Analyse der differentiellen Expression von c-jun und p-c-jun und der Aktivität der c-jun N-terminalen Kinase 1 sowie der Stresskinase p38 in intrinsischen ZNS-Neuronen nach experimenteller Axotomie:
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2004
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Inhaltsverzeichnis
1. Zusammenfassung 1
2. Einleitung 3
2.1 Experimentelle Paraplegiologie 3
2 2 Stand der Forschung 4
2.2.1 Reaktionen des peripheren Nervensystems nach Axotomie 4
2 2 2 Reaktionen des zentralen Nervensystems nach Axotomie 5
2.2.2.1 Reaktionen an und distal der Lasion 5
2 2 2 2 Reaktionen proximal der Läsion 6
2 3 C-jun, P-c-jun 8
2.3 1 Basalexpression von c-jun 10
2.4 C-jun N-terminale Kinasen (JNK) 10
2.5 Stresskinase p38 11
2.6 Anatomie der untersuchten Systeme 13
2 6.1 Rückenmark 13
262 Nucleusruber 16
27 Fragestellung 19
3. Material und Methodik 20
3 1 Versuchstiere 20
3 2 Operation und Gewebsaufbereitung 21
3.2.1 Spinale Hemisektion 21
32 2 Postoperativer Verlauf 21
323 Gewebsentnahme 22
3 2 4 Gewebsvorbereitung für die Immunhistochemie 22
3 2 5 Ausdehnung der Läsion 22
3.3 Immunhistochemie 23
3 3.1 Darstellung des c-jun Antigens 23
3.3.2 Darstellung des p-c-jun Antigens 24
Inhaltsverzeichnis
3.4 Kolokalisation des Tracers Fast Blue
mit c-jun und p-c-jun im Clarke s Nucleus 24
3.4.1 Perfusion und Kryoprotektion 24
3.4.2 Tracing und Immunhistochemie 24
3.5 Gewebeisolation aus dem Nucleus ruber
und dem Clarke s Nucleus 25
3.5.1 Isolierung des Nucleus ruber 26
3.5.2 Isolierung des Clarke s Nucleus 26
3.6 Nachweis von c-jun RNA im Clarke s Nucleus 27
3.6.1 RNA Isolation 27
3.6.2 DNA Verdau _28
3.6.3 C-DNA Synthese 28
3.6.4 Polymerase Kettenreaktion zur Detektion der c-jun RNA 29
3.6.5 Polymerase Kettenreaktion zur Detektion der Cyclophyllin RNA 29
3.7 Aktivitätsbestimmung der c-jun N-terminalen Kinase 1
und der p38 Stresskinase 30
3.7.1 Proteinextraktion 30
3.7.2 Kinase Assay 30
4. Ergebnisse 32
4.1 Kontrolltiere 32
4.1.1 C-jun Expression im unoperierten Rückenmark 32
4.1.2 P-c-jun Expression im unoperierten Rückenmark _32
4.1.3 P-c-jun Expression im unverletzten Nucleus ruber 32
4.2 C-jun Immunreaktivität im Clarke s Nucleus
nach zervikaler Hemisektion _34
4.3 P-c-jun Immunreaktivität im Clarke s Nucleus
nach zervikaler Hemisektion 34
4.4 Tracing mit Fast Blue 38
4.5 P-c-jun Immunreaktivität im Nucleus ruber nach Hemisektion 40
4.5.1 Darstellung des p-c-jun Antigens im Nucleus ruber
nach zervikaler Hemisektion 40
Inhaltsverzeichnis
4.5.2 Darstellung des p-c-jun Antigens im Nucleus ruber
nach thorakaler Hemisektion 40
4.6 mRNA Expression im Clarke s Nucleus
nach zervikaler Hemisektion 46
4.7 Aktivität der c-jun N-Terminalen Kinase 1
im Nucleus ruber nach zervikaler Hemisektion 48
4.8 Aktivität der p38 Stresskinase
im Nucleus ruber nach zervikaler Hemisektion 48
5. Diskussion 50
5.1 C-jun und p-c-jun Immunreaktivität
in Abhängigkeit von der Distanz zur Läsion 50
5.2 C-jun und p-c-jun als Marker für Regeneration oder Degeneration?54
5.3 C-jun mRNA Expression im Clarke s Nucleus 57
5.4 Mechanismen der c-jun Aktivierung 58
5.5 Stressreaktionen nach Axotomie 59
5.6 Zusammenfassende Schlussfolgerung 61
6. Literaturverzeichnis 62
7. Danksagung 78
8. Lebenslauf 79
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