Elternvirus auf die Virosomen 54
4.1.2. Abhängigkeit der Fusion der Virosomen mit den Spermien von der
Anwesenheit des Influenzahämagglutinins 57
4.1.3. Einfluss der Cholesterolmenge auf die Virosomen 59
4.1.4. Einfluss der Plasmidmenge auf Virosomen 62
4.1.5. Einfluss der Tritonextraktionsmethode auf die Virosomen 66
4.1.6. Einfluss der Proteinmenge auf die Virosomen 70
4.1.7. Einfluss verschiedener Poly-L-Lysin-Kondensationszeiten auf Virosomen 74
4.2. Variabilität der Fusionsergebnisse bei Verwendung einer 76
Virosomenpräparation
4.3. Transfer von Fluoreszein-markierter DNA aus Virosomen in Spermien 77
4.4. Fusion von Virosomen mit Nebenhodenschwanzspermien (Rind) 81
4.5. Fusion von Virosomen mit kryokonservierten Spermien 82
verschiedener Individuen
4.6. Fusion von Virosomen mit flüssigkonservierten Eberspermien 83
5. Diskussion 85
6. Zusammenfassung 102
7. Summary 103
8. Anhang 104
9. Literaturverzeichnis 106
Danksagung 132
Publikationsverzeichnis
Lebenslauf
Selbständigkeitserklärung
|
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Inhalt
Abkürzungen 7
1. Einführung 9
1.1. Influenza Viren 9
1.1.1. Aufbau von Influenza A-Viren 9
1.1.2. Struktur des Influenzahämagglutinin 10
1.1.3. Influenza A-Virus induzierte Fusion 12
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1.4. Spermien-vermittelter Gentransfer (SMGT) 16
1.4.1. Aufnahme von DNA in Spermien 16
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1.4.7. Transfektion der Spermien mittels Virosomen und SMGT 27
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1.5. Herstellung und Nutzen transgener Tiere 29
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3.2.7. Statistik 52
4. Ergebnisse 54
4.1. Optimierung der Virosomen bezüglich der Fusion mit 54
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4.1.1. Einfluss des Elternvirus auf die Virosomen 54
4.1.2. Abhängigkeit der Fusion der Virosomen mit den Spermien von der
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4.1.7. Einfluss verschiedener Poly-L-Lysin-Kondensationszeiten auf Virosomen 74
4.2. Variabilität der Fusionsergebnisse bei Verwendung einer 76
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4.3. Transfer von Fluoreszein-markierter DNA aus Virosomen in Spermien 77
4.4. Fusion von Virosomen mit Nebenhodenschwanzspermien (Rind) 81
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verschiedener Individuen
4.6. Fusion von Virosomen mit flüssigkonservierten Eberspermien 83
5. Diskussion 85
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Danksagung 132
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