Untersuchung der möglichen Mechanismen des protektiven Effekts von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die experimentelle Prioninfektion im Mausmodell und Untersuchung des Effekts einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale B-Zell-Aktivität:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis.. 4
1 Einleitung 10
1.1 Prionkrankheiten 10
1.1.1 Prionkrankheiten beim Tier 10
1.1.2 Prionkrankheiten beim Mensch 12
1.1.3 Übertragbarkeit von Prionkrankheiten 14
13. Das Prionprotein (PrP) 17
1.2.1 Entdeckung des Prionproteins 17
1.2.2 Die beiden Formen des Prionproteins: PrP0 und PrP50 18
1.2.3 DiePrion-Hypothese 18
1.2.4 Die Struktur des Prionproteins 20
1.2.5 Biogenese von PrP0 20
1.2.6 Physiologische Funktion des Prionproteins 22
1-3 Immunbiologie von Prionkrankheiten 23
1.3.1 Das lymphoretikuläre System und die Pathogenese von Prionkrankheiten 23
1.3.2 Immuntherapeutische Ansätze bei Prionkrankheiten 26
1.4 Immunstimulatorische CpG-Oligonukleotide (CpG-ODN) 29
14.1 Historischer Hintergrund 29
14.2 Wirkungen von CpG-ODN auf das Immunsystem 30
1.4.3 Wirkungsmechanismus von CpG-ODN 32
14.4 Therapeutische Anwendungen von CpG-ODN 33
14.5 Konsekutive CpG-ODN-Applikationen 34
4
Inhaltsverzeichnis
1.5 Fragestellung der Arbeit 35
2 Material und Methoden „ 37
2.1 Verwendete Substanzen 37
2.1.1 Chemikalien 37
2.1.2 Oligonukleotide (ODN) 39
2.2 Geräte und Software 39
2.2.1 Geräte 39
2.2.2 Software 40
23 Lösuneen und Puffer.... .............. ................ ........... ........... ....... 40
2.3.1 Lösungen und Puffer ftlr den ELISA 40
2.3.2 Lösungen und Puffer für die Immunhistochemie 42
2.3.3 Lösungen und Puffer fiir die SDS-Polyaoylamid Gelelektrophorese
(SDS-Page) und Western Blot-Analyse 43
2.3.3.1 Lösungen und Puffer fiir die SDS-Page 44
2.3.3.2 Lösungen und Puffer fiir die Western Blot-Analyse 44
2.4 Verwendete Antikörper................ ............... .............. .......... ....... 46
2.4.1 Primärantikörper 46
2.4.2 Sekundärantikörper 47
2.5 Gebrauchs- und Verbrauchsmaterialien 47
2.6 Versuchstiere und Tierhaltung 49
5
Inhaltsverzeichnis
2.7 Methoden der in Wpo-Experimente.............. .................... ................... 49
2.7.1 Experimentelle Prioninfektion 49
2.7.2 CpG-ODN-Applikation 49
2.7.3 Blutentnahme und Serumgewinnung 50
2.7.4 Organentnahme 50
2.8 Aufbau der in v/vo-Experimente 51
2.8.1 Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die Milzarchitektur 51
2.8.2 Immunologische Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf
B-Zell-Ebene 53
2.8.3 Effekt einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale
B-Zell-Aktivität 55
2.9 Enzyme-Iinked immunosorbent assay (ELISA) 56
2.10 Histologische und immunhistochemische Untersuchungen 57
2.10.1 Herstellung der Präparate 57
2.10.1.1 Herstellung von Paraffinschnitten 57
2.10.1.2 Herstellung von Gefrierschnitten 57
2.10.2 Hämatoxylin-Eosin-Färbung 57
2.10.3 Immunhistochemie 58
2.10.3.1 Färbung der B-Lymphozyten 58
2.10.3.2 Färbung der follikulär dendritischen Zellen 59
2.10.3.3 Färbung der Makrophagen 60
2.10.3.4 Färbung der sympathischen Nerven 60
6
Inhaltsverzeichnis
2.10.4 Morphometrische Analyse 62
2.10.4.1 Morphometrie 62
2.10.4.2 Morphometrische Analyse der Ratio der weißen Pulpa zur roten Pulpa. 62
2.10.4.3 Morphometrische Analyse der B-Zellfollikel 62
2.10.4.4 Morphometrische Analyse der FDC-M1+Netzwerke 63
2.10.4.5 Morphometrische Analyse der F4/80+ Makrophagen der Milz 63
2.10.4.6 Morphometrische Analyse des Abstandes der FDC-M1+ Netzwerke zu
den sympathischen Nerven der Milz 64
2.11 SDS-Polyacrylamid Gelelektrophorese (SDS-Page) und
Western Blot-Analyse......................................... ............... .......... .....64
2.11.1 Probenherstellung 64
2.11.2 SDS-Page 65
2.11.3 Western Blot-Analyse 65
2.12 Statistik _ 66
3 Ergebnisse.............. ................... ................... ...................... ....................... 68
3.1 Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die Milzarchitektur 68
3.1.1 Einfluss auf die Milzgewichte 68
3.1.2 Einfluss auf die Milzhistologie 72
3.1.3 Einfluss auf die Ratio der weißen Pulpa zur roten Pulpa 75
3.1.4 Einfluss auf die B-Zellfollikel 77
3.1.5 Einfluss auf die FDC-M 1+Netzwerke 80
3.1.6 Einfluss aufdieF4/80+Makrophagen der Milz 83
3.1.7 Einfluss auf den Abstand der sympathischen Nerven zu den
FDC-MT Netzwerken der Milz 85
7
Inhaltsverzeichnis
3.2 Immunologische Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf
B-Zell-Ebene 87
3.2.1 Einfluss auf die Serum-IgGl-Konzentration 87
3.2.2 Einfluss auf die Serum-IgG2c-Konzentration 89
3.2.3 Einfluss auf die Ratio IgGl / IgG2c 92
33 Effekt einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale
Zeil-Aktivität 96
3.3.1 Verlauf der Prionerkrankung bei C57BL/6 Mäusen und bei 129/Sv Mäusen. 96
3.3.2 Serumkonzentrationen des Th2-assoziierten Ig-Isotyps IgG 1 bei
prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 99
3.3.3 Serumkonzentrationen des Th2-assoziierten Ig-Isotyps IgGl bei
prioninfizierten 129/Sv Mäusen 101
3.3.4 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgGl von prioninfizierten Mäusen 102
3.3.5 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgGl-
Konzentrationen von C57BL/6 Mäusen und 129/Sv Mäusen 104
3.3.6 Serumkonzentrationen des Till-assoziierten Ig-Isotyps IgG2c bei
prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 106
3.3.7 Serumkonzentrationen des Thl-assoziierten Ig-Isotyps IgG2a bei
prioninfizierten 129/Sv Mäusen 108
3.3.8 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgG2c (-IgG2a) von prioninfizierten Mäusen 108
3.3.9 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgG2c
(-IgG2a)-Konzentrationen von C57BL/6 Mäusen und 129/Sv Mäusen 110
3.3.10 Effekt einer Prioninfektion auf die Thl- bzw. Th2-Dominanz der humoralen
Immunantwort 111
3.3.11 Serum-IgM-Konzentrationen bei prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 114
3.3.12 Serum-IgM-Konzentrationen bei prioninfizierten 129/Sv Mäusen 115
3.3.13 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgM von prioninfizierten Mäusen 116
3.3.14 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgM-
Konzentrationen von C57BL/6 Mäusen und 129/Sv Mäusen 117
8
Inhaltsverzeichnis
4 Diskussion 119
4.1 Zusammenfassung der Ergebnisse 119
4.2 Welche Effekte zeigen konsekutive CpG-ODN-Applikationen auf die
Milzarchitektur? 120
43 Welche immunologischen Effekte zeigen konsekutive
CpG-ODN-Applikationen auf B-Zell-Ebene? 125
4.4 Arbeitsmodell zur Charakterisierung der Effekte von konsekutiven
CpG-ODN-Applikationen 127
4.5 Führt die experimentelle Prioninfektion zu einer Veränderung der
B-Zell-Aktivitüt? 129
5 Zusammenfassung 133
Literaturverzeichnis............................................................................................................. 138
AbkOrzungsverzeichnis 157
Danksaffunn ............ ... ..................................................... 160
Lebenslauf 161
Veröffentlichungen 162
9
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis. 4
1 Einleitung 10
1.1 Prionkrankheiten 10
1.1.1 Prionkrankheiten beim Tier 10
1.1.2 Prionkrankheiten beim Mensch 12
1.1.3 Übertragbarkeit von Prionkrankheiten 14
13. Das Prionprotein (PrP) 17
1.2.1 Entdeckung des Prionproteins 17
1.2.2 Die beiden Formen des Prionproteins: PrP0 und PrP50 18
1.2.3 DiePrion-Hypothese 18
1.2.4 Die Struktur des Prionproteins 20
1.2.5 Biogenese von PrP0 20
1.2.6 Physiologische Funktion des Prionproteins 22
1-3 Immunbiologie von Prionkrankheiten 23
1.3.1 Das lymphoretikuläre System und die Pathogenese von Prionkrankheiten 23
1.3.2 Immuntherapeutische Ansätze bei Prionkrankheiten 26
1.4 Immunstimulatorische CpG-Oligonukleotide (CpG-ODN) 29
14.1 Historischer Hintergrund 29
14.2 Wirkungen von CpG-ODN auf das Immunsystem 30
1.4.3 Wirkungsmechanismus von CpG-ODN 32
14.4 Therapeutische Anwendungen von CpG-ODN 33
14.5 Konsekutive CpG-ODN-Applikationen 34
4
Inhaltsverzeichnis
1.5 Fragestellung der Arbeit 35
2 Material und Methoden „ 37
2.1 Verwendete Substanzen 37
2.1.1 Chemikalien 37
2.1.2 Oligonukleotide (ODN) 39
2.2 Geräte und Software 39
2.2.1 Geräte 39
2.2.2 Software 40
23 Lösuneen und Puffer. . . . . . 40
2.3.1 Lösungen und Puffer ftlr den ELISA 40
2.3.2 Lösungen und Puffer für die Immunhistochemie 42
2.3.3 Lösungen und Puffer fiir die SDS-Polyaoylamid Gelelektrophorese
(SDS-Page) und Western Blot-Analyse 43
2.3.3.1 Lösungen und Puffer fiir die SDS-Page 44
2.3.3.2 Lösungen und Puffer fiir die Western Blot-Analyse 44
2.4 Verwendete Antikörper. . . . . 46
2.4.1 Primärantikörper 46
2.4.2 Sekundärantikörper 47
2.5 Gebrauchs- und Verbrauchsmaterialien 47
2.6 Versuchstiere und Tierhaltung 49
5
Inhaltsverzeichnis
2.7 Methoden der in Wpo-Experimente. . . 49
2.7.1 Experimentelle Prioninfektion 49
2.7.2 CpG-ODN-Applikation 49
2.7.3 Blutentnahme und Serumgewinnung 50
2.7.4 Organentnahme 50
2.8 Aufbau der in v/vo-Experimente 51
2.8.1 Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die Milzarchitektur 51
2.8.2 Immunologische Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf
B-Zell-Ebene 53
2.8.3 Effekt einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale
B-Zell-Aktivität 55
2.9 Enzyme-Iinked immunosorbent assay (ELISA) 56
2.10 Histologische und immunhistochemische Untersuchungen 57
2.10.1 Herstellung der Präparate 57
2.10.1.1 Herstellung von Paraffinschnitten 57
2.10.1.2 Herstellung von Gefrierschnitten 57
2.10.2 Hämatoxylin-Eosin-Färbung 57
2.10.3 Immunhistochemie 58
2.10.3.1 Färbung der B-Lymphozyten 58
2.10.3.2 Färbung der follikulär dendritischen Zellen 59
2.10.3.3 Färbung der Makrophagen 60
2.10.3.4 Färbung der sympathischen Nerven 60
6
Inhaltsverzeichnis
2.10.4 Morphometrische Analyse 62
2.10.4.1 Morphometrie 62
2.10.4.2 Morphometrische Analyse der Ratio der weißen Pulpa zur roten Pulpa. 62
2.10.4.3 Morphometrische Analyse der B-Zellfollikel 62
2.10.4.4 Morphometrische Analyse der FDC-M1+Netzwerke 63
2.10.4.5 Morphometrische Analyse der F4/80+ Makrophagen der Milz 63
2.10.4.6 Morphometrische Analyse des Abstandes der FDC-M1+ Netzwerke zu
den sympathischen Nerven der Milz 64
2.11 SDS-Polyacrylamid Gelelektrophorese (SDS-Page) und
Western Blot-Analyse. . . .64
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2.11.2 SDS-Page 65
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2.12 Statistik _ 66
3 Ergebnisse. . . . . 68
3.1 Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die Milzarchitektur 68
3.1.1 Einfluss auf die Milzgewichte 68
3.1.2 Einfluss auf die Milzhistologie 72
3.1.3 Einfluss auf die Ratio der weißen Pulpa zur roten Pulpa 75
3.1.4 Einfluss auf die B-Zellfollikel 77
3.1.5 Einfluss auf die FDC-M 1+Netzwerke 80
3.1.6 Einfluss aufdieF4/80+Makrophagen der Milz 83
3.1.7 Einfluss auf den Abstand der sympathischen Nerven zu den
FDC-MT Netzwerken der Milz 85
7
Inhaltsverzeichnis
3.2 Immunologische Effekte von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf
B-Zell-Ebene 87
3.2.1 Einfluss auf die Serum-IgGl-Konzentration 87
3.2.2 Einfluss auf die Serum-IgG2c-Konzentration 89
3.2.3 Einfluss auf die Ratio IgGl / IgG2c 92
33 Effekt einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale
Zeil-Aktivität 96
3.3.1 Verlauf der Prionerkrankung bei C57BL/6 Mäusen und bei 129/Sv Mäusen. 96
3.3.2 Serumkonzentrationen des Th2-assoziierten Ig-Isotyps IgG 1 bei
prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 99
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prioninfizierten 129/Sv Mäusen 101
3.3.4 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgGl von prioninfizierten Mäusen 102
3.3.5 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgGl-
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3.3.6 Serumkonzentrationen des Till-assoziierten Ig-Isotyps IgG2c bei
prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 106
3.3.7 Serumkonzentrationen des Thl-assoziierten Ig-Isotyps IgG2a bei
prioninfizierten 129/Sv Mäusen 108
3.3.8 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgG2c (-IgG2a) von prioninfizierten Mäusen 108
3.3.9 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgG2c
(-IgG2a)-Konzentrationen von C57BL/6 Mäusen und 129/Sv Mäusen 110
3.3.10 Effekt einer Prioninfektion auf die Thl- bzw. Th2-Dominanz der humoralen
Immunantwort 111
3.3.11 Serum-IgM-Konzentrationen bei prioninfizierten C57BL/6 Mäusen 114
3.3.12 Serum-IgM-Konzentrationen bei prioninfizierten 129/Sv Mäusen 115
3.3.13 Vergleich der präklinischen und klinischen Konzentrationen des
Serum-IgM von prioninfizierten Mäusen 116
3.3.14 Unterschiedliche Effekte einer Prioninfektion auf die Serum-IgM-
Konzentrationen von C57BL/6 Mäusen und 129/Sv Mäusen 117
8
Inhaltsverzeichnis
4 Diskussion 119
4.1 Zusammenfassung der Ergebnisse 119
4.2 Welche Effekte zeigen konsekutive CpG-ODN-Applikationen auf die
Milzarchitektur? 120
43 Welche immunologischen Effekte zeigen konsekutive
CpG-ODN-Applikationen auf B-Zell-Ebene? 125
4.4 Arbeitsmodell zur Charakterisierung der Effekte von konsekutiven
CpG-ODN-Applikationen 127
4.5 Führt die experimentelle Prioninfektion zu einer Veränderung der
B-Zell-Aktivitüt? 129
5 Zusammenfassung 133
Literaturverzeichnis. 138
AbkOrzungsverzeichnis 157
Danksaffunn . . . 160
Lebenslauf 161
Veröffentlichungen 162
9 |
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| spelling | Ebner, Sabine Verfasser aut Untersuchung der möglichen Mechanismen des protektiven Effekts von konsekutiven CpG-ODN-Applikationen auf die experimentelle Prioninfektion im Mausmodell und Untersuchung des Effekts einer experimentellen Prioninfektion auf die humorale B-Zell-Aktivität von Sabine Ebner 2007 162 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 2007 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=016301013&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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