Zytokine und Adhäsionsmoleküle in der rechtsmedizinischen Vitalitäts- und Wundaltersbestimmung:
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Aachen
Shaker
2004
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|---|---|
| adam_text | 1. Einleitung 1
1.1. Kurar AbriB (ibar bastenande Methodan dar VKaHttts- und
Wundaltersbeatimniung in dar Rechtamadizln 1
1X Zur Badautung von Zytokinen und Adhaatonamolakulan 5
1.3. ZMsetzung d«r vorilcgcndMt Studi* 13
2. Material und Methodlk 15
2.1. OlMreichtulMrdasgMamteUntMwichun0sgut(Wundaltor»-
bestbnmung) 15
13.. bnmunhistochwnisciwUntwsuchungwi 16
2.2.1. Untersuchungsgut 16
2.2.2. Eingesetzte Primdrantikdrper 17
2.2.3. Grundprinzip der Immunhistochemie und Gewebe-
vorbereitung 20
2.2.4. APAAP-Methode 21
2.2.5. LSAB-Methode 23
2.2.6. Immunhistochemische Auswertung 24
2.3. BiocnwnisclM Untarauchungwi 26
2.3.1. Untersuchungsgut 26
2.3.2. Gewebeextraktion 29
2.3.3. Proteingehattsbestimmung 32
2.3.4. ELISA-Messungen (Zytokine und Adhasionsmotekule) 33
2.3.5. Auswertung und Statisbk 37
2A Motokularbiologischo Unterauchungwi 39
2.4.1. Untersuchungsgut 39
2.4.2. RNA-lsofierung und Analyse der Gesamt-RNA 39
2.4.3. RT-PCR und Southern Blot 42
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1. Kurzer AbriB iiber bestehende Methoden der Vitalities- und
WundaKersbestimmung in der Rechtsmedizin 1
1.2. Zur Bedeutung von Zytokinen und AdhSsionsmolekiilen 5
1.3. Zielsetzung der voriiegenden Studie 13
2. Material und Methodik 15
2.1. Ubersicht iiber das gesamte Untersuchungsgut (Wundatters-
bestimmung) 15
2.2. Immunhistochemische Untersuchungen 16
2.2.1. Untersuchungsgut 16
2.2.2. Eingesetzte Primarantikorper 17
2.2.3. Grundprinzip der Immunhistochemie und Gewebe-
vorbereitung 20
2.2.4. APAAP-Methode 21
2.2.5. LSAB-Methode 23
2.2.6. Immunhistochemische Auswertung 24
2.3. Biochemische Untersuchungen 26
2.3.1. Untersuchungsgut 26
2.3.2. Gewebeextraktion 29
2.3.3. Proteingehaltsbestimmung 32
2.3.4. ELISA-Messungen (Zytokine und Adhasionsmolekule) 33
2.3.5. Auswertung und Statistik 37
2.4. Molekularbiologische Untersuchungen 39
2.4.1. Untersuchungsgut 39
2.4.2. RNA-lsolierung und Analyse der Gesamt-RNA 39
2.4.3. RT-PCR und Southern Blot 42
2.5. Postmortale tierexperimentelle Untersuchungen zur supra-
46
vitaten Chemotaxis
2.5.1. Experimentemitlnter1eukin-1a
2.5.2. Experimente mit FMLP
2.5.3. Erganzende immunhistochemische Untersuchungen 47
3. Ergebnisse 49
3.1. Immunhistochemisches Verteilungstnuster von Zytokinen
und Adhasionsmolekiilen in menschlichen Hautwunden 49
3.1.1. Proinflammatorische Zytokine (IL-1 p, IL-6, TNF-a) 49
3.1.2. Transformierende Wachstumsfaktoren (TGF-o, TGF-p1) 61
3.1.3. Adhasionsmolekiile (ICAM-1, VCAM-1, E-Selektin, L-Selektin) 70
3.2. Biochemisch-quantitative Analytik von proinflammatorischen
Zytokinen und Adhasionsmolekiilen in Wundextrakten 82
3.2.1. Proinflammatorische Zytokine (IL-1 p, IL-6, TNF-a) 82
3.2.2. Adhasionsmolekule (ICAM-1, VCAM-1, E-Selektin, L-Selektin) 95
3.3. Amplifikation von mRNA aus postmortaler menschlicher Haut
via RT-PCR: Modellbeispiel p-Aktin 102
3.3.1. RNA-lsolierbarkeit aus Leichenhaut 102
3.3.2. Amplifikation der p-Aktin-mRNA 103
3.4. Zytokine als potentielle Induktoren einer supravitalen
Chemotaxis am Beispiel des IL-1a 106
3.4.1. Normale Hauthistologie (Vergleichsproben) 106
3.4.2. Hauthistologie nach supravitaler Applikation von PBS
(Kontrollproben) 107
3.4.3. Hauthistologie nach supravitaler Applikation von IL-1 a
und FMLP 108
3.4.4. Hauthistologie nach vitaler Applikation von IL-1 a und FMLP 111
4. Diskussion 112
4.1. Proinflammatorische Zytokine (IL-ip, IL-6, TNF-a) 112
4.1.1. Immunhistochemisches Verteilungsmuster von
proinflammatorischen Zytokinen 112
4.1.2. Biochemisch-quantitative Untersuchungen von
proinflammatorischen Zytokinen 120
4.2. Transformierende Wachstumsfaktoren (TGF-a, TGF-pi) 132
4.3. Adhasionsmolekiile (ICAM-1, VCAM-1, E-Selektin, L-Solektin) 139
4.3.1 • Immunhistochemisches Verteilungsmuster von
Adhasionsmolekulen 139
4.3.2. Biochemisch-quantitative Untersuchungen von
Adhasionsmolekulen 145
4.4. Kurze Synopse der Untersuchungen zur Vttalitats- und Wund-
altersbestimmung von menschlichen Hautverietzungen 151
4.5. Zur Ampltfizierbarkeit von mRNA aus postmortaler
menschlicher Haut 154
4.6. Zytokine als potentielle Induktoren einer supravitalen
Chemotaxis 158
5. Zusammenfassung 163
6. Literaturverzeichnis 166
7. Danksagung 191
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