Untersuchungen zur Regulation der Prostaglandinsynthese im bovinen Ovidukt:
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Berlin
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| Series: | Veterinärmedizin
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung und Aufgabenstellung 9
2 Literaturübersicht 11
2.1 Sexualzyklus der Kuh 11
2.2 Das bovine Ovidukt 12
2.2.1 Anatomie und Histologie 12
2.2.2 Funktion des Ovidukts 13
2.3 Prostaglandine 13
2.3.1 Phospholipasen A2 (PLA2) 16
2.3.2 Cyclooxygenasen (COX) 17
2.3.2.1 COX-1 18
2.3.2.2 COX-2 18
2.3.3 PGEj und PGE2-Synthasen (cPGES; mPGES-1; mPGES-2) 19
2.3.4 PGFja und PGF2a-Synthasen (PGFS; HSD) 20
2.3.5 PGD2 und PGD2-Synthasen (H-PGDS; L-PGDS) 21
2.3.6 PGI2 und PGI^Synthasen (PGIS) 22
3 Material 24
3.1 Tiermaterial 24
3.2 Reagenzien 24
3.3 Kits 27
3.4 Enzyme 28
3.5 Antikörper 28
3.6 Marker/Standards 29
3.7 Primer 29
3.8 Verbrauchsmaterialien 31
3.9 Geräte 32
3.10 Rezepte 34
4 Methodik 38
4.1 Gewinnung der Ovidukte 38
4.2 Präparation der Ovidukte und Gewinnung der Oviduktzelten fur die in vivo Untersuchungen 39
4.3 Gewinnung der Oviduktzelten für Zellkulturversuche (in vitro) 39
4.4 Präparation der Ovidukte für die Immunhistologie 40
4.5 Gewinnung der Oviduktzelten für den COX-Akthntätstest 40
Inhaltsverzeichnis
4.6 RNA-Extraktion 40
4.7 Denaturierendes RNA-Agarose-Gel 41
4.8 Reverse Transkription mit DNase-Verdau 42
4.9 Gradienten-PCR zur Ermittlung der primerspezifischen Temperaturoptima 42
4.10 DNA-Agarosegel-Elektrophorese 43
4.11 Aufreinigung der PCR-Produkte 44
4.12 Sequenzierung der PCR-Produkte 45
4.13 Real-Time-PCR mittels SYBR Green 46
4.14 Immunhistologie 48
4.15 Proteinextraktion 49
4.16 SDS-PAGE 50
4.17 Western Blot 50
4.18 Western Blot Detektion 51
4.19 Zellkultur 52
4.20 COX-Aktivitätstest 52
4.21 Statistische Auswertung 54
5 Ergebnisse 55
5.1 18SrRNA 56
5.2 Sekretorische PLAJB (sPLA2IB) 58
5.3 Cytosolische PLA¿a (cPLA2a) 60
5.4 Cytosolische PLAjß (cPLA2ß) 62
5.5 Cyclooxygenase 1 (COX-1) 65
5.6 Cydooxygenase 2 (COX-2) 69
5.7 Cyclooxygenase-Aktivität 74
5.8 Cytosolische PGErSynthase (cPGES) 75
5.9 Membrangebundene PGE2-Synthase 1 (mPGES-1) 77
5.10 Membrangebundene PGErSynthase 2 (mPGES-2) 81
5.11 20a-Hydroxysteroid-Dehydrogenase (HSD) 83
5.12 PGFjo-Synthase (PGFS) 86
5.13 Hamatopoetische PGDz-Synthase (H-PGDS) 89
5.14 Lipocalintyp PGOj-Synthase (L-PGDS) 91
5.15 PGIz-Synthase (PGIS) 93
6 Diskussion
6.1 Tiermaterial und Methodik
6.2 Phospholipasen
6.3 Cyclooxygenasen
6.4 PGE2 und PGE2-Synthasen
6.5 PGF2a und PGFto-Synthasen
6.6 PGD2 und PGD2-Synthasen
6.7 PGI2 und PGl2-Synthase
6.8 Schlußfolgerung
6.9 Ausblick
7 Zusammenfassung
8 Summary
Literaturverzeichnis
95
95
98
101
104
106
107
108
110
111
114
116
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