Die Rolle der TNF-alpha-vermittelten Apoptose neutrophiler Granulozyten bei der Terminierung ANCA-assoziierter Vaskulitiden:
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| Sprache: | German |
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2006
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS IV
1 EINLEITUNG 1
1.1 ANCA assozierte Vaskulitiden 1
1.1.1 Klinischer Überblick 1
1.1.2 Histologische Charakteristika der ANCA assozierten Vaskulitiden 2
1.1.3 Charakterisierung der ANCA 3
1.1.4 Pathogenese der ANCA assozierten Vaskulitiden 4
1.1.5 Bedeutung der Apoptose im Rahmen ANCA assoziierter Vaskulitiden 6
2 HERLEITUNG DER AUFGABENSTELLUNG 8
3 MATERIALIEN UND METHODEN 9
3.1 Materialien 9
3.2 Isolierung der Zellen 9
3.3 Apoptoseinduktion mit TNF a und CHX 10
3.4 Nachweis von Apoptose 11
3.4.1 Färbung mit Propidium Jodid 11
3.4.2 Färbung mit Annexin V 12
3.4.3 Zellfärbung mit Wright Giemsa 12
3.5 Nachweis von Nekrose 13
3.6 Bestimmung der Oberflächenexpression der ANCA Zielantigene 13
3.7 Messung der Sauerstoffradikalbildung mit der Ferricytochrommethode 14
3.8 Präparation von Immunkomplexen 15
Inhaltsverzeichnis II
3.9 Präparierung der Immunglobuline 15
3.10 Statistische Analyse 16
4 ERGEBNISSE 17
4.1 TNF a und CHX vermittelte Apoptose 17
4.1.1 Durchflusszytometrie mit PI Färbung 17
4.1.2 Durchflusszytometrie mit Annexin V Färbung 19
4.1.3 Wright Giemsa Färbung 21
4.1.4 Ermittlung der Nekroserate 23
4.2 Effekt der TNF a vermittelten Apoptose auf die Membranexpression von ANCA
Zielantigenen 23
4.2.1 Membranexpression von Proteinase 3 und Myeloperoxidase 24
4.2.2 Translokation als apoptoseabhängiger Vorgang 26
4.3 Effekt der TNF a vermittelten Apoptose auf die Sauerstoffradikalbildung von
neutrophilen Granulozyten 29
4.3.1 Aktivierung durch ANCA unabhängige Stimulatoren 30
4.3.2 Aktivierung durch einen monoklonalen Antikörper gegen MPO 32
4.3.3 Stimulation mit humanen ANCA 3 4
4.4 Die Rolle der Caspase 3 Aktivität 36
4.4.1 Caspase 3 Inhibition und Apoptoserate 36
4.4.2 Caspase 3 Inhibition und ANCA Antigen Expression 37
4.4.3 Caspase 3 Inhibition und Sauerstoffradikalbildung 39
5 DISKUSSION 41
5.1 Das Modell der TNF a vermittelten Apoptose 41
5.2 Die Bedeutung der Membranexpression von ANCA Antigenen und deren
Beeinflussung durch Apoptose 43
5.3 Einfluss der TNF a vermittelten Apoptose auf die Aktivierbarkeit von neutrophilen
Granulozyten 46
Inhaltsverzeichnis III
5.4 Verminderte Sauerstoffradikalproduktion sowie erhöhte ANCA
Membranexpression als Caspase 3 abhängige Vorgänge 47
5.5 TNF a pro und antiinflammatorische Wirkung durch ein Zytokin ? 48
6 ZUSAMMENFASSUNG 52
|
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Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS IV
1 EINLEITUNG 1
1.1 ANCA assozierte Vaskulitiden 1
1.1.1 Klinischer Überblick 1
1.1.2 Histologische Charakteristika der ANCA assozierten Vaskulitiden 2
1.1.3 Charakterisierung der ANCA 3
1.1.4 Pathogenese der ANCA assozierten Vaskulitiden 4
1.1.5 Bedeutung der Apoptose im Rahmen ANCA assoziierter Vaskulitiden 6
2 HERLEITUNG DER AUFGABENSTELLUNG 8
3 MATERIALIEN UND METHODEN 9
3.1 Materialien 9
3.2 Isolierung der Zellen 9
3.3 Apoptoseinduktion mit TNF a und CHX 10
3.4 Nachweis von Apoptose 11
3.4.1 Färbung mit Propidium Jodid 11
3.4.2 Färbung mit Annexin V 12
3.4.3 Zellfärbung mit Wright Giemsa 12
3.5 Nachweis von Nekrose 13
3.6 Bestimmung der Oberflächenexpression der ANCA Zielantigene 13
3.7 Messung der Sauerstoffradikalbildung mit der Ferricytochrommethode 14
3.8 Präparation von Immunkomplexen 15
Inhaltsverzeichnis II
3.9 Präparierung der Immunglobuline 15
3.10 Statistische Analyse 16
4 ERGEBNISSE 17
4.1 TNF a und CHX vermittelte Apoptose 17
4.1.1 Durchflusszytometrie mit PI Färbung 17
4.1.2 Durchflusszytometrie mit Annexin V Färbung 19
4.1.3 Wright Giemsa Färbung 21
4.1.4 Ermittlung der Nekroserate 23
4.2 Effekt der TNF a vermittelten Apoptose auf die Membranexpression von ANCA
Zielantigenen 23
4.2.1 Membranexpression von Proteinase 3 und Myeloperoxidase 24
4.2.2 Translokation als apoptoseabhängiger Vorgang 26
4.3 Effekt der TNF a vermittelten Apoptose auf die Sauerstoffradikalbildung von
neutrophilen Granulozyten 29
4.3.1 Aktivierung durch ANCA unabhängige Stimulatoren 30
4.3.2 Aktivierung durch einen monoklonalen Antikörper gegen MPO 32
4.3.3 Stimulation mit humanen ANCA 3 4
4.4 Die Rolle der Caspase 3 Aktivität 36
4.4.1 Caspase 3 Inhibition und Apoptoserate 36
4.4.2 Caspase 3 Inhibition und ANCA Antigen Expression 37
4.4.3 Caspase 3 Inhibition und Sauerstoffradikalbildung 39
5 DISKUSSION 41
5.1 Das Modell der TNF a vermittelten Apoptose 41
5.2 Die Bedeutung der Membranexpression von ANCA Antigenen und deren
Beeinflussung durch Apoptose 43
5.3 Einfluss der TNF a vermittelten Apoptose auf die Aktivierbarkeit von neutrophilen
Granulozyten 46
Inhaltsverzeichnis III
5.4 Verminderte Sauerstoffradikalproduktion sowie erhöhte ANCA
Membranexpression als Caspase 3 abhängige Vorgänge 47
5.5 TNF a pro und antiinflammatorische Wirkung durch ein Zytokin ? 48
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