Durchflußzytometrische Charakterisierung kutaner Lymphozyten in den T-Zell-vermittelten Dermatosen Psoriasis und CTCL:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen 2
I.Einleitung 4
1.1 Psoriasis 4
1.2. Kutane T-Zell Lymphome 9
1.3. Untersuchungsmöglichkeiten läsionalerT- Lymphozyten und ihrer Zytokine 15
1.3.1. Immunhistologie 16
1.3.2. RT-Polymerase-Ketten-Reaktion zum Nachweis von T-Zellen und Zytokinen 16
1.3.3. Durchflußzytometrie 17
1.3.4. Disaggregation der Haut 18
2. Zielsetzung 21
3. Material und Methoden 22
3.1. Patienten und Probenmaterial 22
3.2. Materialien und Geräte 23
3.2.1. DAKO Medimachine ® System 23
3.3.2. Reagenzien 23
3.3.3. Kit zur intrazellulären Zytokinbestimmung 24
3.3.4. Weitere Verbrauchsmaterialien 24
3.3.5. Antikörper 25
3.4. Isolierung von PBMC aus peripherem Blut 27
3.5. Isolierung von Lymphozyten aus der Haut 27
3.5.1. Notwendiges Zubehör 28
3.5.2. Isolationsprotokoll 28
3.6. Markierung der Oberflächenantigene 29
3.7. Markierung der intrazellulären Zytokine 30
3.7.1. Stimulation, Fixation und Perforation kutaner Lymphozyten 30
3.7.2. Zytokinfärbung 31
3.8. Durchflußzytometrische Analyse 31
3.9. Statistische Auswertung 33
4. Ergebnisse 34
4.1. Psoriasis 34
4.1.1 Zusammensetzung des läsionalen Infiltrates bei Psoriasis 34
4.1.2. Expression von Oberflächenantigenen bei Psoriasis 35
4.1.3. Expression von Chemokinrezeptoren bei Psoriasis 36
4.1.4. Detektion von intrazellulären Zytokinen bei Psoriasis 37
4.1.5. Zusammenfassung der Ergebnisse bei Psoriasis 38
4.2. Kutane T-Zell-Lymphome 39
4.2.1. Zusammensetzung des läsionalen Infiltrates bei CTCL 40
4.2.2. Expression von Oberflächenantigenen bei CTCL 41
4.2.3. Expression von Chemokinrezeptoren bei CTCL 44
4.2.4. Expression intrazellulärer Zytokine bei CTCL 44
4.2.5. Zusammenfassung der Ergebnisse bei CTCL 46
5. Diskussion 47
6. Zusammenfassung 55
7. Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen 57
8. Literaturverzeichnis 58
Anhang 67
Lebenslauf 69
Publikationen und Vorträge 70
Danksagung 71
1
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Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen 2
I.Einleitung 4
1.1 Psoriasis 4
1.2. Kutane T-Zell Lymphome 9
1.3. Untersuchungsmöglichkeiten läsionalerT- Lymphozyten und ihrer Zytokine 15
1.3.1. Immunhistologie 16
1.3.2. RT-Polymerase-Ketten-Reaktion zum Nachweis von T-Zellen und Zytokinen 16
1.3.3. Durchflußzytometrie 17
1.3.4. Disaggregation der Haut 18
2. Zielsetzung 21
3. Material und Methoden 22
3.1. Patienten und Probenmaterial 22
3.2. Materialien und Geräte 23
3.2.1. DAKO Medimachine ® System 23
3.3.2. Reagenzien 23
3.3.3. Kit zur intrazellulären Zytokinbestimmung 24
3.3.4. Weitere Verbrauchsmaterialien 24
3.3.5. Antikörper 25
3.4. Isolierung von PBMC aus peripherem Blut 27
3.5. Isolierung von Lymphozyten aus der Haut 27
3.5.1. Notwendiges Zubehör 28
3.5.2. Isolationsprotokoll 28
3.6. Markierung der Oberflächenantigene 29
3.7. Markierung der intrazellulären Zytokine 30
3.7.1. Stimulation, Fixation und Perforation kutaner Lymphozyten 30
3.7.2. Zytokinfärbung 31
3.8. Durchflußzytometrische Analyse 31
3.9. Statistische Auswertung 33
4. Ergebnisse 34
4.1. Psoriasis 34
4.1.1 Zusammensetzung des läsionalen Infiltrates bei Psoriasis 34
4.1.2. Expression von Oberflächenantigenen bei Psoriasis 35
4.1.3. Expression von Chemokinrezeptoren bei Psoriasis 36
4.1.4. Detektion von intrazellulären Zytokinen bei Psoriasis 37
4.1.5. Zusammenfassung der Ergebnisse bei Psoriasis 38
4.2. Kutane T-Zell-Lymphome 39
4.2.1. Zusammensetzung des läsionalen Infiltrates bei CTCL 40
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4.2.3. Expression von Chemokinrezeptoren bei CTCL 44
4.2.4. Expression intrazellulärer Zytokine bei CTCL 44
4.2.5. Zusammenfassung der Ergebnisse bei CTCL 46
5. Diskussion 47
6. Zusammenfassung 55
7. Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen 57
8. Literaturverzeichnis 58
Anhang 67
Lebenslauf 69
Publikationen und Vorträge 70
Danksagung 71
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