Veränderung der postoperativen Immunantwort nach perioperativer Gabe von rekombinantem, humanem Granulozytenkolonie-stimulierendem Faktor (rh G-CSF):
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2007
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Einführung 1
1.2 Veränderungen des Immunsystems nach chirurgischem Trauma. 2
1.2.1 Allgemeine Veränderungen nach Gewebeverletzung und Blutverlust 2
1.2.2 Systemische Entzündungsreaktion 2
1.2.3 Immunsuppression 4
1.2.4 Beeinträchtigung der zeilvermittelten Immunfunktion 5
1.2.5 Konsequenzen der immunologischen Veränderungen für das Individuum 8
1.3 Bisherige therapeutische Ansätze zur Immunmodulation 9
2. Fragestellung 13
3. Grundlagen zu Granulozytenkolonie-stimulierendem Faktor (G-CSF) und rekombi-
nantem, humanem Granulozytenkolonie-stimulierendem Faktor (rhG-CSF) 15
3.1 Biologie und Pathophysiologie von G-CSF und experimentelle Untersuchungen 15
3.1.1 Biologie von G-CSF 15
3.1.2 Pathophysiologie und experimentelle Untersuchungen zu G-CSF 18
3.2 Rekombinanter, humaner Granulozytenkolonie-stimulierender Faktor (rhG-CSF) 19
3.2.1 Struktur und Biochemie 19
3.2.2 Pharmakologie 20
3.2.2.1 Pharmakokinetik 20
3.2.2.2 Pharmakodynamik 23
3.2.3 Bisherige klinische Erfahrung beim Einsatz von rhG-CSF 24
3.2.4 Sicherheit und Nebenwirkung 27
4. Material und Methoden 28
4.1 Studienprotokoll, Patientengut, Einschluss und Ausschlusskriterien 28
4.2 Probenentnahme 30
4.3 Probenaufbereitung 31
4.3.1 Häufig verwendete Geräte, Chemikalien, Puffer und Lösungen 31
4.3.2 Gewinnung von Serum 32
4.3.3 Separation mononukleärer Leukozyten (PBMC) aus dem Vollblut 32
4.3.4 Zellkultur von PBMC zur in-vitro Stimulation und Proliferation 33
4.3.5 Präparation von PBMC für die Multiparameter-Durchflusszytometrie 34
4.4 Probenauswertung 34
4.4.1 Leukozytenzahl und Differentialblutbild aus dem EDTA-Blut 34
4.4.2 Bestimmung von Entzündungsmediatoren im Serum und den Kulturüberständen. ...35
4.4.2.1 Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) 35
4.4.2.2 Immunoturbidimetrie-Kit Tina-quant 37
4.4.3 Lymphozytenproliferationsassay 38
4.4.4 Multiparameter-Durchflusszytometrie 39
4.4.4.1 Übersicht 39
4.4.4.2 Prinzip des Nachweises von Oberflächenantikörper 39
4.4.4.3 Datenakquisition, Datenanalyse und interne Qualitätskontrolle 40
4.5 Dokumentation und klinischer Verlauf 41
4.6 Statistische Auswertung 41
5. Ergebnisse 42
5.1 Demographische Daten und Vergleich der perioperativen Parameter der Studienpatienten42
5.2 Veränderungen der Leukozytenzahl und des Differentialblutbild im peripheren Blut 43
5.3 Veränderungen von pro-/antientzündlichen Mediatoren im Serum 47
5.3.1 IL-6 und C-reaktives Protein 47
5.3.2 Antientzündliche Mediatoren IL-lra und sTNF-Rl und -R2 50
5.4 Vergleich der phänotypischen Veränderungen von Monozyten und Lymphozyten 53
5.4.1 Monozyten 53
5.4.1.1 HLA-DR und CD64 Expression 53 f
5.4.1.2 In-vitro Produktion der Entzündungsmediatoren TNF-a und IL-6 56
5.4.1.3 In-vitro Produktion des antientzündlichen Mediators IL-lra 58
5.4.2 Lymphozyten 59
5.4.2.1 Lymphozytenproliferation 59
5.4.2.2 In-vitro Produktion der proentzündlichen Mediatoren IL-2 und IFN-y 60
5.4.2.3 In-vitro Produktion des antientzündlichen Mediators IL-4 62
5.5 Vergleich der klinischen Verlaufsparameter der Studienpatienten (Komplikationen) 63
6. Diskussion 65
7. Zusammenfassung, Bewertung und Ausblick ^8
8. Literaturverzeichnis 80
9. Abkürzungen 102
10. Danksagung 105
11. Lebenslauf. 10?
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Einführung 1
1.2 Veränderungen des Immunsystems nach chirurgischem Trauma. 2
1.2.1 Allgemeine Veränderungen nach Gewebeverletzung und Blutverlust 2
1.2.2 Systemische Entzündungsreaktion 2
1.2.3 Immunsuppression 4
1.2.4 Beeinträchtigung der zeilvermittelten Immunfunktion 5
1.2.5 Konsequenzen der immunologischen Veränderungen für das Individuum 8
1.3 Bisherige therapeutische Ansätze zur Immunmodulation 9
2. Fragestellung 13
3. Grundlagen zu Granulozytenkolonie-stimulierendem Faktor (G-CSF) und rekombi-
nantem, humanem Granulozytenkolonie-stimulierendem Faktor (rhG-CSF) 15
3.1 Biologie und Pathophysiologie von G-CSF und experimentelle Untersuchungen 15
3.1.1 Biologie von G-CSF 15
3.1.2 Pathophysiologie und experimentelle Untersuchungen zu G-CSF 18
3.2 Rekombinanter, humaner Granulozytenkolonie-stimulierender Faktor (rhG-CSF) 19
3.2.1 Struktur und Biochemie 19
3.2.2 Pharmakologie 20
3.2.2.1 Pharmakokinetik 20
3.2.2.2 Pharmakodynamik 23
3.2.3 Bisherige klinische Erfahrung beim Einsatz von rhG-CSF 24
3.2.4 Sicherheit und Nebenwirkung 27
4. Material und Methoden 28
4.1 Studienprotokoll, Patientengut, Einschluss und Ausschlusskriterien 28
4.2 Probenentnahme 30
4.3 Probenaufbereitung 31
4.3.1 Häufig verwendete Geräte, Chemikalien, Puffer und Lösungen 31
4.3.2 Gewinnung von Serum 32
4.3.3 Separation mononukleärer Leukozyten (PBMC) aus dem Vollblut 32
4.3.4 Zellkultur von PBMC zur in-vitro Stimulation und Proliferation 33
4.3.5 Präparation von PBMC für die Multiparameter-Durchflusszytometrie 34
4.4 Probenauswertung 34
4.4.1 Leukozytenzahl und Differentialblutbild aus dem EDTA-Blut 34
4.4.2 Bestimmung von Entzündungsmediatoren im Serum und den Kulturüberständen. .35
4.4.2.1 Enzym-linked Immunosorbent Assay (ELISA) 35
4.4.2.2 Immunoturbidimetrie-Kit Tina-quant 37
4.4.3 Lymphozytenproliferationsassay 38
4.4.4 Multiparameter-Durchflusszytometrie 39
4.4.4.1 Übersicht 39
4.4.4.2 Prinzip des Nachweises von Oberflächenantikörper 39
4.4.4.3 Datenakquisition, Datenanalyse und interne Qualitätskontrolle 40
4.5 Dokumentation und klinischer Verlauf 41
4.6 Statistische Auswertung 41
5. Ergebnisse 42
5.1 Demographische Daten und Vergleich der perioperativen Parameter der Studienpatienten42
5.2 Veränderungen der Leukozytenzahl und des Differentialblutbild im peripheren Blut 43
5.3 Veränderungen von pro-/antientzündlichen Mediatoren im Serum 47
5.3.1 IL-6 und C-reaktives Protein 47
5.3.2 Antientzündliche Mediatoren IL-lra und sTNF-Rl und -R2 50
5.4 Vergleich der phänotypischen Veränderungen von Monozyten und Lymphozyten 53
5.4.1 Monozyten 53
5.4.1.1 HLA-DR und CD64 Expression 53 f
5.4.1.2 In-vitro Produktion der Entzündungsmediatoren TNF-a und IL-6 56
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5.4.2.2 In-vitro Produktion der proentzündlichen Mediatoren IL-2 und IFN-y 60
5.4.2.3 In-vitro Produktion des antientzündlichen Mediators IL-4 62
5.5 Vergleich der klinischen Verlaufsparameter der Studienpatienten (Komplikationen) 63
6. Diskussion 65
7. Zusammenfassung, Bewertung und Ausblick ^8
8. Literaturverzeichnis 80
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