Über die unterschiedliche Kopplung des muskarinischen Azetylcholin-Rezeptor in insuffizienten menschlichen Herzmembranen:
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2004
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
7
2.1
GEWEBEENTNAHME
UND
KLINISCHE
DATEN
7
2.1.1
MYOKARDIALES
GEWEBE
7
2.1.2
PATIENTENCHARAKTERISTIKA
8
2.2
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
9
2.2.1
PRAEPARATION
VON
HOCHAUFGEREINIGTEN
MEMBRANEN
9
2.2.2 PRAEPARATION
VON
HEK
293-ZELLEN
(ROHMEMBRANEN)
10
2.2.3 PROTEINBESTIMMUNG
11
2.2.4
BESTIMMUNG
DER
5
'
-NUKLEOTIDASE
(5
'
-ND)-AKTIVITAET
12
2.2.5 RADIOLIGANDENBINDUNG
14
2.2.6
ADP-RIBOSYLIERUNG
15
2.2.7
Y
32
P-AZIDOANILIDO-GTP
(AAGTP)
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
16
2.2.7.1
HERSTELLUNG
VON
AAGTP
17
2.2.7.2
HERSTELLUNG
VON
LAAGTP
20
2.2.7.3
AGONISTENABHAENGIGE
AAGTP
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
DER
A-UNTEREINHEITEN
VON
VERSCHIEDENEN
G
PROTEINEN
20
2.2.8 IMMUNPRAEZIPITATION
21
2.2.9 ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
AAGTP
PHOTOAFFINITAETSMARKIERTEN
G
PROTEINE
22
2.2.9.1
DISKONTINUIERLICHE
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
22
2.2.9.2
COOMASSIE-FAERBUNG
23
2.2.9.3
IMMUNOBLOT
23
2.2.9.4
QUANTITATIVER
IMMUNOBLOT
24
2.2.9.5
ECL-DETEKTION
25
2.3
MATERIAL
26
2.3.1
CHEMIKALIEN
26
2.3.2
VERBRAUCHSMATERIAL
28
2.3.3
GERAETE
29
INHALTSVERZEICHNIS
2.3.4
ANTIKOERPER
30
2.3.5
RADIOAKTIVE
SUBSTANZEN
31
2.4
LOESUNGEN
UND
PUFFER
31
2.5
STATISTIK
34
3
ERGEBNISSE
35
3.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
HOCHAUFGEREINIGTEN
MEMBRANEN
35
3.1.1
MESSUNG
DER
5
'
-ND-AKTIVITAET
35
3.1.2
BESTIMMUNG
DER
M-ACHR
DICHTE
37
3.1.3
BESTIMMUNG
DES
RELATIVEN
GI/GO
GEHALTES
39
3.1.4
VERGLEICH
ZWISCHEN
LV
UND
RA
39
3.2 IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
GI/GO
PROTEINE
40
3.2.1
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
GI/GO
PROTEINEN
IN
MYOKARDIALEN
MEMBRANEN
40
3.2.2
QUANTIFIZIERUNG
VON
GI/GO
PROTEINEN
IN
MYOKARDIALEN
MEMBRANEN
41
3.3
AAGTP
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
GI/GO
PROTEINEN
43
3.3.1
VORBEDINGUNGEN
43
3.3.2
BASALE
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
GI/GO
PROTEINEN
47
3.3.3
AGONISTENABHAENGIGE
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
GI/GO
PROTEINEN
49
3.3.4
ABSOLUTE
WERTE
DER
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
VON
GI/GO
PROTEINEN
51
4
DISKUSSION
54
4.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
MEMBRANEN
55
4.2
G
PROTEIN
GEHALT
57
4.3
BASALE
G
PROTEIN
AKTIVITAET
58
4.4
CARBACHOL
INDUZIERTE
ZUNAHME
DER
AAGTP
BINDUNG
58
5
ZUSAMMENFASSUNG
61
6
LITERATURVERZEICHNIS
62
INHALTSVERZEICHNIS
7
ANHANG
70
7.1
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
70
LEBENSLAUF
72
ERKLAERUNG
73
DANKSAGUNG
74 |
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