Untersuchungen zur Genotoxizität und Zytotoxizität von Zahnwerkstoffen in humanen Speicheldrüsen und Lymphozyten mithilfe der Einzelzell-Mikrogelelektrophorese:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Grundlagen der Malignomentstehung 1
1.1.1 Phasen der Kanzerogenese 1
1.1.2 Exogene Faktoren 1
1.1.3 Endogene Faktoren 2
1.2 Maligne Erkrankungen der Glandula parotidea und Lymphozyten 2
1.3 Zahnfüllungen als Fremdstoffe im menschlichen Körper 4
1.3.1 Amalgamfüllungen 4
1.3.2 Kompositfüllungen 5
1.4 Nachweis genotoxischer Effekte mit der Einzetzell- Mikrogelelektrophorese 8
1.5 Arbeitshypothese und Zielsetzung der Studie 9
2 Material und Methoden 10
2.1 Patientengut 10
2.2 Zellmaterial 12
2.2.1 Gewebeproben der Gl. parotidea 12
2.2.2 Vollblut 12
2.3 Zellseparation zur Einzelzellgewinnung 12
2.3.1 Mechanische und enzymatische Separation 12
2.3.2 Dichtegradientenzentrifugation 13
2.4 Vitalrtätstestung und Zellzählung mithilfe des Trypanblauausschlusstestes14
2.4.1 Drüsenzellen 15
2.4.2 Lymphozyten 15
2.5 Inkubation der Einzelzellsuspensionen mit den Schadstoffen 15
Quecksilberdichlorid, Triethyten-Glycol-Dimethacrylat, Urethan- 15
Dimethacrylat, Hydroxyethyl-Methacrylat 15
Inhaltsverzeichnis
2.5.1 Untersuchte Schadstoffe und Schadstoffkonzentrationen 15
2.5.2 Inkubationsablauf und Darstellung der Inkubation 17
2.6. Methodik des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays 19
2.6.1 Präparation der Objektträger 21
2.6.2 Aufbringen der Zellen auf Objektträger 21
2.6.3 Auftrennung der Kern- und Zellmembranen 21
2.6.4 Entspiralisierung der DNA-Helixstruktur im alkalischen Milieu 22
2.6.5 Elektrophoretische Auftrennung der DNA-Fragmente 22
2.6.6 Neutralisation 22
2.6.7 Fluoreszenzfärbung mit Ethidiumbromid 22
2.7 Fluoreszenzmikroskopische Analyse und Datenspeicherung 23
2.8 Graphische Darstellung der Ergebnisse und statistische Analyse 24
2.8.1 Darstellung in Boxplots 24
2.8.2 Statistische Testverfahren 24
2.9 Materialien und technische Geräte 26
2.9.1 Reagenzien 26
2.9.2 Arbeitsmaterialien 27
2.9.3 Technische Ausstattung 28
3 Ergebnisse 29
3.1 Exemplarische Darstellung der DNA-Schädigung 29
3.2 Quecksilberdichlorid 30
3.2.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 31
3.2.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 34
3.3 Triethylen-Glycol-Dimethacrylat 36
3.3.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 36
3.3.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 39
3.4 Urethan-Oimethacrylat 42
3.4.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 42
Inhaltsverzeichnis
3.4.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 45
3.5 Hydroxyethyl-Methacrylal 47
3.5.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 47
3.5.2 Genotoxische und zytoxische Effekte in Lymphozyten 50
3.6 Vergleich der Mutagensensitivitat von Drüsenzellen und Lymphozyten 52
3.6.1 Quecksilberchlorid 52
3.6.2 Triethylen-Glycol-Dimethacrylat 52
3.6.3 Urethan-Dimethacrylat 53
3.6.4 Hydroxyethyl-Methacrylat 53
4 Diskussion 54
4.1 Zur Auswahl des Patientengutes 54
4.2 Ober die eingesetzten Zellmaterialton 54
4.3 Zur Wertigkeit des Comet Assays als Genotoxizitätstest 56
4.4 Zur Bedeutung des Quecksilberdichlorids als Xenobiotikum 58
4.4.1 Aufnahmewege, Metabolisierung, Toxikokinetik und Exposition 59
4.4.3 Freisetzung aus den Füllungen 60
4.4.4 Zytotoxizität 61
4.4.5 Apoptose 62
4.4.6 Genotoxizität 63
4.5 Zur Bedeutung der Methacrylate als Xenobioüka 65
4.5.1 Aufnahmewege, Metabolisierung, Toxikokinetik und Exposition 65
4.5.3 Freisetzung aus den Füllungen 66
4.5.4 Zytotoxizität 67
4.5.5 Apoptose 68
4.5.6 Genotoxizität 68
4.6 Mutagensensitivitat von Drüsenzellen und Lymphozyten 70
4.7 Kritische Beurteilung und Ausblick 70
Inhaltsverzeichnis
5 Zusammenfassung 72
6 Anhang 73
6.1 Literaturverzeichnis 73
6.2 Abkürzungsverzeichnis 84
6.3 Abbildungsverzeichnis 85
6.4 KongressbertrSge und Originalarbeiten 86
6.4.1 Kongressbeiträge 86
6.4.2 Originalarbeiten 86
6.5 Lebenslauf 87
6.6 Danksagung 88
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Grundlagen der Malignomentstehung 1
1.1.1 Phasen der Kanzerogenese 1
1.1.2 Exogene Faktoren 1
1.1.3 Endogene Faktoren 2
1.2 Maligne Erkrankungen der Glandula parotidea und Lymphozyten 2
1.3 Zahnfüllungen als Fremdstoffe im menschlichen Körper 4
1.3.1 Amalgamfüllungen 4
1.3.2 Kompositfüllungen 5
1.4 Nachweis genotoxischer Effekte mit der Einzetzell- Mikrogelelektrophorese 8
1.5 Arbeitshypothese und Zielsetzung der Studie 9
2 Material und Methoden 10
2.1 Patientengut 10
2.2 Zellmaterial 12
2.2.1 Gewebeproben der Gl. parotidea 12
2.2.2 Vollblut 12
2.3 Zellseparation zur Einzelzellgewinnung 12
2.3.1 Mechanische und enzymatische Separation 12
2.3.2 Dichtegradientenzentrifugation 13
2.4 Vitalrtätstestung und Zellzählung mithilfe des Trypanblauausschlusstestes14
2.4.1 Drüsenzellen 15
2.4.2 Lymphozyten 15
2.5 Inkubation der Einzelzellsuspensionen mit den Schadstoffen 15
Quecksilberdichlorid, Triethyten-Glycol-Dimethacrylat, Urethan- 15
Dimethacrylat, Hydroxyethyl-Methacrylat 15
Inhaltsverzeichnis
2.5.1 Untersuchte Schadstoffe und Schadstoffkonzentrationen 15
2.5.2 Inkubationsablauf und Darstellung der Inkubation 17
2.6. Methodik des Einzelzell-Mikrogelelektrophorese-Assays 19
2.6.1 Präparation der Objektträger 21
2.6.2 Aufbringen der Zellen auf Objektträger 21
2.6.3 Auftrennung der Kern- und Zellmembranen 21
2.6.4 Entspiralisierung der DNA-Helixstruktur im alkalischen Milieu 22
2.6.5 Elektrophoretische Auftrennung der DNA-Fragmente 22
2.6.6 Neutralisation 22
2.6.7 Fluoreszenzfärbung mit Ethidiumbromid 22
2.7 Fluoreszenzmikroskopische Analyse und Datenspeicherung 23
2.8 Graphische Darstellung der Ergebnisse und statistische Analyse 24
2.8.1 Darstellung in Boxplots 24
2.8.2 Statistische Testverfahren 24
2.9 Materialien und technische Geräte 26
2.9.1 Reagenzien 26
2.9.2 Arbeitsmaterialien 27
2.9.3 Technische Ausstattung 28
3 Ergebnisse 29
3.1 Exemplarische Darstellung der DNA-Schädigung 29
3.2 Quecksilberdichlorid 30
3.2.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 31
3.2.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 34
3.3 Triethylen-Glycol-Dimethacrylat 36
3.3.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 36
3.3.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 39
3.4 Urethan-Oimethacrylat 42
3.4.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 42
Inhaltsverzeichnis
3.4.2 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Lymphozyten 45
3.5 Hydroxyethyl-Methacrylal 47
3.5.1 Genotoxische und zytotoxische Effekte in Drüsenzellen der Gl. parotidea 47
3.5.2 Genotoxische und zytoxische Effekte in Lymphozyten 50
3.6 Vergleich der Mutagensensitivitat von Drüsenzellen und Lymphozyten 52
3.6.1 Quecksilberchlorid 52
3.6.2 Triethylen-Glycol-Dimethacrylat 52
3.6.3 Urethan-Dimethacrylat 53
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4 Diskussion 54
4.1 Zur Auswahl des Patientengutes 54
4.2 Ober die eingesetzten Zellmaterialton 54
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4.4.4 Zytotoxizität 61
4.4.5 Apoptose 62
4.4.6 Genotoxizität 63
4.5 Zur Bedeutung der Methacrylate als Xenobioüka 65
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4.5.3 Freisetzung aus den Füllungen 66
4.5.4 Zytotoxizität 67
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4.6 Mutagensensitivitat von Drüsenzellen und Lymphozyten 70
4.7 Kritische Beurteilung und Ausblick 70
Inhaltsverzeichnis
5 Zusammenfassung 72
6 Anhang 73
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