Zelluläre Immuntherapie des Bronchialkarzinoms: In-vitro-Expression der humanen reversen Transkriptase in dendritischen Zellen
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Seite
I. Einleituno
1. Immuntherapie und Telomeraseaktivrtät in Tumoren 1
2. Aufgabenstellung 7
II. Material und Methoden
1. Zelllinien 8
2. Kulturmedien und Zytokine 8
3. Patienten und gesunde Probanden 8
4. Gewinnung von mononukleären Zellen aus peripherem Blut 9
5. Herstellung von dendritischen Zellen 9
6. Kryokonservierung von Zellen 10
7. Plasmidpräparation 10
7.1. Plasmide 10
7.2. Transformation und Vervielfältigung der Plasmide in E.Coli 11
7.3. Plasmidaufreinigung 12
8. In vitro mRNA Transkription 13
9. Zelltransfektion 13
9.1. Transfektion von K562 13
9.2. Transfektion der DC 14
10. Durchflusszytometrische Untersuchungen 14
10.1. Durchflusszytometrische Untersuchung zur Charakterisierung der 15
Expression kostimulatorischer Moleküle und Maturationsmarker
aufDC
10.2. Durchflusszytometrische Untersuchung zur Messung der 16
Transfektionseffizienz mit GFP
11. Telomerasenachweise 16
11.1.TRAP-assay 16
11.2. Real Time quantitative PCR (Taqman) 17
12. Immunomagnetische Zellseparation 19
13. Selektion von DC 19
Seite
III. Ergebnisse
1. Herstellung von DC bei Gesunden und bei Patienten mit BC 21
2. DC-Ausreifung bei Gesunden und Patienten 22
3. Etablierung der Transfektbnsparameter mit K562 24
4. ElektrotransfektionvonDCmitGFP-mRNA 25
5. Elektrotransfektion von DC mit hTERT-mRNA 28
5.1. Real Time quantitative PCR (Taqman) und mRNA-Nachweis 28
5.2. Telomeraseaktivität in transfizierten Zellen 28
6. Auswirkungen der Elektrotransfektion mit mRNA auf die Ausreifung 30
der Zellen
IV. Diskussion
1. Dendritische Zellen in der Immuntherapie 32
2. Beladung von DC mit RNA 34
3. Immunität und Autoimmunität 37
4. Beispiele und Ausblicke für die Verwendung von hTERT exprimierenden 38
DC in der Immuntherapie
V. Zusammenfassung 40
VI. Literaturverzeichnis 42
VII. Danksagung 50
VIII. Lebenslauf 51
|
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Inhaltsverzeichnis
Seite
I. Einleituno
1. Immuntherapie und Telomeraseaktivrtät in Tumoren 1
2. Aufgabenstellung 7
II. Material und Methoden
1. Zelllinien 8
2. Kulturmedien und Zytokine 8
3. Patienten und gesunde Probanden 8
4. Gewinnung von mononukleären Zellen aus peripherem Blut 9
5. Herstellung von dendritischen Zellen 9
6. Kryokonservierung von Zellen 10
7. Plasmidpräparation 10
7.1. Plasmide 10
7.2. Transformation und Vervielfältigung der Plasmide in E.Coli 11
7.3. Plasmidaufreinigung 12
8. In vitro mRNA Transkription 13
9. Zelltransfektion 13
9.1. Transfektion von K562 13
9.2. Transfektion der DC 14
10. Durchflusszytometrische Untersuchungen 14
10.1. Durchflusszytometrische Untersuchung zur Charakterisierung der 15
Expression kostimulatorischer Moleküle und Maturationsmarker
aufDC
10.2. Durchflusszytometrische Untersuchung zur Messung der 16
Transfektionseffizienz mit GFP
11. Telomerasenachweise 16
11.1.TRAP-assay 16
11.2. Real Time quantitative PCR (Taqman) 17
12. Immunomagnetische Zellseparation 19
13. Selektion von DC 19
Seite
III. Ergebnisse
1. Herstellung von DC bei Gesunden und bei Patienten mit BC 21
2. DC-Ausreifung bei Gesunden und Patienten 22
3. Etablierung der Transfektbnsparameter mit K562 24
4. ElektrotransfektionvonDCmitGFP-mRNA 25
5. Elektrotransfektion von DC mit hTERT-mRNA 28
5.1. Real Time quantitative PCR (Taqman) und mRNA-Nachweis 28
5.2. Telomeraseaktivität in transfizierten Zellen 28
6. Auswirkungen der Elektrotransfektion mit mRNA auf die Ausreifung 30
der Zellen
IV. Diskussion
1. Dendritische Zellen in der Immuntherapie 32
2. Beladung von DC mit RNA 34
3. Immunität und Autoimmunität 37
4. Beispiele und Ausblicke für die Verwendung von hTERT exprimierenden 38
DC in der Immuntherapie
V. Zusammenfassung 40
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