Autoantigenspezifische Immunregulation der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis:
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2005
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 1
1.1. Die Multiple Sklerose 1
1.1.1. Der klinische Verlauf der Multiplen Sklerose 2
1.1.2. Symptomatik und Diagnostik der Multiplen Sklerose 4
1.1.3. Pathologische Befunde der Multiplen Sklerose 6
1.1.4. Therapie der Multiplen Sklerose 7
1.2. Das Immunsystem, Selbsttoleranz und Multiple Sklerose 9
1.2.1. Immunologische Grundlagen 9
1.2.1.1. T Zellen und B Zellen 10
1.2.1.2. Zytokinsekretion und Multiple Sklerose 11
1.2.1.3. Die MHC Moleküle 12
1.2.1.4. Der T Zellrezeptor 16
1.2.2. Selbsttoleranz 18
1.3. Der Aufbau der Myelinscheide und andere Autoantigene 20
1.3.1. Myelin basisches Protein (MBP) 20
1.3.2. Proteolipid Protein (PLP) 21
1.3.3. Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG) 22
1.4. Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) 23
1.5 Die Experimentelle Autoimmune Myasthenia 25
Gravis (EAMG): Ein Modell der Myasthenia Gravis
1.5. Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 26
Inhaltsverzeichnis
2. Material und Methoden 28
2.1. Material 28
2.1.1. Tiere 28
2.1.2. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis 28
2.1.3. Allgemeine Zellkultur 29
2.1.4. Zellfärbung und Zellzahlbestimmung 31
2.1.5. Enumeration antigenspezifischer Interferon y 31
sezernierender Zellen mit dem Enzym Linked
Immunospot Assay (ELISPOT)
2.1.6. Enzym Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 33
2.1.7. Protein und Peptidsequenzen 35
2.1.7.1. Sequenzen der synthetischen humanen MOG Peptide 35
2.1.7.2. Sequenzen von anderen verwendeten Peptiden 37
2.1.7.2.1. MOG Peptide der Ratte 37
2.1.7.2.2. MBP Peptide 37
2.1.7.2.3. Sequenz des extrazellulären Teils der e Kette des 37
nikotinergen Acetylcholinrezeptors
2.1.8. Gewinnung von cDNA 38
2.1.8.1. Extraktion von RNA aus Lymphknoten 38
2.1.8.2. Umschreibung der RNA in cDNA 38
2.1.9. DNA Amplifikation durch die Polymerase Ketten 39
Reaktion
2.2. Methoden 42
2.2.1. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis: 42
Immunisierung und Bewertung des Krankheitsverlaufes
2.2.2. ELISPOT 44
2.2.2.1. Gewinnung von Zellen für den ELISPOT 44
2.2.2.2. Zellfärbung und Zellzahlbestimmung 45
Inhaltsverzeichnis
2.2.2.3. Enumeration antigenspezifischer Interferon y 46
sezernierender Zellen
2.2.3. Enzym Linked Immunosorbent Assay: ELISA 48
2.2.4. PCR: Vorbereitung und Durchführung 49
2.2.4.1. Allgemeine Einführung 49
2.2.4.2. Gewinnung von mRNA 50
2.2.4.3. Umschreibung der mRNA in cDNA 51
2.2.4.4. Poymerase Ketten Reaktion 51
3. Ergebnisse 55
3.1. EAE : Induktion der Erkrankung in DA und LEW.1 AV1 55
Ratten mittels r MOG 1 125
3.2. Immunisierung von LEW.1AV1 Ratten mit h MOG 1 125 56
bzw. h MOG 1 218
3.2.1. Klinischer Verlauf 56
3.2.2. ELISPOT und ELISA 58
3.2.2.1. ELISPOT 58
3.2.2.2. ELISA 60
3.3. Ko Immunisierungsversuche in LEW.1AV1 Ratten 64
3.3.1. Klinischer Verlauf 64
3.3.2. ELISPOT 67
3.4. Weitere Ko Immunisierungsversuche 69
3.4.1. Ko Immunisierungsversuche in LEW.1 AV1 Ratten 69
3.4.1.1. Klinischer Verlauf 70
3.4.1.2. ELISPOT, ELISA und PCR 72
3.4.1.2.1. ELISPOT 72
3.4.1.2.2. ELISA 74
3.4.1.2.3. PCR 77
3.4.2. Ko Immunisierungsversuche in DA Ratten 83
3.4.2.1. Klinischer Verlauf 83
Inhaltsverzeichnis
3.4.2.2. ELISPOT, ELISA und PCR 85
3.4.2.2.1. ELISPOT 85
3.4.2.2.2. ELISA 89
3.4.2.2.3. PCR 94
3.4.2.2.4. Statistische Auswertung der PCR Daten 99
4. Diskussion 105
4.1 Möglichkeiten der Induktion von EAE in unterschiedlichen 106
Stämmen von Tieren: MOG 93 108, eine immun
dominante Region des humanen MOG
4.2. Induktion von EAE Schutz mittels Verabreichung der 111
nAChRe1 221 oder nAChRe1 15 bzw. von humanem
MOG 1 218
4.2.1. Immundeviation: TH1 , TH2 und TH3 Zellen 112
4.2.1.1. IL4, IL10 und TGF ß 113
Möglichkeiten der Einflussnahme auf den Verlauf
einer EAE
4.2.1.1.1. Interieukin4 113
4.2.1.1.2. Interleukin 10 115
4.2.1.1.3. Transforming Growth Factor ß : TGF ß 116
4.2.2. Regulatorische T Zellen /T Suppressorzellen können 118
die Entwicklung einer EAE verhindern
4.3. Schlussfolgerungen 120
5. Zusammenfassung 121
6. Literaturverzeichnis 123
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Seite
1. Einleitung 1
1.1. Die Multiple Sklerose 1
1.1.1. Der klinische Verlauf der Multiplen Sklerose 2
1.1.2. Symptomatik und Diagnostik der Multiplen Sklerose 4
1.1.3. Pathologische Befunde der Multiplen Sklerose 6
1.1.4. Therapie der Multiplen Sklerose 7
1.2. Das Immunsystem, Selbsttoleranz und Multiple Sklerose 9
1.2.1. Immunologische Grundlagen 9
1.2.1.1. T Zellen und B Zellen 10
1.2.1.2. Zytokinsekretion und Multiple Sklerose 11
1.2.1.3. Die MHC Moleküle 12
1.2.1.4. Der T Zellrezeptor 16
1.2.2. Selbsttoleranz 18
1.3. Der Aufbau der Myelinscheide und andere Autoantigene 20
1.3.1. Myelin basisches Protein (MBP) 20
1.3.2. Proteolipid Protein (PLP) 21
1.3.3. Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG) 22
1.4. Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) 23
1.5 Die Experimentelle Autoimmune Myasthenia 25
Gravis (EAMG): Ein Modell der Myasthenia Gravis
1.5. Zielsetzung der vorliegenden Arbeit 26
Inhaltsverzeichnis
2. Material und Methoden 28
2.1. Material 28
2.1.1. Tiere 28
2.1.2. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis 28
2.1.3. Allgemeine Zellkultur 29
2.1.4. Zellfärbung und Zellzahlbestimmung 31
2.1.5. Enumeration antigenspezifischer Interferon y 31
sezernierender Zellen mit dem Enzym Linked
Immunospot Assay (ELISPOT)
2.1.6. Enzym Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 33
2.1.7. Protein und Peptidsequenzen 35
2.1.7.1. Sequenzen der synthetischen humanen MOG Peptide 35
2.1.7.2. Sequenzen von anderen verwendeten Peptiden 37
2.1.7.2.1. MOG Peptide der Ratte 37
2.1.7.2.2. MBP Peptide 37
2.1.7.2.3. Sequenz des extrazellulären Teils der e Kette des 37
nikotinergen Acetylcholinrezeptors
2.1.8. Gewinnung von cDNA 38
2.1.8.1. Extraktion von RNA aus Lymphknoten 38
2.1.8.2. Umschreibung der RNA in cDNA 38
2.1.9. DNA Amplifikation durch die Polymerase Ketten 39
Reaktion
2.2. Methoden 42
2.2.1. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis: 42
Immunisierung und Bewertung des Krankheitsverlaufes
2.2.2. ELISPOT 44
2.2.2.1. Gewinnung von Zellen für den ELISPOT 44
2.2.2.2. Zellfärbung und Zellzahlbestimmung 45
Inhaltsverzeichnis
2.2.2.3. Enumeration antigenspezifischer Interferon y 46
sezernierender Zellen
2.2.3. Enzym Linked Immunosorbent Assay: ELISA 48
2.2.4. PCR: Vorbereitung und Durchführung 49
2.2.4.1. Allgemeine Einführung 49
2.2.4.2. Gewinnung von mRNA 50
2.2.4.3. Umschreibung der mRNA in cDNA 51
2.2.4.4. Poymerase Ketten Reaktion 51
3. Ergebnisse 55
3.1. EAE : Induktion der Erkrankung in DA und LEW.1 AV1 55
Ratten mittels r MOG 1 125
3.2. Immunisierung von LEW.1AV1 Ratten mit h MOG 1 125 56
bzw. h MOG 1 218
3.2.1. Klinischer Verlauf 56
3.2.2. ELISPOT und ELISA 58
3.2.2.1. ELISPOT 58
3.2.2.2. ELISA 60
3.3. Ko Immunisierungsversuche in LEW.1AV1 Ratten 64
3.3.1. Klinischer Verlauf 64
3.3.2. ELISPOT 67
3.4. Weitere Ko Immunisierungsversuche 69
3.4.1. Ko Immunisierungsversuche in LEW.1 AV1 Ratten 69
3.4.1.1. Klinischer Verlauf 70
3.4.1.2. ELISPOT, ELISA und PCR 72
3.4.1.2.1. ELISPOT 72
3.4.1.2.2. ELISA 74
3.4.1.2.3. PCR 77
3.4.2. Ko Immunisierungsversuche in DA Ratten 83
3.4.2.1. Klinischer Verlauf 83
Inhaltsverzeichnis
3.4.2.2. ELISPOT, ELISA und PCR 85
3.4.2.2.1. ELISPOT 85
3.4.2.2.2. ELISA 89
3.4.2.2.3. PCR 94
3.4.2.2.4. Statistische Auswertung der PCR Daten 99
4. Diskussion 105
4.1 Möglichkeiten der Induktion von EAE in unterschiedlichen 106
Stämmen von Tieren: MOG 93 108, eine immun
dominante Region des humanen MOG
4.2. Induktion von EAE Schutz mittels Verabreichung der 111
nAChRe1 221 oder nAChRe1 15 bzw. von humanem
MOG 1 218
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4.2.1.1. IL4, IL10 und TGF ß 113
Möglichkeiten der Einflussnahme auf den Verlauf
einer EAE
4.2.1.1.1. Interieukin4 113
4.2.1.1.2. Interleukin 10 115
4.2.1.1.3. Transforming Growth Factor ß : TGF ß 116
4.2.2. Regulatorische T Zellen /T Suppressorzellen können 118
die Entwicklung einer EAE verhindern
4.3. Schlussfolgerungen 120
5. Zusammenfassung 121
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