Aviditätsmessungen von Borrelien-spezifischen IgG-Antikörpern bei Patienten mit unterschiedlichen Manifestationen der Lyme Borreliose:
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2004
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Autor: Beitlich, Petra
Jahr: 2004
INHALTSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGEN 1
EINLEITUNG UND PROBLEMSTELLUNG 2-18
1.1 Einleitung 2
1.1.1 Historischer Überblick 2
1.1.2 Erreger und Vektoren 3
1.1.3 Infektion 4
1.1.4 Klinik 5
1.1.5 Immunreaktion 6
1.1.5.1 Allgemein 6
1.1.5.2 Affinität der IgG-Antikörper und ihre Reifung 7
1.1.5.3 Avidität der IgG-Antikörper 8
1.1.6 Diagnose 8
1.1.7 Erregernachweis 10
1.1.7.1 Direkter Nachweis 10
1.1.7.1.1 Kultur 10
1.1.7.1.2 Histologie 10
1.1.7.1.3 Antigennachweis 11
1.1.7.1.4 Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) 11
1.1.7.2 Indirekter Nachweis 12
1.1.7.2.1 Herkömmliche Techniken 12
1.1.7.2.2 Immunglobulinklassen-spezifischer ELISA 12
1.1.7.2.3 Immunoblotverfahren 13
1.1.8 Therapie 13
1.1.9 Prophylaxe 14
1.1.10 Impfstoff 15
1.2 Problemstellung und Hintergrund 15
1.3 Zielsetzung 17
MATERIAL UND METHODEN 19-35
2.1 Material 19
2.1.1 Untersuchungsmaterial 19
2.1.1.1 Chemikalien 19
2.1.1.2 Materialien 20
2.1.1.3 Geräte 20
2.1.1.4 Computer und Programme 20
2.1.1.5 Statistik 20
2.1.1.6 Markierte Antikörper 21
2.1.1.7 Molekulargewichtsmarker für SDS-Page 21
2.1.2 Puffer und Lösungen 21
2.1.2.1 Pufferund Lösungen für SDS-Polyacrylamid Gelelektrophorese 21
2.1.2.2 Pufferund Lösungen für Western Blot 22
2.1.2.3 Pufferund Lösungen für ELISA 23
2.1.2.4 Sonstige Puffer 24
2.1.3 Untersuchte Seren 24
2.1.3.1 Patientenseren 24
2.1.3.2 Kontrollkollektiv 25
2.2 Methoden 26
2.2.1 Enzyme-Iinked Immunosorbent Assay (ELISA) 26
2.2.1.1 Testprinzip 26
2.2.1.2 Durchführung 28
2.2.2 Immunoblot 28
2.2.2.1 Diskontinuierliche SDS-PAGE 29
2.2.2.2 Western Blot 30
2.2.2.3 Immunologischer Nachweis transferierter Proteine 31
2.2.3 Aviditäts-ELISA 32
2.2.4 Statistik 32
2.2.4.1 Erklärung einiger statistischer Begriffe 32
2.2.4.2 Kruskal-Wallis Test 34
2.2.4.3 Vorraussetzung zur Durchführung eines Kruskal-Wallis Tests 34
2.3 Durchführung der Testungen 34
ERGEBNISSE 36-54
3.1 Etablierung des Aviditäts-ELISA 36
3.1.1 Austesten der optimalen Urea-Konzentration 36
3.1.2 Austestung der optimalen Inkubationszeit 38
3.1.3 Berechnung des Aviditätsindex 38
3.2 Zusammenstellung eines Kontrollkollektivs 39
3.2.1 Auswertung der Fragebögen 39
3.2.2 Immunologische Untersuchungen auf Borrelia burgdorferi
spezifische Antikörper bei 700 gesunden Studenten 40
3.2.3 Serologie und Anamnese 41
3.2.4 Kriterien zu Aufnahme einer Probe in das Kontrollkollektiv 41
3.3 Ananmestische Daten und Ergebnisse der Kollektive im
Zwei-Test-Protokoll 41
3.3.1 Ergebnisse der Studenten 42
3.3.2 Ergebnisse der Patienten 43
3.3.2.1 Ergebnisse der EM Patienten 43
3.3.2.2 Ergebnisse der NB Patienten 44
3.3.2.3 Ergebnisse der ACA Patienten 44
3.3.3 Patienten und Gesunde im Vergleich 45
3.4 Ergebnisse im Aviditäts-ELISA 48
3.5 Statistischen Auswertung des Aviditäts-ELISA 50
3.5.1 Verteilung der Kollektive 50
3.5.2 Vergleich der erhobenen Daten 51
3.5.2 Abschlussverfahren auf Basis des Kruskal-Wallis Tests 52
DISKUSSION DER ERGEBNISSE 55-68
4.1 Bedeutung der Ergebnisse 55
4.1.1 Etablierung des Aviditäts-ELISA 55
4.1.2 Screening der gesunden Studenten 55
4.1.3 Einsatz des Zwei-Test-Protokoll 57
4.1.3.1 Bewertung der ELISA Ergebnisse 57
4.1.3.2 Bewertung der Western Blot Ergebnisse 59
4.1.4 Einsatz des Aviditäts-ELISA 60
4.1.5 Diskrepanz der Ergebnisse zu einer bereits veröffentlichten
Studie zur Aviditätsmessung B.b. spezifischer IgG-Antikörper 62
4.2 Fehlermöglichkeiten 63
4.2.1 Auswahl des Kontrollkollektives 63
4.2.2 Auswertung des ELISA 63
4.2.3 Präabsorption 64
4.2.4 Auswertung der Western Blots 64
4.2.5 Größe der Kollektive 65
4.2.6 Statistik 65
4.3 Zusammenfassung 66
4.3.1 Problematik 66
4.3.2 Anwendung des Aviditäts-ELISA in der Routinediagnostik 67
4.3.3 Ausblick 68
ZUSAMMENFASSUNG 69
LITERATURVERZEICHNIS 70-80
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF
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