Evaluation der zytologischen Diagnostik und adjuvanter Methoden an Präparaten oraler Bürstenbiopsien zur Sekundärprävention von Lippen- und Oropharynxkarzinomen:
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| adam_text | INHAL TSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis
1. EINLEITUNG 1
1.1 Prävention 1
1.2 Epidemiologie 4
1.2.1 Inzidem und Mortalität des Mundkrebses in Deutschland 5
1.2.2 Inzidenz und Mortalität im internationalen Vergleich 7
1.3 ÄTIOLOGIE DES OROPHARYNXKARZINOMS 10
1.3.1 Tabak 10
1.3.2 Alkohol (Ethanol) 12
1.3.3 Synergistische Effekte von Alkohol und Tabakgenuß 14
1.4 Klinik 15
1.4.1 Präkanzeröse Läsionen (potentiell maligne Krebsvorläuferl äs tonen) und präkanzeröse
Bedingungen 15
1.4.2 Leukoplakie 16
1.4.3 Proliferative verruköse Leuoplakie 19
1.4.4 Erythroplakie 20
1.4.5 Plattenepithelkarzinom 20
1.5 Methoden der Früherkennung 22
1.5.1 Visualisierung durch klinische Inspektion und Palpation 22
1.5.2 5 Aminolävulinsäure(ALA) gestützte Fluoreszenzdiagnostik 22
1.5.3 Chirurgische Gewebeentnahme (Biopsie) 23
1.5.4 Zytologische Diagnostik 24
1.6 Adjuvante Methoden an Präparaten oraler Bürstenbiopsien 24
1.6.1 DNA Zytometrie 24
1.6.2 Laser Scanning Cytometry (LSCM) 26
1.6.3 Analyse der Argyrophile Nukleolus organisierende Regionen (AgNORs) 26
1.6.4 Multimodale Zellanalyse 28
1.6.5 Molekularbiologischer Nachweis einer HPV Infektion 29
1.7 Ziel der Arbeit 30
2. MATERIAL UND METHODEN 34
2.1 Allgemeines Vorgehen 34
2.1.1 Technik der Zellgewinnung 34
2.1.2 Präparateherstellung 35
2.1.3 Zytologische Routinefärbungen 37
2.1.4 Zytologische Diagnostik gemäß der „ Düsseldorfer Nomenklatur für die extragenitale
Zytologie 37
Inhaltsverzeichnis
2.2 Studie zur Validität der zytopathologischen Routine Diagnostik auf der Basis von
Ausstrichpräparaten oraler Bürstenbiopsien 39
2.2.1 Konventionelle Ausstrichpräparate 39
2.2.2 Fltissigkeitsgestützte zytologische Dünnschichtpräparate 40
2.2.3 Zytologische Diagnosen 40
2.3 Studie zur Validität der DNA Bildzytometrie 41
2.4 Studie zur Validität der Laser Scanning Cytometry (LSCM) 46
2.5 Studie zur Validität der argyrophilen Nukleolus organi sierenden Regionen
(AgNORS) 51
2.6 Studie zur Validität der Multimodalen Zellanalyse (MMZA) 53
2.7 Molekularbiologischer Nachweis einer HPV Infektion 58
2.8 Statistik 66
3. ERGEBNISSE 69
3.1 Deskriptive Darstellung klinischer Patientendaten und Mabzahlen der
diagnostischen treffsicherheit gemäß der diagnostischen kategorien der
„düsseldorfer nomenklatur für die extragenitale zytologie 69
3.1.1 Konventionelle A usstrichpräparate 6 9
3.1.2 Flüssigkeitsgestützte Dünnschichtpräparate 88
3.2 DNA Bildzytometrie 96
3.2.1 Prüfung des Messaufbaus und der Anwendbarkeit der statischen DNA Zytometrie an
Präparaten oraler Bürstenbiopsien 96
3.2.2 Prävalenz des Markers DNA Aneuploidie an Präparaten oraler Bürstenbiopsien in der
Routinediagnostik gemäß den diagnostischen Kategorien der „ Düsseldorfer Nomenklatur der
extragenitalen Zytologie 98
3.3 Laser Scanning Cytometry (LSCM) 110
3.4 Quantifizierung der argyrophilen Nukleolus organisierenden Regionen (AgNORs)
118
3.4.1 Satelliten undCluster 121
3.4.2 mAgNORs 122
3.4.3 Cluster undClusterinhalt 123
3.4.4 Satelliten 124
3.4.5 mSatelliten 124
3.4.6 aAgNOR (alle Satelliten und Clusterinhalt) 125
3.4.7 Validität 126
3.4.8 Reliabilität 128
3.5 Multimodale Zellanalyse 130
3.6 Humane Papilloma viren 135
3.6.1 Bestimmung der Sensitivität und Spezifität verschiedener Primerkombinationen 135
3.6.2 Reliabilität der verwendeten PCR 136
Inhaltsverzeichnis
3.6.3 Methodenvergleich zwischen den Primer Paaren 136
3.6.4 Genotypisierung mittels Direktsequenzierung 141
3.6.5 Nachweis von integrierten Fusionstranskripten an HPV 16positiven oralen Bürstenbiopsien
141
3.7 Prospektive Fälle 143
4. DISKUSSION 144
4.1 Validität der oralen Zytologie im Literatur vergleich 144
4.2 Validität der Zytologie bei klinisch eindeutigem Tumor verdacht im
Literaturvergleich 147
4.3 Validität der Zytologie bei fraglichem Tumor verdacht und Einsatz der oralen
Zytologie als Screening Methode im Literatur vergleich 149
4.4 Validität der Zytologie an konventionellen Ausstrich Präparaten von unklaren
läsionen der mundschleimhaut 152
4.5 validität der zytologie an bürstenbiopsien in der routine diagnostik von primären
Karzinomen der Ober und Unterlippe 155
4.6 Validität der Zytologie an Bürstenbiopsien von Rezidiv oder Zweitkarzinomen im
Rahmen der ambulanten Tumor nachsorge (Dispensairebetreuung) 156
4.7 Validität der Zytologie an Dünnschichtpräparaten oraler Bürstenbiopsien 158
4.8 Anwendung adjuvanter Methoden an Probenmaterial der Mundhöhle im
Literatur vergleich 161
4.8.1 DNA Bildzytometrie 163
4.8.2 Laser Scanning Cytometry 170
4.8.3 Argyrophile Nukleolus organisierende Regionen 173
4.8.4 Multimodale Zellanalyse 180
4.8.5 Humane Papillomaviren 184
4.9 Einordnung des Wertes der zytologischen Untersuchung und der adjuvanten
abstrichbasierten untersuchungs methoden in das gesundheitspolitische konzept
der Früherkennung oraler Tumoren. 186
5. ZUSAMMENFASSUNG 192
6. LITERATURVERZEICHNIS 200
7. ANHANG 222
SELBSTÄNDIGKEITSERKLÄRUNG 236
DANKSAGUNG 237
LEBENSLAUF 239
/i
|
| adam_txt |
INHAL TSVERZEICHNIS
Inhaltsverzeichnis
1. EINLEITUNG 1
1.1 Prävention 1
1.2 Epidemiologie 4
1.2.1 Inzidem und Mortalität des Mundkrebses in Deutschland 5
1.2.2 Inzidenz und Mortalität im internationalen Vergleich 7
1.3 ÄTIOLOGIE DES OROPHARYNXKARZINOMS 10
1.3.1 Tabak 10
1.3.2 Alkohol (Ethanol) 12
1.3.3 Synergistische Effekte von Alkohol und Tabakgenuß 14
1.4 Klinik 15
1.4.1 Präkanzeröse Läsionen (potentiell maligne Krebsvorläuferl äs tonen) und präkanzeröse
Bedingungen 15
1.4.2 Leukoplakie 16
1.4.3 Proliferative verruköse Leuoplakie 19
1.4.4 Erythroplakie 20
1.4.5 Plattenepithelkarzinom 20
1.5 Methoden der Früherkennung 22
1.5.1 Visualisierung durch klinische Inspektion und Palpation 22
1.5.2 5 Aminolävulinsäure(ALA) gestützte Fluoreszenzdiagnostik 22
1.5.3 Chirurgische Gewebeentnahme (Biopsie) 23
1.5.4 Zytologische Diagnostik 24
1.6 Adjuvante Methoden an Präparaten oraler Bürstenbiopsien 24
1.6.1 DNA Zytometrie 24
1.6.2 Laser Scanning Cytometry (LSCM) 26
1.6.3 Analyse der Argyrophile Nukleolus organisierende Regionen (AgNORs) 26
1.6.4 Multimodale Zellanalyse 28
1.6.5 Molekularbiologischer Nachweis einer HPV Infektion 29
1.7 Ziel der Arbeit 30
2. MATERIAL UND METHODEN 34
2.1 Allgemeines Vorgehen 34
2.1.1 Technik der Zellgewinnung 34
2.1.2 Präparateherstellung 35
2.1.3 Zytologische Routinefärbungen 37
2.1.4 Zytologische Diagnostik gemäß der „ Düsseldorfer Nomenklatur für die extragenitale
Zytologie" 37
Inhaltsverzeichnis
2.2 Studie zur Validität der zytopathologischen Routine Diagnostik auf der Basis von
Ausstrichpräparaten oraler Bürstenbiopsien 39
2.2.1 Konventionelle Ausstrichpräparate 39
2.2.2 Fltissigkeitsgestützte zytologische Dünnschichtpräparate 40
2.2.3 Zytologische Diagnosen 40
2.3 Studie zur Validität der DNA Bildzytometrie 41
2.4 Studie zur Validität der Laser Scanning Cytometry (LSCM) 46
2.5 Studie zur Validität der argyrophilen Nukleolus organi sierenden Regionen
(AgNORS) 51
2.6 Studie zur Validität der Multimodalen Zellanalyse (MMZA) 53
2.7 Molekularbiologischer Nachweis einer HPV Infektion 58
2.8 Statistik 66
3. ERGEBNISSE 69
3.1 Deskriptive Darstellung klinischer Patientendaten und Mabzahlen der
diagnostischen treffsicherheit gemäß der diagnostischen kategorien der
„düsseldorfer nomenklatur für die extragenitale zytologie" 69
3.1.1 Konventionelle A usstrichpräparate 6 9
3.1.2 Flüssigkeitsgestützte Dünnschichtpräparate 88
3.2 DNA Bildzytometrie 96
3.2.1 Prüfung des Messaufbaus und der Anwendbarkeit der statischen DNA Zytometrie an
Präparaten oraler Bürstenbiopsien 96
3.2.2 Prävalenz des Markers DNA Aneuploidie an Präparaten oraler Bürstenbiopsien in der
Routinediagnostik gemäß den diagnostischen Kategorien der „ Düsseldorfer Nomenklatur der
extragenitalen Zytologie " 98
3.3 Laser Scanning Cytometry (LSCM) 110
3.4 Quantifizierung der argyrophilen Nukleolus organisierenden Regionen (AgNORs)
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3.4.1 Satelliten undCluster 121
3.4.2 mAgNORs 122
3.4.3 Cluster undClusterinhalt 123
3.4.4 Satelliten 124
3.4.5 mSatelliten 124
3.4.6 aAgNOR (alle Satelliten und Clusterinhalt) 125
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3.4.8 Reliabilität 128
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3.6.1 Bestimmung der Sensitivität und Spezifität verschiedener Primerkombinationen 135
3.6.2 Reliabilität der verwendeten PCR 136
Inhaltsverzeichnis
3.6.3 Methodenvergleich zwischen den Primer Paaren 136
3.6.4 Genotypisierung mittels Direktsequenzierung 141
3.6.5 Nachweis von integrierten Fusionstranskripten an HPV 16positiven oralen Bürstenbiopsien
141
3.7 Prospektive Fälle 143
4. DISKUSSION 144
4.1 Validität der oralen Zytologie im Literatur vergleich 144
4.2 Validität der Zytologie bei klinisch eindeutigem Tumor verdacht im
Literaturvergleich 147
4.3 Validität der Zytologie bei fraglichem Tumor verdacht und Einsatz der oralen
Zytologie als Screening Methode im Literatur vergleich 149
4.4 Validität der Zytologie an konventionellen Ausstrich Präparaten von unklaren
läsionen der mundschleimhaut 152
4.5 validität der zytologie an bürstenbiopsien in der routine diagnostik von primären
Karzinomen der Ober und Unterlippe 155
4.6 Validität der Zytologie an Bürstenbiopsien von Rezidiv oder Zweitkarzinomen im
Rahmen der ambulanten Tumor nachsorge (Dispensairebetreuung) 156
4.7 Validität der Zytologie an Dünnschichtpräparaten oraler Bürstenbiopsien 158
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Literatur vergleich 161
4.8.1 DNA Bildzytometrie 163
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4.9 Einordnung des Wertes der zytologischen Untersuchung und der adjuvanten
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6. LITERATURVERZEICHNIS 200
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