Untersuchungen über die Rolle der extrazellulären Matrix in frühen und späten Läsionen im Rückenmark von Mäusen nach experimenteller Infektion mit dem murinen Theiler-Enzephalomyelitisvirus:
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Gießen
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2006
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURÜBERSICHT 3
2.1 Die murine Theilervirus-Enzephalomyelitis als Modell für Multiple Sklerose 3
2.2 Extrazelluläre Matrix (EZM) 9
2.2.1 EZM im zentralen Nervensystem 10
2.2.2 Faserproteine 11
2.2.2.1 Kollagene 11
2.2.3 Glykoproteine 13
2.2.3.1 Entactin 13
2.2.3.2 Fibronektin 13
2.2.3.3 Laminin 14
2.2.3.4 Tenascin 15
2.2.4 Proteoglykane 16
2.2.4.1 Aggrecan 17
2.2.4.2 Brevican 17
2.2.4.3 Decorin 18
2.2.4.4 Neurocan 18
2.2.4.5 Perlecan 19
2.2.4.6 Phosphacan 20
2.2.5 Histochemische Nachweismethoden 20
2.3 Die EZM bei demyelinisierenden Erkrankungen 23
2.3.1 Multiple Sklerose (MS) 23
2.3.2 Experimentelle allergische Enzephalomyelitis (EAE) 24
3 MATERIAL UND METHODEN 27
3.1 Untersuchte Mäuse 27
3.2 Gewebeproben 28
3.2.1 Paraffin-eingebettete, Formalin-fixierte Proben 28
3.2.2 OCT-eingebettete Gefrierproben 28
3.3 Histochemie 29
3.3.1 Azan-Färbung nach Heidenhain 29
3.3.2 Pikrosiriusrot-Färbung 29
3.3.3 Perjodsäure-Schiff-Färbung 30
3.3.4 Versilberung nach Gomori 31
3.4 Immunhistologie 32
3.4.1 Antikörper und Seren 32
3.4.2 Protokolle für die Immunhistologie an Paraffinschnitten 34
3.4.2.1 Protokoll für den Nachweis von Aggrecan, Kollagen I und IV, Decorin,
Fibronektin und Laminin 34
3.4.2.2 Protokoll für den Nachweis von Brevican, Phosphacan und Neurocan
mit dem DakoARK 36
3.4.3 Protokoll für die Immunhistologie an Gefrierschnitten 37
3.4.4 Kontrollen 38
3.5 Auswertung der Histochemie und Immunhistologie 39
3.5.1 Lichtmikroskopisch 39
3.5.2 Morphometrisch 39
3.6 Statistische Auswertung 39
4 ERGEBNISSE 41
4.1 Histologie (HE- und Luxol Fast Blue-Färbung) 41
4.2 Histochemische Untersuchungsergebnisse 42
4.2.1 Azan-Färbung nach Heidenhain 42
4.2.2 Pikrosiriusrot-Färbung 43
4.2.3 Perjodsäure-Schiff (PAS)-Färbung 46
4.2.4 Versilberung nach Gomori 47
4.3 Immunhistologische Untersuchungsergebnisse 49
4.3.1 Aggrecan 49
4.3.2 Brevican 50
4.3.3 Decorin 51
4.3.4 Entactin 52
4.3.5 Fibronektin 54
4.3.6 Kollagen 1 55
4.3.7 Kollagen IV 56
4.3.8 Laminin 58
4.3.9 Neurocan 59
4.3.10 Perlecan 60
4.3.11 Phosphacan 62
4.3.12 Tenascin 63
4.4 Lichtmikroskopische Abbildungen 65
5 DISKUSSION 79
5.1 Histologie 79
5.2 Histochemischer Nachweis von Extrazellularsubstanz 80
5.3 Immunhistologischer Nachweis einzelner Matrixmoleküle 86
5.4 Schlussfolgerungen 98
6 ZUSAMMENFASSUNG 101
7 SUMMARY 105
8 LITERATURVERZEICHNIS 107
9 ANHANG 121
9.1 Bezugsquellen für Reagenzien, Chemikalien und Antikörper 121
9.2 Bezugsquellen für Geräte und Einmalartikel 123
9.3 Lösungen und Puffer 125
9.3.1 Lösungen für die Spezialfärbungen 125
9.3.1.1 Lösungen für die Azan-Färbung nach Heidenhain 125
9.3.1.2 Lösungen für die Pikrosiriusrot-Färbung 126
9.3.1.3 Lösungen für die Perjodsäure-Schiff-Reaktion 127
9.3.1.4 Lösungen für die Versilberung nach Gomori 127
9.3.2 Lösungen für die Immunhistologie 128
9.4 Tabellen 129
9.5 Abkürzungen 140
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURÜBERSICHT 3
2.1 Die murine Theilervirus-Enzephalomyelitis als Modell für Multiple Sklerose 3
2.2 Extrazelluläre Matrix (EZM) 9
2.2.1 EZM im zentralen Nervensystem 10
2.2.2 Faserproteine 11
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2.2.4.6 Phosphacan 20
2.2.5 Histochemische Nachweismethoden 20
2.3 Die EZM bei demyelinisierenden Erkrankungen 23
2.3.1 Multiple Sklerose (MS) 23
2.3.2 Experimentelle allergische Enzephalomyelitis (EAE) 24
3 MATERIAL UND METHODEN 27
3.1 Untersuchte Mäuse 27
3.2 Gewebeproben 28
3.2.1 Paraffin-eingebettete, Formalin-fixierte Proben 28
3.2.2 OCT-eingebettete Gefrierproben 28
3.3 Histochemie 29
3.3.1 Azan-Färbung nach Heidenhain 29
3.3.2 Pikrosiriusrot-Färbung 29
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3.3.4 Versilberung nach Gomori 31
3.4 Immunhistologie 32
3.4.1 Antikörper und Seren 32
3.4.2 Protokolle für die Immunhistologie an Paraffinschnitten 34
3.4.2.1 Protokoll für den Nachweis von Aggrecan, Kollagen I und IV, Decorin,
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3.4.2.2 Protokoll für den Nachweis von Brevican, Phosphacan und Neurocan
mit dem DakoARK 36
3.4.3 Protokoll für die Immunhistologie an Gefrierschnitten 37
3.4.4 Kontrollen 38
3.5 Auswertung der Histochemie und Immunhistologie 39
3.5.1 Lichtmikroskopisch 39
3.5.2 Morphometrisch 39
3.6 Statistische Auswertung 39
4 ERGEBNISSE 41
4.1 Histologie (HE- und Luxol Fast Blue-Färbung) 41
4.2 Histochemische Untersuchungsergebnisse 42
4.2.1 Azan-Färbung nach Heidenhain 42
4.2.2 Pikrosiriusrot-Färbung 43
4.2.3 Perjodsäure-Schiff (PAS)-Färbung 46
4.2.4 Versilberung nach Gomori 47
4.3 Immunhistologische Untersuchungsergebnisse 49
4.3.1 Aggrecan 49
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4.3.10 Perlecan 60
4.3.11 Phosphacan 62
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4.4 Lichtmikroskopische Abbildungen 65
5 DISKUSSION 79
5.1 Histologie 79
5.2 Histochemischer Nachweis von Extrazellularsubstanz 80
5.3 Immunhistologischer Nachweis einzelner Matrixmoleküle 86
5.4 Schlussfolgerungen 98
6 ZUSAMMENFASSUNG 101
7 SUMMARY 105
8 LITERATURVERZEICHNIS 107
9 ANHANG 121
9.1 Bezugsquellen für Reagenzien, Chemikalien und Antikörper 121
9.2 Bezugsquellen für Geräte und Einmalartikel 123
9.3 Lösungen und Puffer 125
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9.3.1.4 Lösungen für die Versilberung nach Gomori 127
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