Induktion einer potenten antitumoralen Immunantwort durch CpG-aktivierte dendritische Zellen: Vergleich zweier muriner Kolonkarzinom-Modelle
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2005
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
5
1.1
D
IE
DENDRITISCHE
Z
ELLE
ALS
ZENTRALE
S
CHALTSTELLE
DES
I
MMUNSYSTEMS
.
5
1.1.1
DENDRITISCHE
ZELLEN
UND
IHRE
ROLLE
IM
IMMUNSYSTEM
.
6
1.1.2
DENDRITISCHE
ZELLEN
IM
EINSATZ
.
8
1.1.3
DENDRITISCHE
ZELLEN
UND
DIE
ANTITUMORALE
IMMUNANTWORT
.
10
1.2
C
P
G-OLIGONUKLEOTIDE
-
IMMUNSTIMULATORISCHE
DNA
.
12
1.2.1
HISTORISCHER
UEBERBLICK
.
12
1.2.2
WIRKUNG
VON
CPG
IM
IMMUNSYSTEM
.
13
1.3
T
HERAPIE
DES
K
OLOREKTALEN
K
ARZINOMS
.
16
1.4
Z
IELE
DER
A
RBEIT
.
18
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
2.1
G
ERAETE
.
19
2.2
C
HEMIKALIEN
,
R
EAGENZIEN
UND
V
ERBRAUCHSMATERIAL
.
20
2.2.1
REAGENZIENSAETZE
.
20
2.2.2
ZELLKULTURMATERIAL
.
20
2.2.3
ZYTOKINE
UND
CHEMOKINE
.
20
2.2.4
OLIGODESOXYNUKLEOTIDE
(ODN)
.
21
2.2.5
PUFFER,
LOESUNGEN,
MEDIEN
UND
SEREN
.
21
2.2.6
ANTIKOERPER.
.
22
2.2.7
SONSTIGE
MATERIALIEN
.
23
2.3
T
UMOR
-Z
ELLLINIEN
.
24
2.3.1
KOLONKARZINOM-ZELLLINIE
COLON-26
.
24
2.3.2
NIERENKARZINOM-ZELLLINIE
RENCA
.
24
2.3.3
KOLONKARZINOM-ZELLLINIE
MC38
.
24
2.4
M
AUSSTAEMME
.
25
2.4.1
BALB/C-MAUSSTAMM
.
25
2.4.2
C5
7BL/6-MAUSSTAMM
.
25
2.4.3
FVB-MAUSSTAMM
.
25
2.5
K
ULTURSYSTEME
.
26
2.5.1
GENERIERUNG
UND
KULTUR
MURINER
DENDRITISCHER
ZELLEN
.26
2.5.2
KOKULTUR
DENDRITISCHER
ZELLEN
MIT
TUMORZELLEN.
28
2.5.3
KOKULTUR
MURINER
LYMPHOZYTEN
MIT
ALLOGENEN
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
29
2.6
A
NALYSEVERFAHREN
.
30
2.6.1
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE
.
30
2.6.2
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
30
2.6.3
3
H
THYMIDIN-PROLIFERATIONSASSAY
.
31
2.6.4
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FA
CS)
.
31
2.6.5
IN-VIVO
VAKZINIERUNGS-ASSAY
.
32
2
2.7
S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
.
35
3
ERGEBNISSE
.
36
3.1
O
PTIMIERUNG
DES
P
ROTOKOLLS
ZUR
G
ENERIERUNG
DENDRITISCHER
Z
ELLEN
IN
VITRO
.
36
3.1.1
ANREICHERUNG
PLURIPOTENTER
VORLAEUFERZELLEN
AUS
DEM
KNOCHENMARK
.
36
3.1.2
GM-CSF
IM
KULTURMEDIUM
.
37
3.1.3
IL-4
IM
KULTURMEDIUM
.
37
3.2
E
INFLUSS
UNTERSCHIEDLICHER
R
EIFESTIMULI
AUF
DENDRITISCHE
Z
ELLEN
IN
VITRO
.
38
3.2.1
CPG-ODN
1826
IST
DER
POTENTESTE
REIFESTIMULUS
DENDRITISCHER
ZELLEN
IN
VITRO
.
38
3.2.2
EINE
KOMBINATION
VON
CPG
UND
LPS
BEWIRKT
EINE
VERMEHRTE
IL-12-SEKRETION
.
42
3.2.3
KONTROLL-CPG
BEWIRKT
KEINE
REIFESTIMULATION
DENDRITISCHER
ZELLEN
IN
VITRO
.
43
3.3
I
NDUKTION
EINER
ANTITUMORALEN
I
MMUNANTWORT
IN
VRVO
.
45
3.3.1
CPG-AKTIVIERTE
DENDRITISCHE
ZELLEN
INDUZIEREN
EINE
POTENTE
TUMORPROPHYLAXE.
46
3.3.2
CPG-AKTIVIERTE
DC
INDUZIEREN
EINE
POTENTE
THERAPEUTISCHE
ANTI-TUMOR-WIRKUNG
.
47
3.4
V
ERGLEICH
DER
ANTITUMORALEN
I
MMUNANTWORT
ZWEIER
M
AUSSTAEMME
IN
VIVO
.
49
3.4.1
VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
BEI
PROPHYLAKTISCHER
VAKZINIERUNG
.
50
3.4.2
VERGLEICH
DER
ERGEBNISSE
BEI
THERAPEUTISCHER
VAKZINIERUNG
.
51
3.5
V
ERGLEICH
DER
I
MMUNZELLEN
ZWEIER
M
AUSSTAEMME
IN
VITRO
.
52
3.5.1
DENDRITISCHE
ZELLEN
AUS
C5
7BL/6-MAEUSEN
EXPRIMIEREN
WENIGER
MHC-MOLEKUELE
AUF
IHRER
OBERFLAECHE
ALS
DENDRITISCHE
ZELLEN
AUS
BALB/C-MAEUSEN
.
52
3.5.2
DIE
DENDRITISCHEN
ZELLEN
BEIDER
MAUSSTAEMME
VERHALTEN
SICH
BEZUEGLICH
DER
IL-12
PRODUKTION
GLEICH
.
55
3.5.3
DIE
DENDRITISCHEN
ZELLEN
BEIDER
MAUSSTAEMME
VERHALTEN
SICH
BEZUEGLICH
DER
STIMULATION
DER
T-ZELL-PROLIFERATION
GLEICH
.
56
3.5.4
DIE
T-ZELLEN
BEIDER
MAUSSTAEMME
VERHALTEN
SICH
BEZUEGLICH
DER
STIMULIERBARKEIT
DURCH
ALLOGENE
DENDRITISCHE
ZELLEN
GLEICH
.
57
3.5.5
ZUSAMMENFASSUNG
DES
VERGLEICHS
DER
BEIDEN
MAUSSTAEMME
.
58
3.6
C
HARAKTERISIERUNG
DER
ANTITUMORALEN
I
MMUNANTWORT
NACH
V
AKZINIERUNG
MIT
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
59
3.6.1
DIE
INDUZIERTE
IMMUNANTWORT
IST
SYSTEMISCH
WIRKSAM.
59
3.6.2
DIE
INDUZIERTE
IMMUNANTWORT
BIETET
EINEN
LANGZEITSCHUTZ
AUCH
BEI
RE-EXPOSITION
.
60
3.6.3
DIE
INDUZIERTE
IMMUNANTWORT
IST
SPEZIFISCH
GEGEN
KOKULTUR-TUMORZELLEN
GERICHTET.
.
61
3.7
Z
USAMMENFASSUNG
DER
E
RGEBNISSE
.
63
3.
7.
1
OPTIMIERUNG
DER
GENERIERUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
63
3.7.2
TUMORTHERAPIE
MIT
DENDRITISCHEN
ZELLEN
BEI
VERSCHIEDENEN
MAUSSTAEMMEN
IM
VERGLEICH.
64
3
4
DISKUSSION
.
65
4.1
M
ETHODIK
ZUR
G
ENERIERUNG
UND
K
ULTUR
DENDRITISCHER
Z
ELLEN
.
65
4.1.1
GEWINNUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
AUS
KNOCHENMARKSVORLAEUFERZELLEN
.
65
4.1.2
ROLLE
VON
GM-CSF
.
66
4.1.3
ROLLE
VON
IL-4
.
66
4.2
E
INFLUSS
UNTERSCHIEDLICHER
S
TIMULI
AUF
DIE
R
EIFE
DENDRITISCHER
Z
ELLEN
.
67
4.2.1
BEDEUTUNG
DES
REIFEZUSTANDES
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
67
4.2.2
TNF-A
ALS
REIFESTIMULUS
.
68
4.2.3
LPS
ALS
REIFESTIMULUS
.
69
4.2.4
CPG-ODN
ALS
REIFESTIMULUS
.
70
4.3
P
ROTOKOLL
ZUR
T
UMORVAKZINIERUNG
.
71
4.3.1
ANTIGENPULSUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
71
4.3.2
AKTIVIERUNG
DER
GEPULSTEN
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
72
4.3.3
ANWENDUNG
DER
VAKZINE
.
73
4.4
I
MMUNANTWORT
IN
ZWEI
M
AUSSTAEMMEN
.
74
4.4.1
EINFLUSS
VON
THL
UND
TH2
AUF
DIE
IMMUNANTWORT
.
74
4.4.2
EINFLUSS
ANTIGENPRAESENTIERENDER
MOLEKUELE
AUF
DIE
INDUKTION
DER
IMMUNANTWORT
.
75
4.5
C
HARAKTERISIERUNG
DER
I
MMUNANTWORT
.
76
4.5.1
SYSTEMISCHE
WIRKSAMKEIT
DER
DC-BASIERTEN
VAKZINIERUNG
.
76
4.5.2
LANGZEIT
WIRKSAMKEIT
DER
DC-BASIERTEN
VAKZINIERUNG.
76
4.5.3
ANTIGENSPEZIFITAET
DER
DC-BASIERTEN
VAKZINIERUNG
.
77
4.6
A
NWENDUNG
VON
DENDRITISCHEN
Z
ELLEN
IN
KLINISCHEN
S
TUDIEN
.
78
4.6.1
PROBLEME
DER
THERAPIE
MIT
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
78
4.6.2
AUSBLICK
.
80
4.7
Z
UKUNFT
VON
C
P
G-ODN
IN
DER
I
MMUNTHERAPIE
.
81
4.7.1
CPG
ALS
ADJUVANS
BEI
INFEKTIONEN
.
81
4.7.2
CPG
ALS
ADJUVANS
BEI
TUMOREN.
82
4.7.3
PROBLEME
DER
THERAPIE
MIT
CPG-ODN
.
83
4.7.4
UNTERSCHIEDE
DER
CPG-ODN
.
83
4.7.5
ALTERNATIVE
ADJUVANTIEN
IN
DER
TUMORTHERAPIE
.
84
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
85
6
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
.
87
7
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
88
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
90 |
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