Therapeutisches Drug Monitoring von Nukleosidalen Reverse Transkriptase Inhibitoren:
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Köln
Kölner Wissenschaftsverl.
2007
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GUIDO KRUSE THERAPEUTISCHES DRUG MONITORING VON NUKLEOSIDALEN REVERSE
TRANSKRIPTASE INHIBITOREN KOLNER WISSENSCHAFTSVERLAG KOLN 2007
INHALTSVERZEICHNIS REFLEXION UND DANK V INHALTSVERZEICHNIS VII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS XI TABELLENVERZEICHNIS XII ABKTIRZUNGSVERZEICHNIS
XIII 1 ELNLEITUNG 1 1.1 DIE HIV-THERAPIE 1 1.2 RATIONALE FUR DAS
THERAPEUTISCHE DRUG MONITORING IN DER HIV-THERAPIE 3 1.3 WIRKMECHANISMUS
DER NUKLEOSIDALEN REVERSE TRANSKRIPTASE INHIBITOREN (NRTI) 4 1.4
PHARMAKOKINETIK DER NUKLEOSIDALEN REVERSE TRANSKRIPTASE INHIBITOREN
(NRTI) 5 1.4.1 THYMIDINANALOGA 5 1.4.1.1 ZIDOVUDIN, ZDV - RETROVIR 6 6
1.4.1.2 STAVUDIN, D4T-ZERIT* 6 1.4.2 CYTIDINANALOGA 7 1.4.2.1
ZALCITABIN, DDC-HIVID 6 7 1.4.2.2 LAMIVUDIN, 3TC - EPIVIR 7 1.4.2.3
EMTRICITABIN, FTC- EMTRIVAF 8 1.4.3 GUANOSINANALOGA 8 1.4.3.1 ABACAVIR,
ABC - ZIAGENS 8 1.4.4 ADENOSINANALOGA 9 1.4.4.1 DIDANOSIN, DDL - ZERIT"
10 1.4.4.2 TENOFOVIR, TDF-VIREAD* 10 1.5 METHODEN ZUR EXTRAZELLULAREN
MESSUNG VON NRTI IN PLASMA UNTER BESONDERER BERUCKSICHTIGUNG DES
TENOFOVIR 10 1.6 METHODEN ZUR INTRAZELLULAREN BESTIMMUNG VON
NRTI-TRIPHOSPHATEN IN PERIPHEREN MONONUKLEAREN ZELLEN (PBMC) 11 1.7
BISHERIGE RESULTATE DER INTRAZELLULAREN BESTIMMUNG VON
NRTI-TRIPHOSPHATEN AN PROBENMATERIAL VON HIV-INFIZIERTEN PATIENTEN ODER
PROBANDEN 13 1.8 FRAGESTELLUNGEN UND ZIELE DER ARBEIT 19 MATERIAL UND
METHODEN 21 2.1 BLUTPROBEN 21 2.2 METHODENENTWICKLUNG ZUR
EXTRAZELLULAREN ANALYTIK DER NRTI 21 2.2.1 DIE MOGLICHST QUANTITATIVE
EXTRAKTION DER WIRKSTOFFE AUS PATIENTENPLASMA 22 2.2.1.1 BLUTENTNAHME 22
2.2.1.2 PLASMAAUFBEREITUNG 22 2.2.1.3 AUFBEREITUNG DER PLASMAPROBEN ZUR
SIMULTANEN MESSUNG VON PROTEASE INHIBITOREN UND NRTI 23 2.2.2 DIE
UMWANDLUNG DER PROBE IN EINE IN DAS HPLC SYSTEM APPLIZIERBARE FORM 24
2.2.3 ENTWICKLUNG EINER CHROMATOGRAPHISCHEN METHODE ZUR TRENNUNG DER
ANALYTE VON ENDOGENEN SUBSTANZEN UND ANDEREN STORFAKTOREN 24 2.2.4
ENTWICKLUNG DER DETEKTIONSMETHODE ALLER NRTI DURCH DAS
MASSENSPEKTROMETER 25 2.2.5 VALIDIERUNG DER TENOFOVIR-METHODE AUS PLASMA
26 2.3 METHODENENTWICKLUNG ZUR INTRAZELLULAREN ANALYTIK DER NRTI 30
2.3.1 DIE MOGLICHST QUANTITATIVE EXTRAKTION DER NRTI-TRIPHOSPHATE AUS
PMBC UNTER VERMEIDUNG VON ABBAUVORGANGEN 31 2.3.1.1 BLUTENTNAHME 31
2.3.1.2 PREPARATION VON MONONUKLEAREN ZELLEN ZUR HERSTELLUNG VON
LEERPROBEN AUS PERIPHEREM BLUT 31 2.3.1.3 WASCHEN DER ZELLEN 32 2.3.1.4
ZAHLEN DER PBMC, BESTIMMUNG DER ZELLDICHTE UND ZELLVITALITAT 32 2.3.1.5
GEWINNUNG VON PBMC ZUR HERSTELLUNG VON EICHGERADEN UND
QUALITATSKONTROLLEN 33 2.3.1.6 PBMC-GEWINNUNG UND PROBENAUFBEREITUNG ZUR
MESSUNG VON NRTI-TP 34 2.3.2 DIE UMWANDLUNG DER PROBE IN EINE IN DAS
HPLC SYSTEM APPLIZIERBARE FORM 36 2.3.2.1 VERSUCHE ZUR EXTRAKTION DER
NRTI-TRIPHOSPHATE AUS PBMC 36 2.3.2.2 ARBEITSANWEISUNG 39 2.3.3
ENTWICKLUNG EINER CHROMATOGRAPHISCHEN METHODE ZURTRENNUNG DER NRTI-TP
VON ENDOGENEN SUBSTANZEN UND ANDEREN STORFAKTOREN 40 2.3.3.1 VERSUCHE
ZUR OPTIMIERUNG DER LOSUNGSMITTEL 40 2.3.4 ENTWICKLUNG EINER
MASSENSPEKTROSKOPISCHEN METHODE ZUR ANALYSE VON NRTI-TRIPHOSPHATEN 41
2.3.4.1 GRUPPENSPEZIFISCHE EINSTELLUNGEN DES MASSENSPEKTROMETERS 43
2.3.4.2 EINSTELLUNGEN DES PROBENAUFGEBERS UND DER PROBENSCHLEIFE 46
2.3.4.3 HERSTELLUNG VON EICHGERADEN UND QUALITATSKONTROLLPROBEN ZUR
BESTIMMUNG DER NRTI-TP 47 2.3.4.4 ABBILDUNGEN DER CHROMATOGRAMME 48
2.3.4.5 ADDENDUM 53 2.3.5 VALIDIERUNG DER NRTI-TP METHODE 55 3
ERGEBNISSE 61 3.1 ERGEBNISSE DER ANWENDUNG DER METHODE ZUR
EXTRAZELLULAREN ANALYTIK DER NRTI 61 3.1.1 TENOFOVIR-NELFINAVIR
INTERAKTIONSSTUDIE 61 3.1.2 TENOFOVIR-FOSAMPRENAVIR INTERAKTIONSSTUDIE
63 3.2 ERGEBNISSE DER ANWENDUNG DER METHODE ZUR INTRAZELLULAREN ANALYTIK
DER NRTI-TRIPHOSPHATE 67 3.2.1 NRTI-TP KONZENTRATIONEN BEI
HIV-INFIZIERTEN PATIENTEN DES VIVANTES AUGUSTE-VIKTORIA-KLINIKUMS,
BERLIN 67 3.2.2 NRTI-TP MESSUNGEN BEI HIV-INFIZIERTEN PATIENTEN DER
CAT-STUDIE 68 3.2.3 NRTI-TP MESSUNGEN BEI HIV-INFIZIERTEN PATIENTEN DER
KINDERKLINIK DER JOHANN WOLFGANG GOETHE-UNIVERSITAT, FRANKFURT/MAIN 70 4
DLSKUSSION 71 4.1 ENTWICKLUNG, VALIDIERUNG UND ANWENDUNG EINER METHODE
ZUR EXTRAZELLULAREN BESTIMMUNG DER NRTI IN PLASMA UNTER BESONDERER
BERIICKSICHTIGUNG DES TENOFOVIR 71 4.2 ENTWICKLUNG, VALIDIERUNG UND
ANWENDUNG EINER METHODE ZUR INTRAZELLULAREN BESTIMMUNG DER NRTI IN
PERIPHEREN MONONUKLEAREN ZELLEN 74 4.3 AUSBLICK 81 5 ZUSAMMENFASSUNG 83
LITERATURVERZEICHNIS 85 PUBLIKATIONSLISTE 95 ANHANG A: MATERIAL UND
GERATELISTE 101 ANHANG B: REAGENZIENLISTE 103 ANHANG C: STOFFLISTE 106
ANHANG D: PHYSIKALISCH-CHEMISCHE UND PHARMAKOKINETISCHE EIGENSCHAFTEN
DER NRTI 109 |
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