Beeinflussbarkeit der Insulinbiosynthese auf posttranskriptionaler Ebene durch Fettsäuren und PPAR-Gamma-Agonisten: Untersuchungen am Zellmodell der Ratteninsulinomzelllinie INS-1
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung 7
1.1 Pathogenese des Typ 2 Diabetes:
Adipositas, freie Fettsäuren und pankreatische ß Zelle 7
1.2 Molekulare Mechanismen der Insulinsekretion 12
1.3 Thiazolidindione (Glitazone) und ihre möglichen Wirkungen
auf den Fettstoff wechsel 18
1.4 Resümee 20
1.5 Zielsetzung der Arbeit 21
2. Material und Methoden 22
2.1 Verwendete Chemikalien und Materialien 22
2.1.1 Feinchemikalien und Puffer 22
2.1.2 Fertigkits 23
2.1.3 Geräte und Zubehör 23
2.2 Verwendete Versuchsmedien 24
2.3 Zellkultur 28
2.4 Lösen von Oleat und Troglitazon in RPMI Medium 28
2.5 Prinzipieller Versuchsaufbau 29
2.6 Proteinanalytischer Versuchsansatz 32
2.6.1 Radioimmunoassay 33
2.6.2 Proteinbestimmung 34
2.6.3 Trichloressigsäurefällung 34
2.6.4 Immunpräzipitation 35
2.7 RNA analytischer Versuchsansatz 37
2.7.1 RNA Präparation 37
2.7.2 Northern Blot 38
2.7.3 In vitro Translation 42
2.7.4 RT PCR 45
2.8 Statistische Auswertung 48
5
3. Ergebnisse 49
3.1 Resultate des proteinanalytischen Versuchsansatzes 49
3.1.1 Sekretorische Aktivität der INS 1 Zelle 49
3.1.2 Biosyntheseleistung der INS 1 Zelle 52
3.2 Resultate des RNA analytischen Versuchsansatzes 55
3.2.1 Transkriptionale Aktivität der INS 1 Zelle 55
3.2.2 In vitro Translation 56
3.2.3 Expression von PPARa, y und 8 in INS 1 Zellen 58
4. Diskussion 59
4.1 Fettsäuren, Glitazone und ihre Wirkung auf den ß zellulären
Insulinhaushalt 59
4.2 Auswirkungen von freien Fettsäuren und Glitazonen auf die
Insulinsekretion 63
4.3 Wirkung von freien Fettsäuren und Glitazonen auf die
ß zelluläre Präproinsulinbiosynthese 65
4.4 Limitationen der Studie und Ausblick 69
5. Zusammenfassung 71
6. Verzeichnisse 72
6.1 Literatur 72
6.2 Eigene Publikationen 81
6.3 Abkürzungen 81
6.4 Abbildungsverzeichnis 81
6.5 Tabellenverzeichnis 82
7. Danksagung 83
8. Lebenslauf. 84
6
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Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung 7
1.1 Pathogenese des Typ 2 Diabetes:
Adipositas, freie Fettsäuren und pankreatische ß Zelle 7
1.2 Molekulare Mechanismen der Insulinsekretion 12
1.3 Thiazolidindione (Glitazone) und ihre möglichen Wirkungen
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1.4 Resümee 20
1.5 Zielsetzung der Arbeit 21
2. Material und Methoden 22
2.1 Verwendete Chemikalien und Materialien 22
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3. Ergebnisse 49
3.1 Resultate des proteinanalytischen Versuchsansatzes 49
3.1.1 Sekretorische Aktivität der INS 1 Zelle 49
3.1.2 Biosyntheseleistung der INS 1 Zelle 52
3.2 Resultate des RNA analytischen Versuchsansatzes 55
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4.1 Fettsäuren, Glitazone und ihre Wirkung auf den ß zellulären
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5. Zusammenfassung 71
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