Cholinerge Innervation von Leukozyten:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2005
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| Beschreibung: | Berlin, Charité, Univ.-Med., Diss., 2005 |
| Beschreibung: | 71 S. graph. Darst. 21 cm |
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1. Einleitung
1.1 Das Modell des neuroimmunlogischen Dialogs 6
1.2 Der Neurotransmitter Azetylcholin 7
1.3 Die Azetylcholinrezeptoren 8
1.3.1 Muskarinerge Azetylcholinrezeptoren 8
1.3.2 Nikotinerge Azetylcholinrezeptoren 9
1.4. Interleukine und Kalzium als Botenstoff 10
1.5. Effekte cholinerger Stimulation auf den Kalziumspiegel leukozytärer Zellen 11
1.6. Untersuchungen nach klinischen Gesichtspunkten 12
1.7. Fragestellung 13
1.7.1 Zellstimulationsexperimente 13
1.7.2 Durchflusszytometrie 13
1.7.3 Kalziummessungen 13
2. Material und Methoden
2.1 Material 14
2.1.1 Chemikalien 14
2.1.2 Antikörper und Konjugate 14
2.1.3 Puffer und Zellkulturmedien 15
2.1.4 Verbrauchsmaterial 15
2.1.5 EL1SA Test-Kits 15
2.1.6 Geräte 16
2.2 Methoden
2.2.1 Isolation von PBMCs 17
2.2.2 Auswahl und Kultur der Zelllinien 18
2.2.3 Zellstimulationsexperimente mittels LPS 19
2.2.4 Durchflusszytometrische Untersuchungen 21
2.2.4.1 Prinzip der Durchflusszytometrie 21
2.2.4.2 Antikörper und Konjugate 22
2.2.4.3 Durchführung der Färbung 23
2.2.4.4 Signalverstärkung mittels Liposomentechnik 24
2.2.4.5 Möglichkeiten der Auswertung 24
2.2.5 Messung intrazellulärer Kalziumsspiegel mittels Fluoreszenzkamera 25
2.2.5.1 Prinzip der Methode 25
2.2.5.2 Färbe- und Messtechnik 27
3. Ergebnisse
3.1 Stimulationsexperimente mittels LPS 29
3.1.1 Untersuchung zur gleichmäßigen Stimulierbarkeit von PBMCs mittels LPS 29
3.1.2 Untersuchung des Einflusses cholinerger Stimulation auf die LPS induzierte
Zytokinausschüttung 30
3
3.2 Durchflusszytometrische Versuche zur Darstellung cholinerger Rezeptoren 32
3.2.1 Rezeptordarstellung auf Zelllinie TE 671 und HaCat als Positivkontrolle 32
3.2.2 Rezeptordarstellung auf PBMCs 35
3.2.3 Rezeptordarstellung auf unstimulierten PBMCs 35
3.2.4 Rezeptordarstellung auf stimulierten PBMCs 37
3.3 Messung intrazellulärer Kalziumkonzentrationsverläufe mittels Fluoreszenz¬
kamera unter cholinerger Stimulation 38
3.3.1 Messung an der Medulloblastomzelllinie TE 671 39
3.3.2 Messung an PBMCs gesunder Spender 41
3.3.3 Blockierungsversuche 45
3.3.4 Messung an leukozytären Zelllinien 45
3.3.5 Messung von Patientenblut (Rheumatiker) bzw. LPS vorstimulierten Zellen 46
4. Diskussion 47
4.1 Kritik der Methoden . 47
4.1.1 Zellstimulationsexperimente 48
4.1.2 Durchflusszytometrie 49
4.1.3 Intrazelluläre Kalziummessungen 51
4.2. Interpretation der Ergebnisse und Diskussion 51
4.3 Methodische Vorschläge und inhaltlicher Ausblick 59
5. Zusammenfassung 60
6. Quellen 62
7. Danksagung 69
4
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