Flowzytometrische Messung der intrazellulären Interferon-g-Produktion [Interferon-gamma-Produktion] peripherer T-Lymphozyten bei Patienten mit malignem Melanom:
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|---|---|
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung. 10
1.1 Das maligne Melanom 11
1.1.1 Definition 11
1.1.2 Epidemiologie 12
1.1.3 Ätiologische Faktoren und Risikogruppen 12
1.1.4 Formen des malignen Melanoms 14
1.1.4.1 Superfiziell spreitendes Melanom 15
1.1.4.2 Noduläres Melanom 16
1.1.4.3 Lentigo maligna Melanom 16
1.1.4.4 Akrolentiginöses Melanom 17
1.1.4.5 Melanomsonderformen 18
1.1.5 Stadieneinteilung des malignen Melanoms 18
1.1.6 Prognose des malignen Melanoms 20
1.1.7 Immunologie des malignen Melanoms 21
1.1.8 Gegenwärtige Melanom-Therapie 23
1.1.9 Die adjuvante Therapie des malignen Melanoms 24
1.2 Interferone 26
1.2.1 Interferon-alpha 28
1.2.2 Interferon-gamma 29
1.3 Fragestellung 31
2 Material und Methoden 32
2.1 Patienten 32
2.1.1 Patienten mit MM nach Exzision (Gruppe 1) 32
2.1.2 Exzisionstherapie 33
2.1.3 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT (Gruppe 2) 34
2.1.4 Therapie mit Hochdosis-Interferon-a 35
6
2.2 Material und Methoden 36
2.2.1 Blutgewinnung 36
2.2.2 Bestimmung des prozentualen Anteils der IFN-y produzierenden T-Lymphozyten 36
2.2.2.1 Präparation des Heparin-Blutes zur intrazellulären Messung von IFN^ 36
2.2.2.2 Ftowzytometrie (FACS) 39
2.2.2.3 Flowzytometrische Analyse der CD3+/IFN^+ T-Lymphozyten 40
2.2.3 Bestimmung des absoluten Anteils der IFNi- produzierenden T-Lymphozyten 43
2.2.3.1 Präparation des EDTA-Blutes zur Bestimmung der pan-T-Zellen 43
2.2.3.2 Flowzytometrische Analyse der CD3+T-Lymphozyten 44
2.2.3.3 Berechnung der absoluten Anzahl der Interferon-? produzierenden Zellen 45
2.2.4 Statistische Auswertung 45
3 Ergebnisse 46
3.1 Patienten mit MM nach Exzision 46
3.2 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT 48
3.2.1 Anzahl der CD3+ Zellen/cmm absolut vor und während Therapie 48
3.2.2 Relative Anzahl der IFN^ produzierenden CD3+ Zellen vor und während Therapie 49
3.2.3 Absolute Anzahl IFN-y produzierender CD3+ Zellen/cmm vor und während Therapie 49
3.3 Vergleich der Patienten gleicher Stadien nach Exzision und während HIT 50
3.3.1 Vergleich der Relativwerte 50
3.3.2 Vergleich der Absolutwerte 51
3.4 Vergleich der HIT-Patienten mit Patienten nach Exzision im Stadium la 52
3.4.1 Vergleich der Relativwerte 52
3.4.2 Vergleich der Absolutwerte 53
4 Diskussion 54
4.1 Patienten mit MM nach Exzision 56
4.2 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT 58
4.3 Vergleich der beiden Gruppen 61
7
5 Zusammenfassung 66
6 Literaturverzeichnis 67
7 Anhang. 84
8 Danksagung 86
9 Lebenslauf. 87
|
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5
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung. 10
1.1 Das maligne Melanom 11
1.1.1 Definition 11
1.1.2 Epidemiologie 12
1.1.3 Ätiologische Faktoren und Risikogruppen 12
1.1.4 Formen des malignen Melanoms 14
1.1.4.1 Superfiziell spreitendes Melanom 15
1.1.4.2 Noduläres Melanom 16
1.1.4.3 Lentigo maligna Melanom 16
1.1.4.4 Akrolentiginöses Melanom 17
1.1.4.5 Melanomsonderformen 18
1.1.5 Stadieneinteilung des malignen Melanoms 18
1.1.6 Prognose des malignen Melanoms 20
1.1.7 Immunologie des malignen Melanoms 21
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1.1.9 Die adjuvante Therapie des malignen Melanoms 24
1.2 Interferone 26
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1.2.2 Interferon-gamma 29
1.3 Fragestellung 31
2 Material und Methoden 32
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2.1.1 Patienten mit MM nach Exzision (Gruppe 1) 32
2.1.2 Exzisionstherapie 33
2.1.3 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT (Gruppe 2) 34
2.1.4 Therapie mit Hochdosis-Interferon-a 35
6
2.2 Material und Methoden 36
2.2.1 Blutgewinnung 36
2.2.2 Bestimmung des prozentualen Anteils der IFN-y produzierenden T-Lymphozyten 36
2.2.2.1 Präparation des Heparin-Blutes zur intrazellulären Messung von IFN^ 36
2.2.2.2 Ftowzytometrie (FACS) 39
2.2.2.3 Flowzytometrische Analyse der CD3+/IFN^+ T-Lymphozyten 40
2.2.3 Bestimmung des absoluten Anteils der IFNi- produzierenden T-Lymphozyten 43
2.2.3.1 Präparation des EDTA-Blutes zur Bestimmung der pan-T-Zellen 43
2.2.3.2 Flowzytometrische Analyse der CD3+T-Lymphozyten 44
2.2.3.3 Berechnung der absoluten Anzahl der Interferon-? produzierenden Zellen 45
2.2.4 Statistische Auswertung 45
3 Ergebnisse 46
3.1 Patienten mit MM nach Exzision 46
3.2 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT 48
3.2.1 Anzahl der CD3+ Zellen/cmm absolut vor und während Therapie 48
3.2.2 Relative Anzahl der IFN^ produzierenden CD3+ Zellen vor und während Therapie 49
3.2.3 Absolute Anzahl IFN-y produzierender CD3+ Zellen/cmm vor und während Therapie 49
3.3 Vergleich der Patienten gleicher Stadien nach Exzision und während HIT 50
3.3.1 Vergleich der Relativwerte 50
3.3.2 Vergleich der Absolutwerte 51
3.4 Vergleich der HIT-Patienten mit Patienten nach Exzision im Stadium la 52
3.4.1 Vergleich der Relativwerte 52
3.4.2 Vergleich der Absolutwerte 53
4 Diskussion 54
4.1 Patienten mit MM nach Exzision 56
4.2 Patienten mit MM nach Exzision und adjuvanter HIT 58
4.3 Vergleich der beiden Gruppen 61
7
5 Zusammenfassung 66
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