Expressionsanalyse der zellzyklusassoziierten Proteine und Bestimmung des humanen Papillomavirus-Status in Adenokarzinomen der Cervix uteri: immunhistochemische Polymerase-Kettenreaktion
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2005
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1. Einleitung Seite
1.1. Das Zervixkarzinom 6
1.1.1. Das Adenokarzinom der Cervix uteri 10
1.1.2. Das Plattenepithelkarzinom der Cervix uteri 13
1.2. Die zellzyklusassoziierten Proteine und p53 15
1.2.1. p53 Tumorsuppressorgen 15
1.2.2. Retinoblastoma ProteinRB(pl05) 16
1.2.3. Cyclin abhängige Kinasen (CDK s) 17
1.2.3.1. Cyclin Dl 18
1.2.3.2. CyclinE . . 18
1.2.4. Cyclin abhängige Kinase Inhibitoren
(CDKI s) 19
1.2.4.1. p21/WAFl 20
1.2.4.2. p27/KIPl 21
1.2.4.3. pl6/INK4a 22
1.3. Der Proliferationsmarker Ki67 (MIB 1) 24
1.4. Das Humane Papillomavirus HPV 25
1.5. Fragestellung und Ziel der Arbeit 26
2. Material und Methode
2.1. Material 27
2.1.1. Darstellung des Patientenkollektivs 27
2.1.2. Materialien 31
2.1.3. Geräte und Verbrauchsmaterialien 36
2.2. Methode 37
2.2.1. Immunhistochemie 37
2.2.1.1. Entparaffmieren 38
2.2.1.2. Methanol Blockade 38
2.2.1.3. Mikrowellen Vorbehandlung 38
2.2.1.4. Inkubation mit primärem und sekundärem
Antikörper 39
2.2.1.5. Nachweis von Cyclin Dl 39
2.2.1.6. Nachweis von pl6 40
2.2.1.7. Interpretation der Ergebnisse 40
2.2.2. Polymerase Kettenreaktion PCR 42
2.2.2.1. DNA Extraktion aus Paraffinmaterial 42
2.2.2.2. PCR an DNA aus Paraffinmaterial 44
2.2.2.3. Kontrollelektrophorese der extrahierten
DNA 45
2.2.3. Polyacrylamidgel PAGE 47
2.2.3.1. Herstellung des Polyacrylamidgels (10%ig) 47
2.2.3.2. Vorbereitung der Gelkammer 48
2.2.3.3. Vorbereitung der Elektrophorese Apparatur 48
2.2.3.4. Vorbereitung der Probe 48
2.2.3.5. Elektrophorese der PCR Produkte 48
2.2.3.6. Silbernitratfärbung des Polyacrylamidgels 49
3. Ergebnisse
3.1. Immunhistochemischer Nachweis von zellzyklusassoziierten
Proteine 50
3.1.1. Untersuchungsergebnis von p 16 50
3.1.2. Untersuchungsergebnis von p21/WAFl 52
3.1.3. Untersuchungsergebnis von p27 53
3.1.4. Untersuchungsergebnis von p53 55
3.1.5. Untersuchungsergebnis von Rb 56
3.1.6. Untersuchungsergebnis von Cyclin Dl 58
3.1.7. Untersuchungsergebnis von CyclinE 59
3.2. Immunhistochemischer Nachweis des Proliferationsmarkers
Ki67 61
3.3. HPV Nachweis in Adeno und Plattenepithelkarzinomen der
Cervix uteri 64
3.3.1. FIGO Stadiumeinteilung der auf eine HPV Infektion
hin untersuchten Adenokarzinome 66
3.4. Statistische Auswertung der Ergebnisse der zervikalen
Adenokarzinome 67
3.4,1. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren mit dem FIGO Stadium 67
3.4.2. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren untereinander 67
3.4.3. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregultoren mit den histologischen Subtypen
der zervikalen Adenokarzinome 72
3.4.4. Korrelation zwischen FIGO Stadium und
HPV Nachweis 72
3.4.5. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren und HPV Infektion 73
3.4.6. Korrelation zwischen der Expression des
Proliferationsmarkers Ki67 und HPV 16 oder
18 Infektion 75
3.4.7. Korrelation zwischen Tumortyp und
HPV Typ 16/18 Infektion 76
3.5. In Situ Hybridisierung ISH 78
4. Diskussion
4.1. Zellzyklusproteine 80
4.2. Humanes Papillomavirus 88
5. Zusammenfassung 90
6. Literaturverzeichnis 91
7. Abkürzungsverzeichnis 103
8. Danksagung 105
9. Lebenslauf 106
10. Erklärung 108
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1. Einleitung Seite
1.1. Das Zervixkarzinom 6
1.1.1. Das Adenokarzinom der Cervix uteri 10
1.1.2. Das Plattenepithelkarzinom der Cervix uteri 13
1.2. Die zellzyklusassoziierten Proteine und p53 15
1.2.1. p53 Tumorsuppressorgen 15
1.2.2. Retinoblastoma ProteinRB(pl05) 16
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1.3. Der Proliferationsmarker Ki67 (MIB 1) 24
1.4. Das Humane Papillomavirus HPV 25
1.5. Fragestellung und Ziel der Arbeit 26
2. Material und Methode
2.1. Material 27
2.1.1. Darstellung des Patientenkollektivs 27
2.1.2. Materialien 31
2.1.3. Geräte und Verbrauchsmaterialien 36
2.2. Methode 37
2.2.1. Immunhistochemie 37
2.2.1.1. Entparaffmieren 38
2.2.1.2. Methanol Blockade 38
2.2.1.3. Mikrowellen Vorbehandlung 38
2.2.1.4. Inkubation mit primärem und sekundärem
Antikörper 39
2.2.1.5. Nachweis von Cyclin Dl 39
2.2.1.6. Nachweis von pl6 40
2.2.1.7. Interpretation der Ergebnisse 40
2.2.2. Polymerase Kettenreaktion PCR 42
2.2.2.1. DNA Extraktion aus Paraffinmaterial 42
2.2.2.2. PCR an DNA aus Paraffinmaterial 44
2.2.2.3. Kontrollelektrophorese der extrahierten
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2.2.3. Polyacrylamidgel PAGE 47
2.2.3.1. Herstellung des Polyacrylamidgels (10%ig) 47
2.2.3.2. Vorbereitung der Gelkammer 48
2.2.3.3. Vorbereitung der Elektrophorese Apparatur 48
2.2.3.4. Vorbereitung der Probe 48
2.2.3.5. Elektrophorese der PCR Produkte 48
2.2.3.6. Silbernitratfärbung des Polyacrylamidgels 49
3. Ergebnisse
3.1. Immunhistochemischer Nachweis von zellzyklusassoziierten
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3.1.1. Untersuchungsergebnis von p 16 50
3.1.2. Untersuchungsergebnis von p21/WAFl 52
3.1.3. Untersuchungsergebnis von p27 53
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3.1.5. Untersuchungsergebnis von Rb 56
3.1.6. Untersuchungsergebnis von Cyclin Dl 58
3.1.7. Untersuchungsergebnis von CyclinE 59
3.2. Immunhistochemischer Nachweis des Proliferationsmarkers
Ki67 61
3.3. HPV Nachweis in Adeno und Plattenepithelkarzinomen der
Cervix uteri 64
3.3.1. FIGO Stadiumeinteilung der auf eine HPV Infektion
hin untersuchten Adenokarzinome 66
3.4. Statistische Auswertung der Ergebnisse der zervikalen
Adenokarzinome 67
3.4,1. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren mit dem FIGO Stadium 67
3.4.2. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren untereinander 67
3.4.3. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregultoren mit den histologischen Subtypen
der zervikalen Adenokarzinome 72
3.4.4. Korrelation zwischen FIGO Stadium und
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3.4.5. Korrelation zwischen der Expression der
Zellzyklusregulatoren und HPV Infektion 73
3.4.6. Korrelation zwischen der Expression des
Proliferationsmarkers Ki67 und HPV 16 oder
18 Infektion 75
3.4.7. Korrelation zwischen Tumortyp und
HPV Typ 16/18 Infektion 76
3.5. In Situ Hybridisierung ISH 78
4. Diskussion
4.1. Zellzyklusproteine 80
4.2. Humanes Papillomavirus 88
5. Zusammenfassung 90
6. Literaturverzeichnis 91
7. Abkürzungsverzeichnis 103
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10. Erklärung 108 |
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