GluR-B und GluR-Blong: Einfluss auf die synaptische Lokalisation und Transmission von AMPA-Rezeptoren im Hippokampus
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2004
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Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Übersicht 1
1.1.1 Glutamat gesteuerte Ionenkanäle 2
1.1.2 AMPA Rezeptoren 3
1.1.3 Modulation der synaptischen Reizleitung durch AMPA und NMDA Rezeptoren 6
1.1.4 Die Rolle von GluR A und GluR B bei der Plastizität hippokampaler Synapsen 8
1.2 Ziel der Arbeit 11
1.3 Einführung zu BCAP 12
1.3.1 Stand des BCAP Projekts zu Beginn der Promotion 12
2. Ergebnisse 15
2.1 GluR Blong 15
2.1.1 Entstehung und Sequenz des C Terminus von GluR B]ong 15
2.1.2 Expression von GluR B|ong mRNA 16
2.1.3 Expression und Trafficking der GluR Bk,ng Rezeptor Untereinheit 17
2.1.4 Funktionalität der EGFPGluR B(Q)long Rezeptor Untereinheit 19
2.1.5 Elektrophysiologischer Nachweis der EGFPGluR B(Q)|0ng Rezeptor Untereinheit in der Synapse 20
2.1.6 Die Rolle des endogenen GluR B]ong Rezeptor Untereinheit bei der synaptischen Transmission 23
2.2 BCAP 24
2.2.1 Charakteristische Eigenschaften von BCAP 24
2.2.2 Transiente BCAP Expression: Effekte auf stabil GIuR B exprimierende HEK293 Zellen 25
2.2.3 Peptiddiffusion: Änderungen der synaptischen Plastizität bei Blockade der BCAP GluR B
Interaktion 28
2.2.4 Virale Überexpression C terminal mutierter GluR B Rezeptor Untereinheiten 32
2.2.5 Virale Überexpression von BCAP: Welche Rolle spielt die Sec7 Domäne? 36
2.2.6 Liegt die Wirkung von BCAP auf AMPA Rezeptoren außerhalb der Sec7 Domäne? 41
2.3 Ca^ permeable AMPA Rezeptoren 43
2.3.1 Mausmutanten mit Ca2+ permeablen AMPA Rezeptoren 43
2.3.2 Immunohistochemie in Mäusen mit Ca2+ permeablen AMPA Rezeptoren 45
2.3.3 Funktioneller Nachweis Ca2+ permeabler AMPA Rezeptoren in den beschriebenen Mausmutanten _ 47
2.3.4 Zelluläres LTP in Mausmutanten mit Ca:+ permeablen AMPA Rezeptoren 48
2.3.5 EPSC Amplituden in Abhängigkeit vom Genotyp 51
3. Diskussion . __ 52
3.1 GluR BIong__ . . 52
Inhaltsverzeichnis
3.2 BCAP 54
3.3 Ca2+ permeable AMPA Rezeptoren 57
3.4 Zusammenfassung 60
4. Material und Methoden 61
4.1 Elektrophysiologie 61
4.1.1 Versuchsaufbau _ 61
4.1.2 Präparation von Hirnschnitten für die Elektrophysiologie 62
4.1.3 Messung evozierter synaptischer Ströme 62
4.1.4 LTP Messung 63
4.1.5 LTD Messung 64
4.1.6 Messungen von transfizierten HEK293 Zellen 64
4.1.7 Statistik und Analyse 64
4.2 Zellkultur und Molekularbiologie 65
4.2.1 Klonierung der Sindbis Konstrukte 65
4.2.2 /tt j(fw Hybridisierung 66
4.2.3 Konfokale Aufnahmen 66
4.2.4 Organotypische hippokampale Schnittkulturen 66
4.2.5 HEK293 Transfektion 67
4.2.6 Herstellung der Sindbis Viren 67
4.2.7 Westernblots 69
4.2.8 Genotypisierung der Mausmutanten mittels PCR 70
4.2.9 Anfertigung von Vibratom Gevvebeschnitten des Mausgehirns 71
4.2.10 Immunhistochemische Untersuchungen und Immunfluoreszenz Markierungen von Vibratom
Gevvebeschnitten . 71
5. Abkürzungsverzeichnis 73
6. Literaturverzeichnis 75
7. Publikationen und Kongressbeiträge 85
7.1 Publikationen . 85
7.2 Kongresse . . 85
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