Bedeutung des Toll-like-Rezeptors 4 für die Pathogenese des akuten Lungenversagens bei gram-negativer Sepsis in einem Mausmodell:
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5
Inhaltsverzeichnis 5
Widmung 3
Abkürzungsverzeichnis 7
1. Einleitung 10
1.1 Sepsis 10
1.1.1 Definition der Sepsis 10
1.1.2 Epidemiologie der Sepsis 12
1.1.3 Pathophysiologie der Sepsis 13
1.1.4 Acute respiratory distress syndrom (ARDS) 17
1.1.4.1 Epidemiologie des ARDS 17
1.1.4.2 Pathophysiologie des ARDS 19
1.2 Das angeborene Immunsystem 23
1.2.1 Toll-like Rezeptoren 23
1.2.2 MD-2 / CD14 / Toll-like Rezeptor 4-Komplex 25
1.2.3 Lipopolysaccharid 26
1.2.4 Signaltransduktionsweg der angeborenen Immunität 27
1.2.5 TNFa und IL-lß 29
1.2.61L-6 30
1.3 Arbeitshypothese 30
2. Material und Methoden 31
2.1 Mausmodell 31
2.2 Stimulation und Gewinnung der Proben 31
2.2.1 Injektionsprotokoll 31
2.3 RPA - Ribonuclease Protection Assay 32
2.3.1 Material und Durchrührung 33
2.3.2 Auswertung 37
2.4 Western Blot 38
2.4.1 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 38
2.4.2 Transfer 39
2.4.3 Durchführung 40
6
2.5 ELISA - Enzym linked immunosorbent assay 41
2.5.1 Probengewinnung 41
2.5.2 Durchführung 42
2.6 EMSA- Electrophoretic mobility shift assay 43
2.6.1 Proteinisolation 44
2.6.2 Durchführung 45
2.6.3 Auswertung 47
2.7 iNOS mRNA-Expressionsbestimmung durch RT-PCR 48
2.7.1 Durchführung der RT-PCR 48
2.8 Untersuchung der katalytischen Aktivität der
Stickstoffmonoxidsynthetase (NOS) 49
2.9 Statistik 50
2.9.1 RPA 50
2.9.2 ELISA 50
2.9.3 EMSA 51
2.9.4 RT-PCR 51
3. Ergebnisse 52
3.1 Klinische Manifestation der Infektion 52
3.2 Pulmonale CD14- und TLR4-Expression nach LPS-Applikation 52
33 NFicB-Aktivierung in der Lunge nach LPS-Applikation 55
3.4 Pulmonale Zytokin- und Zytokinrezeptor-mRNA Expression nach
LPS-Applikation 56
3.5 Expression pulmonaler Zytokinproteine nach LPS-Applikation 58
3.6 Pulmonale iNOS mRNA Expression und katalj tische iNOS-Aktivität 60
4. Diskussion 61
4.1 Mausmodell zur Induktion des akuten Lungenversagens 61
4.2 Induktion von NFkB, Zytokinen und iNOS nach LPS-Stimulation 62
43 Schlussfolgerung und Ausblick 64
5. Zusammenfassung 65
6. Literaturverzeichnis 66
7. Danksagung 75
8. Curriculum vitae 76
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Inhaltsverzeichnis 5
Widmung 3
Abkürzungsverzeichnis 7
1. Einleitung 10
1.1 Sepsis 10
1.1.1 Definition der Sepsis 10
1.1.2 Epidemiologie der Sepsis 12
1.1.3 Pathophysiologie der Sepsis 13
1.1.4 Acute respiratory distress syndrom (ARDS) 17
1.1.4.1 Epidemiologie des ARDS 17
1.1.4.2 Pathophysiologie des ARDS 19
1.2 Das angeborene Immunsystem 23
1.2.1 Toll-like Rezeptoren 23
1.2.2 MD-2 / CD14 / Toll-like Rezeptor 4-Komplex 25
1.2.3 Lipopolysaccharid 26
1.2.4 Signaltransduktionsweg der angeborenen Immunität 27
1.2.5 TNFa und IL-lß 29
1.2.61L-6 30
1.3 Arbeitshypothese 30
2. Material und Methoden 31
2.1 Mausmodell 31
2.2 Stimulation und Gewinnung der Proben 31
2.2.1 Injektionsprotokoll 31
2.3 RPA - Ribonuclease Protection Assay 32
2.3.1 Material und Durchrührung 33
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2.4 Western Blot 38
2.4.1 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese 38
2.4.2 Transfer 39
2.4.3 Durchführung 40
6
2.5 ELISA - Enzym linked immunosorbent assay 41
2.5.1 Probengewinnung 41
2.5.2 Durchführung 42
2.6 EMSA- Electrophoretic mobility shift assay 43
2.6.1 Proteinisolation 44
2.6.2 Durchführung 45
2.6.3 Auswertung 47
2.7 iNOS mRNA-Expressionsbestimmung durch RT-PCR 48
2.7.1 Durchführung der RT-PCR 48
2.8 Untersuchung der katalytischen Aktivität der
Stickstoffmonoxidsynthetase (NOS) 49
2.9 Statistik 50
2.9.1 RPA 50
2.9.2 ELISA 50
2.9.3 EMSA 51
2.9.4 RT-PCR 51
3. Ergebnisse 52
3.1 Klinische Manifestation der Infektion 52
3.2 Pulmonale CD14- und TLR4-Expression nach LPS-Applikation 52
33 NFicB-Aktivierung in der Lunge nach LPS-Applikation 55
3.4 Pulmonale Zytokin- und Zytokinrezeptor-mRNA Expression nach
LPS-Applikation 56
3.5 Expression pulmonaler Zytokinproteine nach LPS-Applikation 58
3.6 Pulmonale iNOS mRNA Expression und katalj tische iNOS-Aktivität 60
4. Diskussion 61
4.1 Mausmodell zur Induktion des akuten Lungenversagens 61
4.2 Induktion von NFkB, Zytokinen und iNOS nach LPS-Stimulation 62
43 Schlussfolgerung und Ausblick 64
5. Zusammenfassung 65
6. Literaturverzeichnis 66
7. Danksagung 75
8. Curriculum vitae 76 |
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