Posttranskriptionelle Expressionskontrolle Kollagen modifizierender Enzyme unter Hypoxie und Eisenmangel:
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| Published: |
2004
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3
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
3
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
5
1.
EINLEITUNG
.
6
1.1
ZIELSTELLUNG
.
6
1.2
MYOKARDHYPERTROPHIE
.
6
1.3
KOLLAGENSYNTHESE
.
7
1.3.1
PROLYL
4-HYDROXYLASE
(P4H)
.
8
1.3.2
MATRIX-METALLOPROTEINASEN
(MMPS)
.
8
1.4
HYPOXIE
.
9
1.4.1
ANPASSUNG
DER
GENEXPRESSION
AN
HYPOXIE
.
9
1.4.2
HYPOXIE-WAHRNEHMUNG
(O2-SENSING)
.
11
1.4.3
EISENMANGEL
UND
HYPOXIE
.
12
1.4.4
REGULATION
DER
KOLLAGENSYNTHESE
UNTER
HYPOXIE
.
12
1.5
POSTTRANSKRIPTIONELLE
EXPRESSIONSKONTROLLE
.
13
1.5.1
RNA/PROTEIN
INTERAKTION
.
14
1.5.2
UNTRANSLATIERTE
REGIONEN
(UTRS)
ALS
REGULATIVE
ELEMENTE
.
16
1.5.2.1
5
'
UTRS
.
16
1.5.2.2
3
'
UTRS
.
18
1.5.3
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
KOLLAGENSYNTHESE
.
19
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
20
2.1
ZELLKULTUR
.
20
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
20
2.3
RNA-ISOLIERUNG
.
20
2.4
CYTOSOL-ISOLIERUNG
.
20
2.4.1
CYTOSOL-ISOLIERUNG
FUER
SPEZIELLE
ANWENDUNGEN
.
21
2.5
VERWENDETE
SEQUENZEN
.
21
2.6
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
22
2.7
KLONIERUNGSSTRATEGIEN
UND
VEKTOREN
.
23
2.7.1
VERFAHREN
FUER
DIE
ERSTELLUNG
VON
IN
VITRO
TRANSKRIPTEN
.
23
2.7.2
VERFAHREN
FUER
DIE
ERSTELLUNG
VON
LUCIFERASE
EXPRESSIONSVEKTOREN
.
24
2.8
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
24
2.9
RNA
QUANTIFIZIERUNG
.
25
2.9.1
RT-PCR
.
25
2.9.2
NORTHERN
BLOTTING
.
25
2.10
PROTEIN
QUANTIFIZIERUNG
.
25
2.10.1
WESTERN
BLOTTING
.
25
2.10.2
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
26
2.11
GELATINE-ZYMOGRAPHIE
.
26
2.12
REPORTERGEN
(LUCIFERASE)-ASSAYS
.
27
2.13
ELECTROPHORETIC-MOBILITY-SHIFT-ASSAY
(EMSA)
.
27
2.13.1
SUPERSHIFT
ASSAYS
.
27
2.14
UV-CROSSLINKING
.
28
2.15
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.
29
2.15.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
ZUR
ISOLIERUNG
SPEZIFISCHER
RNA-BINDUNGSFAKTOREN
29
2.15.2
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
ZUR
ISOLIERUNG
VON
POTENTIELLEN
NUKLEINSAEURE
BINDUNGSFAKTOREN
.
30
2.16
PROTEIN
IDENTIFIZIERUNG
.
31
4
2.17
MRNA-STABILITAET
.
31
2.18
POLYSOMENGRADIENTEN
ZENTRIFUGATION
.
31
2.19
DIFFERENTIELLE
ZENTRIFUGATION
ZUR
SEPARIERUNG
ZELLULAERER
FRAKTIONEN
.
32
2.20
THEORETISCHE
SEQUENZBETRACHTUNG
.
33
2.21
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
33
3.
ERGEBNISSE
.
34
3.1
GENEXPRESSION
UNTER
HYPOXIE
UND
EISENMANGEL
.
34
3.2
EXPRESSION
KOLLAGEN
MODIFIZIERENDER
ENZYME
UNTER
HYPOXIE
.
39
3.3
THEORETISCHE
MRNA-STRUKTUR
UND
MOEGLICHE
KONTROLLELEMENTE
DER
UTRS
.
42
3.4
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
PROLYL
4-HYDROXYLASE
ALPHA
(I)
.
45
3.4.1
EINFLUSS
DER
P4H-ALPHA
(I)
UTRS
AUF
DIE
GENEXPRESSION
.
46
3.4.2
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
P4H-ALPHA
(I)
UTR-BINDENDEN
PROTEINEN
48
3.4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
P4H-ALPHA
(I)
5
'
-
UND
3
'
UTR-BINDUNGSMOTIVE
.
59
3.4.4
ZUSAMMENFASSUNG:
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
P4H-ALPHA
(I)
EXPRESSION
UNTER
O2
UND
EISENMANGEL
.
63
3.5
DIFFERENTIELLE
REGULATION
DER
P4H-ALPHA
ISOFORMEN
.
66
3.6
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
MATRIX-METALLOPROTEINASE-9
.
68
3.6.1
MMP-9
3
'
UTR/PROTEIN-WECHSELWIRKUNG
UNTER
EISENMANGEL
.
70
3.6.2
REGULATION
DER
MMP-9
EXPRESSION
DURCH
NUCLEOLIN
.
71
3.6.3
ZUSAMMENFASSUNG:
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DER
MMP-9
EXPRESSION
UNTER
HYPOXIE
UND
EISENMANGEL
.
75
3.7
HYPOXISCHE
TRANSLATION
.
76
4.
DISKUSSION
.
82
4.1
ANPASSUNG
DER
GENEXPRESSION
AN
HYPOXIE
.
82
4.2
EXPRESSION
KOLLAGEN
MODIFIZIERENDER
ENZYME
UNTER
HYPOXIE
.
83
4.3
POSTTRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
KOLLAGEN
MODIFIZIERENDER
ENZYME
.
85
4.3.1
P4H-ALPHA(I)
.
86
4.3.2
UNTERSCHIEDE
IN
DER
EXPRESSIONSREGULATION
DER
P4H-ALPHA
(I)
UND
(II)
ISOFORMEN
.
90
4.3.3
MMP-9
.
92
4.4
REGULATIVE
MRNA-BINDENDE
PROTEINE
UNTER
HYPOXIE
UND
EISENMANGEL
.
95
4.4.1
NUCLEOLIN
.
95
4.4.2
HNRNP-A2/BL
.
96
4.4.3
ANNEXIN
II
.
96
4.4.4
FMRP
.
97
4.5
HYPOXISCHE
TRANSLATION
.
98
4.6
AUSBLICK
.
101
ZUSAMMENFASSUNG
.
102
CONCLUSION
.
103
LITERATURVERZEICHNIS
.
104
PUBLIKATIONEN
.
121
DANKSAGUNG
.
121 |
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