Einfluß von Troglitazon und Natriumselenit auf Funktion, Wachstum und Apoptose von kultivierten Schweinethyreozyten:
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2005
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Einleitung 1
1 Material 7
1.1 Geräte für die Zellkultivierung 7
1.2 Geräte zur Messung der Radioaktivität 7
1.3 Medien und Reagenzien 8
1.4 Annexin V-Test / Facsanalyse 9
2 Methoden 10
2.1 Präparation der Schweineschilddrüsen 10
2.2 Zellauszählung 12
2.3 Herstellung der Thyreozytenkulturen und deren Stimulation mit
TSH, Natriumselenit und Troglitazon 14
2.4 Kulturbedingungen 15
2.5 Zeil-Ernte 15
2.5.1 Prinzipien des Annexin V-Tests 16
2.5.2 Herstellung der Zellkulturen für den Annexin V-Test 17
2.5.3 Kulturen, die mit Annexin V untersucht wurden 17
2.5.4 Zellaufbereitung / Zellernte für die Facsanalyse 17
2.6 Statistische Auswertung 18
3 Ergebnisse 19
3.1 125l-lodidaufnahme und 3H-Thymidineinbau in kultivierte
Schweine-thyreozyten 19
3.1.1 125l-lodidaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in retinol-
haltigem NCTC-Medium, in Abhängigkeit von unterschiedlichen
Konzentrationen an TSH 19
3.1.2 3H-Thymidineinbau in Schweinethyreozyten, kultiviert in
retinolhaltigem NCTC-Medium, in Abhängigkeit von
unterschiedlichen Konzentrationen an TSH 22
3.1.3 125l-lodidaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in retinol-
haltigem und retinolfreiem NCTC 135-Medium, in Abhängigkeit
unterschiedlicher Troglitazon- und TSH-Konzentrationen. 22
3.1.4 125l-lodidaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in retinol¬
freiem und retinolhaltigem NCTC 135-Medium in Abhängigkeit
unterschiedlicher Troglitazon- und TSH- Konzentrationen.
Vergleich mit DMSO, dem Lösungsmittel für Troglitazon. 29
3.1.5 125l-lodidaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in retinol¬
freiem und retinolhaltigem NCTC 135-Medium in Abhängigkeit
von Troglitazon-Konzentrationen zwischen 2,5 und 100)iM und
verschiedenen Retinol-Konzentrationen . Vergleich mit der
Wirkung von DMSO, dem Lösungsmittel von Troglitazon 34
3.1.6 3H-Thymidinaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in
NCTC 135-Medium mit und ohne Retinolzusatz, in Abhängigkeit
von unterschiedlichen Troglitazon- und TSH- Konzentrationen 45
3.1.7 3H-Thymidinaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in
NCTC-Medium mit und ohne Vitamin A, in Abhängigkeit
unterschiedlicher Troglitazon- und TSH-Konzentrationen.
Zusätzliche Kontrolle mit DMSO 51
3.1.8 3H-Thymidinaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in
NCTC 135-Medium mit und ohne Vitamin A, in Abhängigkeit
unterschiedlicher Troglitazon-Konzentrationen. Vergleich mit der
Wirkung von DMSO. 57
3.2 Beeinflussung der Apoptoserate von Thyreozyten durch DMSO,
Staurosporin (2,5 xM) und Troglitazon (5, 10, 25, 50 und 100
uM) 67
3.2.1 125l-Radioiodaufnahme in Schweinethyreozyten, kultiviert in
NCTC 135-Medium mit und ohne Retinolzusatz, in Abhängigkeit
von unterschiedlichen Konzentrationen an seleniger Säure 70
3.2.2 3H-Thymidineinbau in Schweinethyreozyten, kultiviert in NCTC
135-Medium mit und ohne Retinolzusatz, in Abhängigkeit von
unterschiedlichen Konzentrationen an seleniger Säure 73
4 Diskussion 77
4.1 Methoden 77
4.2 125l-lodidaufnahme und 3H-Thymidineinbau in Thyreozyten unter
dem Einfluß von Troglitazon und seleniger Säure in
Abhängigkeit von TSH und Vitamin A 79
4.2.1 Abhängigkeit von unterschiedlichen Konzentrationen an TSH in
retinolhaltigem NCTC 135-Medium 79
4.2.2 125l-lodidaufnahme und 3H-Thymidinaufnahme in Thyreozyten in
Abhängigkeit von unterschiedlichen Troglitazon- und TSH-
Konzentrationen. Kultur im Medium mit „physiologischer
Retinolkonzentration (0,6 uM) 81
4.2.3 125l-lodidaufnahme und 3H-Thymidinaufnahme in Thyreozyten in
Abbhängigkeit von unterschiedlichen Troglitazon-
Konzentrationen. Kulturen in retinolfreiem Medium und in
Medium mit subphysiologischer Konzentration. 83
4.2.4 Beeinflussung der Apoptoserate von Thyreozyten durch
Staurosporin, DMSO und Troglitazon (Abb. 28) 85
4.2.5 125l-lodidaufnahme und 3H-Thymidineinbau in Abhängigkeit von
unterschiedlichen Konzentrationen an seleniger Säure (Abb. 29-
32) 86
5 Zusammenfassung 88
6 Literatur 92
7 Anhang 104
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