Anreicherung Phospholipase A2-bindender Zellen aus peripherem Blut mittels magnetischer Hochgradientensortierung:
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2006
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis I
Abkürzungsverzeichnis III
1. EINLEITUNG 1
1.1 Die Insektengiftallergie 1
1.2 Die Zusammensetzung des Bienengifts 3
1.3 Die Klinik der Stichreaktion 4
1.4 Diagnostik und Therapie der Insektengiftallergien 7
1.5 Pathomechanismen der allergischen Reaktion 11
1.6 Die magnetische Zellsortierung (MACS) 15
2. AUFGABENSTELLUNG 18
3. PATIENTEN 20
4. MATERIAL UND METHODEN 22
4.1 Material 22
4.1.1 Allgemein verwendete Materialien und Geräte 22
4.1.2 DotBlot 22
4.1.3 Ficoll-Separation 23
4.1.4 Magnetische Zellseparation 23
4.1.5 Zellfärbungen 23
4.1.6 FACScan-Analyse 23
4.1.7 Zellzählungen 24
4.1.8 Zytospin-Zentrifugation 24
4.1.9 Pappenheim-Färbung 24
4.2 Methoden 24
4.2.1 Western blot 24
4.2.1.1 Antigen-Transfer 25
4.2.1.2 Inkubation mit den Antikörpern 26
4.2.1.3 Detektion 27
4.2.2 Ficoll-Separation 27
4.2.3 Magnetische Zellseparation 29
4.2.3.1 Vorbereitende Zellmarkierung 31
4.2.3.2 Magnetische Zellsortierung (MACS) 33
4.2.4 Zellfärbungen 34
4.2.4.1 Oberflächenmarkierungen mit Anti-CD19- und
Anti-CD38-Antikörpern 35
4.2.4.2 IgG-Subklassen- und IgE-Färbungen 36
4.2.5 FACScan-Analyse 36
4.2.6 Zellzählungen 40
4.2.7 Histologische Beurteilung der separierten Zellen 41
4.2.7.1 Zytospin-Zentrifugation 41
I
4.2.7.2 Färbungen nach Pappenheim 42
5. ERGEBNISSE 43
5.1 Allergiesymptomatik 43
5.2 Nachweis der Sensibilisierung 44
5.2.1 Intrakutantestung mit Bienengift 44
5.2.2 Nachweis von bienengiftspezifischem IgE und IgG im
Serum 47
5.3 Nachweis von PLA2-spezifischen
IgE-Antikörpem im Dot Blot 52
5.4 Anreicherung antigenspezifischer Zellen aus
peripherem Blut (MACS) 55
5.5 Phänotypische Charakterisierung der
allergenbindenden Zellen 60
5.5.1 OberflächenantigeneCD19undCD38 60
5.5.2 Oberflächengebundene Immunglobuline 66
5.6 Zellmorphologie 70
6. DISKUSSION 73
6.1. Diagnostik 73
6.1.1 Allergiesymptomatik 73
6.1.2 Intrakutantestung 74
6.1.3 Bienengiftspezifische Antikörper 76
6.2 PLA2-spezifische Antikörper 78
6.3 Magnetische Zellsortierung (MACS) 80
6.4. Oberflächenantigene und Zellcharakterisierung 85
6.5 Zellgebundene Immunglobuline 87
7. ZUSAMMENFASSUNG 91
8. LITERATURVERZEICHNIS 93
II
|
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INHALTSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis I
Abkürzungsverzeichnis III
1. EINLEITUNG 1
1.1 Die Insektengiftallergie 1
1.2 Die Zusammensetzung des Bienengifts 3
1.3 Die Klinik der Stichreaktion 4
1.4 Diagnostik und Therapie der Insektengiftallergien 7
1.5 Pathomechanismen der allergischen Reaktion 11
1.6 Die magnetische Zellsortierung (MACS) 15
2. AUFGABENSTELLUNG 18
3. PATIENTEN 20
4. MATERIAL UND METHODEN 22
4.1 Material 22
4.1.1 Allgemein verwendete Materialien und Geräte 22
4.1.2 DotBlot 22
4.1.3 Ficoll-Separation 23
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4.1.5 Zellfärbungen 23
4.1.6 FACScan-Analyse 23
4.1.7 Zellzählungen 24
4.1.8 Zytospin-Zentrifugation 24
4.1.9 Pappenheim-Färbung 24
4.2 Methoden 24
4.2.1 Western blot 24
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4.2.1.2 Inkubation mit den Antikörpern 26
4.2.1.3 Detektion 27
4.2.2 Ficoll-Separation 27
4.2.3 Magnetische Zellseparation 29
4.2.3.1 Vorbereitende Zellmarkierung 31
4.2.3.2 Magnetische Zellsortierung (MACS) 33
4.2.4 Zellfärbungen 34
4.2.4.1 Oberflächenmarkierungen mit Anti-CD19- und
Anti-CD38-Antikörpern 35
4.2.4.2 IgG-Subklassen- und IgE-Färbungen 36
4.2.5 FACScan-Analyse 36
4.2.6 Zellzählungen 40
4.2.7 Histologische Beurteilung der separierten Zellen 41
4.2.7.1 Zytospin-Zentrifugation 41
I
4.2.7.2 Färbungen nach Pappenheim 42
5. ERGEBNISSE 43
5.1 Allergiesymptomatik 43
5.2 Nachweis der Sensibilisierung 44
5.2.1 Intrakutantestung mit Bienengift 44
5.2.2 Nachweis von bienengiftspezifischem IgE und IgG im
Serum 47
5.3 Nachweis von PLA2-spezifischen
IgE-Antikörpem im Dot Blot 52
5.4 Anreicherung antigenspezifischer Zellen aus
peripherem Blut (MACS) 55
5.5 Phänotypische Charakterisierung der
allergenbindenden Zellen 60
5.5.1 OberflächenantigeneCD19undCD38 60
5.5.2 Oberflächengebundene Immunglobuline 66
5.6 Zellmorphologie 70
6. DISKUSSION 73
6.1. Diagnostik 73
6.1.1 Allergiesymptomatik 73
6.1.2 Intrakutantestung 74
6.1.3 Bienengiftspezifische Antikörper 76
6.2 PLA2-spezifische Antikörper 78
6.3 Magnetische Zellsortierung (MACS) 80
6.4. Oberflächenantigene und Zellcharakterisierung 85
6.5 Zellgebundene Immunglobuline 87
7. ZUSAMMENFASSUNG 91
8. LITERATURVERZEICHNIS 93
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