Untersuchung chromosomaler Aberrationen bei dem Krankheitsbild der Polyzythaemia rubra vera mit Hilfe der komparativen genomischen Hybridisierung (CGH):
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2005
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen
1. EINLEITUNG 1
1.1 Die Hämatopoiese 1
1.1.1 Orte der Blutbildung 1
1.1.2 Das Knochenmark 2
1.1.3 Die hämatopoietische Stammzelle und ihre Differenzierung 2
1.2 Chronische myeloproliferative Erkrankungen (CMPE) 5
1.3 Das Krankheitsbild der Polyzythaemia Vera (PV) 6
1.3.1 Historische Aspekte 6
1.3.2 Epidemiologie 7
1.3.3 Ätiologie 9
1.3.4 Klinik und Diagnose 11
1.3.5 Komplikationen und Therapiemöglichkeiten 17
1.4 Zytogenetische Analysen bei der Polyzythaemia Vera (PV) 21
1.5 Die komparative genomische Hybridisierung (CGH) 24
1.6 Zielsetzung der Arbeit 25
2. MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 Untersuchungsmaterial 27
2.1.1 Test-DNA 27
2.1.2 Kontroll/Referenz-DNA 27
2.2 Zelltrennung und Reinigung 27
2.2.1 Trennung der Leukozyten 27
2.2.2 Trennung der Granulozyten von den Monozyten 27
23 DNA Extraktion und Reinigung 28
2.4 Ermittlung der Quantität und Qualität der extrahierten DNA 29
2.4.1 Photometrie 29
2.4.2 Agarose-Gelelektrophorese 30
2.5 Biotinylierung/Digoxigenierung der DNA Proben mittels
Nick-Translation 31
2.6 Filtertest für biotin- bzw. digoxigenierte DNA Proben (dot-blot) 33
2.7 Fällung, Hybridisierung und Waschung der DNA 35
2.8 Posthybridisierungswaschung und Signal-Detektion 36
2.9 Bildakquisition und Signalverstärkung 37
2.10 Digitale Bildanalyse 38
2.11 Materialliste 39
2.11.1 Substanzen, Lösungen, Verbrauchsmaterialien 39
2.11.2 Geräte 42
3. ERGEBNISSE 43
3.1 Patienten 43
3.2 Kriterien bei der Auswertung der Ergebnisse 43
3.3 Exemplarische Darstellung eines Falles 45
3.4 Summenprofile aller weiteren Patienten 49
3.5 Auswertung 54
4. DISKUSSION 55
4.1 Methodik 55
4.1.1 Allgemeine Vor- und Nachteile der Methodik 55
4.1.2 Spezifische Probleme der Technik bezogen auf die vorliegende Studie 57
4.2 Gegenüberstellung der Ergebnisse mit vergleichbaren Studien 59
4.3 Ergebnisse der komparativen genomischen Hybridisierung
verglichen mit Ergebnissen der klassischen Zytogenetik 61
4.4 Die komparative genomische Hybridisierung als alleinige
Methode bei der Analyse der Polyzythaemia Vera 62
4.5 Aberrationen bei der Polyzythaemia Vera und ihre Bedeutung
bei der Pathogenese 63
5. ZUSAMMENFASSUNG 65
6. LITERATURVERZEICHNIS 66
7. LEBENSLAUF 88
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INHALTSVERZEICHNIS
Verzeichnis der verwendeten Abkürzungen
1. EINLEITUNG 1
1.1 Die Hämatopoiese 1
1.1.1 Orte der Blutbildung 1
1.1.2 Das Knochenmark 2
1.1.3 Die hämatopoietische Stammzelle und ihre Differenzierung 2
1.2 Chronische myeloproliferative Erkrankungen (CMPE) 5
1.3 Das Krankheitsbild der Polyzythaemia Vera (PV) 6
1.3.1 Historische Aspekte 6
1.3.2 Epidemiologie 7
1.3.3 Ätiologie 9
1.3.4 Klinik und Diagnose 11
1.3.5 Komplikationen und Therapiemöglichkeiten 17
1.4 Zytogenetische Analysen bei der Polyzythaemia Vera (PV) 21
1.5 Die komparative genomische Hybridisierung (CGH) 24
1.6 Zielsetzung der Arbeit 25
2. MATERIAL UND METHODEN 27
2.1 Untersuchungsmaterial 27
2.1.1 Test-DNA 27
2.1.2 Kontroll/Referenz-DNA 27
2.2 Zelltrennung und Reinigung 27
2.2.1 Trennung der Leukozyten 27
2.2.2 Trennung der Granulozyten von den Monozyten 27
23 DNA Extraktion und Reinigung 28
2.4 Ermittlung der Quantität und Qualität der extrahierten DNA 29
2.4.1 Photometrie 29
2.4.2 Agarose-Gelelektrophorese 30
2.5 Biotinylierung/Digoxigenierung der DNA Proben mittels
Nick-Translation 31
2.6 Filtertest für biotin- bzw. digoxigenierte DNA Proben (dot-blot) 33
2.7 Fällung, Hybridisierung und Waschung der DNA 35
2.8 Posthybridisierungswaschung und Signal-Detektion 36
2.9 Bildakquisition und Signalverstärkung 37
2.10 Digitale Bildanalyse 38
2.11 Materialliste 39
2.11.1 Substanzen, Lösungen, Verbrauchsmaterialien 39
2.11.2 Geräte 42
3. ERGEBNISSE 43
3.1 Patienten 43
3.2 Kriterien bei der Auswertung der Ergebnisse 43
3.3 Exemplarische Darstellung eines Falles 45
3.4 Summenprofile aller weiteren Patienten 49
3.5 Auswertung 54
4. DISKUSSION 55
4.1 Methodik 55
4.1.1 Allgemeine Vor- und Nachteile der Methodik 55
4.1.2 Spezifische Probleme der Technik bezogen auf die vorliegende Studie 57
4.2 Gegenüberstellung der Ergebnisse mit vergleichbaren Studien 59
4.3 Ergebnisse der komparativen genomischen Hybridisierung
verglichen mit Ergebnissen der klassischen Zytogenetik 61
4.4 Die komparative genomische Hybridisierung als alleinige
Methode bei der Analyse der Polyzythaemia Vera 62
4.5 Aberrationen bei der Polyzythaemia Vera und ihre Bedeutung
bei der Pathogenese 63
5. ZUSAMMENFASSUNG 65
6. LITERATURVERZEICHNIS 66
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