Untersuchungen zum IFN-gamma-Konzept der sportinduzierten Immunsuppression:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
1. ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS V
2. TABELLENVERZEICHNIS VII
3. ABBILDUNGSVERZEICHNIS VIII
4. EINLEITUNG 1
4.1. Hinführung zum Thema 1
4.2. Sportinduzierte Immunreaktionen 2
4.2.1. Sportinduzierte Modulationen der peripheren Zellpopulationen 2
4.2.2. Sportinduzierte Zytokinmodulationen 3
4.2.2.1. ... in Plasma und Serum 4
4.2.2.2. ... im Urin 5
4.2.2.3. In vitro Zytokinproduktion in Zellkulturen 6
4 2 3 Sportinduzierte hormoneile Veränderungen und deren Auswirkungen auf das
Immunsystem 7
4.3. Das IFN y Konzept 8
4.3.1. IFN Y 9
4.3.2. IFN Y regulierende Zytokine 11
4.3.2.1. IL 10 11
C Zytokininteraktionen 12
4.3.2.2. IL 12 13
(. Kinetik 13
4.3.2.3. IL 15 14
L Biologische Aktivität 14
4.3.2.4. IL 18 15
4 3 3. Die Rolle von T und NK Zellen bei der sportinduzierten Immunsuppression 16
4.4. Ziel der Arbeit 18
5. PROBANDEN, MATERIAL UND METHODEN 19
5.1. Probanden 19
5.1.1.1. Sportstudie Tübingen: IL 10 im Urin Trainierte/Untrainierte im Vergleich 19
5.1.1.2. Freiburgstudie 1 20
II Inhaltsverzeichnis
5.1.1.3. Freiburgstudie II 21
5.1.2. Echinaceastudie 22
5.1.3. Blutproben 22
5.2. Materialien 23
5.2.1. Verbrauchsmaterialien und weitere Reagenzien 23
5.2.1.1. Medien, Zusätze, Stimulationsfaktoren für die Zellkultur 23
5.2.1.2. Material und Antikörper für die FACS Analyse 24
5.2.1.3. Material für die RNA Praparation/Transkription und PCR 24
5.2.1.4. Material für die magnetische Zellsortierung 25
5.2.1.5. Analysematerial für die Zytokinbestimmung 25
5.2.1.6. Feinchemikalien 27
5.2.1.7. Sonstige Lösungen und Zusätze 28
5.2.1.8. Verbrauchsmaterial 28
5.2.2. Geräte 29
5.3. Methoden 30
5.3.1. Zellkulturen 30
5.3.1.1. Präparation mononuklearer Zellen (MNC) 30
5.3.1.2. Zellkulturansatz 31
5.3.1.2.1. Modifizierung der Zellkulturansätze 31
5.3.1.3. Inkubationsbedingungen 34
5.3.1.4. Ablösung der adhärenten Zellen mittels Trypsin 34
5.3.2. Testprinzip des Enzymimmunoassays 35
5.3.3. Testprinzip der PCR (engl. Polymerase Chain Reaction) 35
5.3.3.1. RNA Praparation 37
5.3 3.2. Competitive Reverse Transkription Polymerase Kettenreaktion (RT PCR)... 38
5.3.3.3. Gel Elektrophorese von DNA 38
5.3.4. Magnetische Zellseparation (engl.: Magnetic Cell Sorting; MACS) 39
5.3.4.1. Grundlagen 39
5.3.4.2. Durchführung der magnetischen Zelltrennung 40
5.3.4.3. Durchflußzytometrie (eng.: Fluorescence Activated Cell Scan; FACS) 42
5.3.4.4. Direkte, indirekte und intrazellulare Immunfluoreszenz 42
5.3.4.5. Direkte FACS Markierung 42
5.3.4.6. Indirekte FACS Markierung 43
5.3.4.7. Intrazellulärer IFN y Nachweis im FACS 44
5.3.4.8. Datenauswertung 48
5.3.5. Statistik 48
5.3.5.1. Beschreibende Statistik: 49
Inhaltsverzeichnis III
5.3.5.2. Prüfende Statistik 50
5.3.5.2.1. Varianzanalyse 50
5.3.5.2.2. t Test bei abhangigen (oder verbundenen) Stichproben 51
5.3.5.2.3. Wilcoxon Vorzeichenrangtest 52
5.3.5.3. Vorzeichen Test 53
6. ERGEBNISSE 54
6.1. Versuch mit Echinacea 54
6.2. Suppressionsversuche 61
6.2.1. Wirkung von Adrenalin auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 61
6.2.2. Wirkung von Dexamethason auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 67
6.2.3. Wirkung von PGE2 auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 73
6.3. Modifizierte Versuche zur Wirkung von Adrenalin auf die Zytokinproduktion 79
6.3.1. Adrenalin induzierte frühe IL 10 Freisetzung 79
6.3.2. Kinetik der LPS induzierten IL 10 / IFN y Produktion in An bzw. Abwesenheit von
Adrenalin 79
6.3.3. Adrenalinwirkung auf die Zytokinproduktion bei Variation von Zugabezeitpunkt,
Inkubationszeit und Konzentration 82
6.4. Zelldepletion mit MACS aus Vollblut 91
6.5. Anti human Zytokine 96
6.6. Sportstudien 103
6.6.1. Freiburg Studie I 103
6.6.2. Freiburgstudie II 106
6.6.3. Sportstudie Tübingen 108
6.7. Intrazellulärer IFN y Nachwels mittels Durchflu zytometrie 110
6.8. IFN y mRNA Nachweis 110
6.9. Graphische Zusammenfassung der Ergebnisse: 112
7. DISKUSSION 11«
7.1. Echinacea 118
7.2. Suppressionsversuche 121
IV
Inhaltsverzeichnis
7.2.1. Adrenalin 121
7.2.2. Corbcosteroide 125
7.2.3. Prosfaglandin E2 131
7.3. Anti human Zytokine 135
7.4. Sportinduzierte Zytokinyeränderungon 138
7.5. IFN Y produzierende Zellen 143
8. ZUSAMMENFASSUNG 148
9. LITERATURVERZEICHNIS 149
10. ANHANG 193
Trainingsumfang
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis I
1. ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS V
2. TABELLENVERZEICHNIS VII
3. ABBILDUNGSVERZEICHNIS VIII
4. EINLEITUNG 1
4.1. Hinführung zum Thema 1
4.2. Sportinduzierte Immunreaktionen 2
4.2.1. Sportinduzierte Modulationen der peripheren Zellpopulationen 2
4.2.2. Sportinduzierte Zytokinmodulationen 3
4.2.2.1. . in Plasma und Serum 4
4.2.2.2. . im Urin 5
4.2.2.3. In vitro Zytokinproduktion in Zellkulturen 6
4 2 3 Sportinduzierte hormoneile Veränderungen und deren Auswirkungen auf das
Immunsystem 7
4.3. Das IFN y Konzept 8
4.3.1. IFN Y 9
4.3.2. IFN Y regulierende Zytokine 11
4.3.2.1. IL 10 11
C Zytokininteraktionen 12
4.3.2.2. IL 12 13
(." Kinetik 13
4.3.2.3. IL 15 14
L Biologische Aktivität 14
4.3.2.4. IL 18 15
4 3 3. Die Rolle von T und NK Zellen bei der sportinduzierten Immunsuppression 16
4.4. Ziel der Arbeit 18
5. PROBANDEN, MATERIAL UND METHODEN 19
5.1. Probanden 19
5.1.1.1. Sportstudie Tübingen: IL 10 im Urin Trainierte/Untrainierte im Vergleich 19
5.1.1.2. Freiburgstudie 1 20
II Inhaltsverzeichnis
5.1.1.3. Freiburgstudie II 21
5.1.2. Echinaceastudie 22
5.1.3. Blutproben 22
5.2. Materialien 23
5.2.1. Verbrauchsmaterialien und weitere Reagenzien 23
5.2.1.1. Medien, Zusätze, Stimulationsfaktoren für die Zellkultur 23
5.2.1.2. Material und Antikörper für die FACS Analyse 24
5.2.1.3. Material für die RNA Praparation/Transkription und PCR 24
5.2.1.4. Material für die magnetische Zellsortierung 25
5.2.1.5. Analysematerial für die Zytokinbestimmung 25
5.2.1.6. Feinchemikalien 27
5.2.1.7. Sonstige Lösungen und Zusätze 28
5.2.1.8. Verbrauchsmaterial 28
5.2.2. Geräte 29
5.3. Methoden 30
5.3.1. Zellkulturen 30
5.3.1.1. Präparation mononuklearer Zellen (MNC) 30
5.3.1.2. Zellkulturansatz 31
5.3.1.2.1. Modifizierung der Zellkulturansätze 31
5.3.1.3. Inkubationsbedingungen 34
5.3.1.4. Ablösung der adhärenten Zellen mittels Trypsin 34
5.3.2. Testprinzip des Enzymimmunoassays 35
5.3.3. Testprinzip der PCR (engl. Polymerase Chain Reaction) 35
5.3.3.1. RNA Praparation 37
5.3 3.2. Competitive Reverse Transkription Polymerase Kettenreaktion (RT PCR). 38
5.3.3.3. Gel Elektrophorese von DNA 38
5.3.4. Magnetische Zellseparation (engl.: Magnetic Cell Sorting; MACS) 39
5.3.4.1. Grundlagen 39
5.3.4.2. Durchführung der magnetischen Zelltrennung 40
5.3.4.3. Durchflußzytometrie (eng.: Fluorescence Activated Cell Scan; FACS) 42
5.3.4.4. Direkte, indirekte und intrazellulare Immunfluoreszenz 42
5.3.4.5. Direkte FACS Markierung 42
5.3.4.6. Indirekte FACS Markierung 43
5.3.4.7. Intrazellulärer IFN y Nachweis im FACS 44
5.3.4.8. Datenauswertung 48
5.3.5. Statistik 48
5.3.5.1. Beschreibende Statistik: 49
Inhaltsverzeichnis III
5.3.5.2. Prüfende Statistik 50
5.3.5.2.1. Varianzanalyse 50
5.3.5.2.2. t Test bei abhangigen (oder verbundenen) Stichproben 51
5.3.5.2.3. Wilcoxon Vorzeichenrangtest 52
5.3.5.3. Vorzeichen Test 53
6. ERGEBNISSE 54
6.1. Versuch mit Echinacea 54
6.2. Suppressionsversuche 61
6.2.1. Wirkung von Adrenalin auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 61
6.2.2. Wirkung von Dexamethason auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 67
6.2.3. Wirkung von PGE2 auf die LPS induzierte Zytokinproduktion 73
6.3. Modifizierte Versuche zur Wirkung von Adrenalin auf die Zytokinproduktion 79
6.3.1. Adrenalin induzierte frühe IL 10 Freisetzung 79
6.3.2. Kinetik der LPS induzierten IL 10 / IFN y Produktion in An bzw. Abwesenheit von
Adrenalin 79
6.3.3. Adrenalinwirkung auf die Zytokinproduktion bei Variation von Zugabezeitpunkt,
Inkubationszeit und Konzentration 82
6.4. Zelldepletion mit MACS aus Vollblut 91
6.5. Anti human Zytokine 96
6.6. Sportstudien 103
6.6.1. Freiburg Studie I 103
6.6.2. Freiburgstudie II 106
6.6.3. Sportstudie Tübingen 108
6.7. Intrazellulärer IFN y Nachwels mittels Durchflu zytometrie 110
6.8. IFN y mRNA Nachweis 110
6.9. Graphische Zusammenfassung der Ergebnisse: 112
7. DISKUSSION 11«
7.1. Echinacea 118
7.2. Suppressionsversuche 121
IV
Inhaltsverzeichnis
7.2.1. Adrenalin 121
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7.2.3. Prosfaglandin E2 131
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7.4. Sportinduzierte Zytokinyeränderungon 138
7.5. IFN Y produzierende Zellen 143
8. ZUSAMMENFASSUNG 148
9. LITERATURVERZEICHNIS 149
10. ANHANG 193
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