Untersuchungen zu Ektoenzymen auf humanen Monozyten: Rolle von CD38:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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INHALTSVERZEICHNIS
TH
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
VI
I.
EINLEITUNG
1
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
14
II.L
ZELLBIOLOGISCHE
UND
IMMUNHISTOCHEMISCHE
METHODEN
14
0.1.1
PUFFER,
MEDIEN,
ZUSAETZE
14
O.1.1.1
LOESUNGEN
FUER
DIE
MESSUNG
VON
ZELLZYKLUS/APOPTOSE
15
H.L.1.2
PUFFER
FUER
DIE
REINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
(IGG
1)
MIT
PROTEIN
GAGAROSE
16
0.1.2
ANTIKOERPER
FUER
IMMUNFLUORESZENZ
17
0.1.3
ISOLATION
MONONUKLEAERER
ZELLEN
MIT
FICOLL-PAQUE
18
0.1.4
MONOZYTEN-ISOLATION
DURCH
GEGENSTROMELUTRIATION
18
0.1.5
ISOLATION
VON
STAMMZELLEN
AUS
NABELSCHNURBLUT
19
H.1.6
ZELLKULTUR
20
FL.1.6.1
MONOZYTEN
20
O.1.6.2
DIFFERENZIERUNG
VON
MONOZYTEN
ZU
MAKROPHAGEN
20
II.
1.63
ZELLLINIEN
20
0.1.7
HERSTELLUNG
VON
ZYTOPRAEPARATEN
21
0.1.8
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
21
FL.1.8.1
EXTRAZELLULAER
21
O.1.8.2
INTRAZELLULAER
22
0.1.83
MODULATION
23
IL1.8.4
MESSUNG
DER
APOPTOSE
(SUBGL-TECHNIK)
26
FL.1.8.5
ANALYSE
AM
FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTER
(FACSCAN)
26
0.1.9
KONFOKALMIKROSKOPISCHE
DARSTELLUNG
VON
INTRAZELLULAEREM
CD38
27
0.1.10
REINIGUNG
VON
CD38
-
ANTIKOERPERN
AUS
HYBRIDOMZELLUEBERSTAENDEN
28
II.2
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
30
0.2.1
CHEMIKALIEN,
ZUSAETZE
30
0.2.2
PUFFER
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
31
11.23
PUFFER
FUER
WESTERN
BLOT
ANALYSEN
32
II.2.4
LYSEPUFFER
33
0.2.5
ZELLLYSE
34
0.2.6
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
(MODIFIZIERT)
34
0.2.7
IMMUNPRAEZIPITATION
35
0.2.8
POLYACRYLAMIDGEL
ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
36
INHALTSVERZEICHNIS
IV
II.2.9
WESTERN
BLOT
37
II.2.10
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
G
38
IL3
ENZYMASSAYS
40
113.1
CHEMIKALIEN
UND
ZUSAETZE
40
IL3.2
PUFFER
UND
MEDIEN
41
1133
MESSUNG
DER
NADASE
AKTIVITAET
44
II33.1
SPECTROPHOTOMETRISCHER
TEST
44
H3.3.2
FLUOROMETRISCHER
TEST
44
IL3.4
ANALYSE
DER
NAD
+
ABBAUPRODUKTE
45
IL3.4.1
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
45
II.3.4.2
HIGH
PERFORMANCE
LIQUID
CHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
46
H.3.5
MESSUNG
DER
ADP-RIBOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
46
113.5.1
DARSTELLUNG
DER
GESAMT-ADP-RIBOSYLTRANSFERASEAKTIVITAET
MIT
[
32
P]NAD
46
II3.5.2
PRAEPARATION
ADP-RIBOSYLIERTER
MEMBRANPROTEINE 47
113.53
ZYMOGRAPHIE
48
II.3.6
BESTIMMUNG
DER
BUTYL-ESTERASE
AKTIVITAET
49
IL4
AUSWERTUNG
UND
DARSTELLUNG
DER
DATEN
49
II.5
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
50
II.5.1
CHEMIKALIEN,
PUFFER
50
II.5.2
PUFFER
51
11.53
OLIGONUKLEOTIDE
51
II.5.4
RNA-PRAEPARATION
UND
REVERSE
TRANSKRIPTION
52
II.5.5
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
52
II.5.6
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
54
II.
6
GERAETE
UND
MATERIALIEN
55
III.
ERGEBNISSE
56
III.L
VORKOMMEN
NAD
+
-
ABBAUENDER
ENZYME
AUF
MONOZYTEN
56
III.L.L
HYDROLASEAKTIVITAET
56
III.1.2
ANALYSE
DER
NAD
+
-ABBAUPRODUKTE
57
III.13
ADP-RIBOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
59
III.13.1
ADP-RIBOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
INTAKTER
ZELLEN
59
III.L.
3.2
ADP-RIBOSYLIERUNG
ZYTOSOLISCHER
UND
MEMBRANSTAENDIGER
PROTEINE
60
III.133
ZYMOGRAPHISCHE
DARSTELLUNG
DER
ADP-RIBOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
61
IH.13.4
IDENTIFIZIERUNG
DER
ADP-RIBOSYLTRANSFERASE
AKTIVITAET
63
INHALTSVERZEICHNIS
V
III.2
VORKOMMEN
UND
MODULATION
VON
CD38
65
III.2.1
CD38
-
EXPRESSION
AUF
HUMANEN
MONOZYTEN
65
III.2.2
CD38
AUF
HUMANEN
MONOZYTEN
MODULATION
DER
EXPRESSION
66
III.2.2.1
MODULATION
VON
CD38
DURCH
NAD
+
UND
DESSEN
ABBAUPRODUKTE
66
IH.2.2.2
MODULATION
DURCH
LIGANDEN
(ANTIKOERPER)
67
IH.2.3
CD38
-
EIN
INTRAZELLULAERES
PROTEIN
IN
HUMANEN
MONOZYTEN
71
HI.23.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
VON
INTRAZELLULAEREM
CD38
71
IIL2.3.2
DARSTELLUNG
VON
INTRAZELLULAEREM
CD38
DURCH
KONFOKALE
LASETSCANMIKROSKOPIE
73
III.2.4
EIN
CD38
MOLEKUEL
-
VERSCHIEDENE
ISOFORMEN
74
III.3
CD38
ALS
DIFFERENZIERUNGSMARKER
75
HI3.1
DIFFERENZIERUNG
VON
MONOZYTEN
ZU
MAKROPHAGEN
75
HI.3.1.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
IN
VITRO
GEREIFTEN
MAKROPHAGEN
75
III.
3.1.2
CD38
EXPRESSION
UND
NADASE
AKTIVITAET
WAEHREND
DER
DIFFERENZIERUNG
HUMANER
MONOZYTEN
77
III3.13
INTRAZELLULAERES
CD38
WAEHREND
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
MONOZYTEN
ZU
MAKROPHAGEN
78
IH.3.1.4
REGULATION
DER
CD38
EXPRESSION
AUF
MRNA-EBENE
WAEHREND
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
MONOZYTEN
ZU
MAKROPHAGEN
80
III3.2
DIFFERENZIERUNG
MYELOIDER
ZELLLINIEN
CD38
EXPRESSION,
MORPHOLOGIE
UND
ZELLWACHSTUM
81
1113.2.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
VON
CD38
AUF
FER
ZELLLINIE
KG-LA
81
III3.2.2
DER
EINFLUSS
VON
NOVOBIOCIN
AUF
DIE
DIFFERENZIERUNG
HUMANER
MYELOISCHER
ZELLEN
83
III3.23
REGULATION
DER
CD3
8
EXPRESSION
AUF
STIMULIERTEN
KG
1
A
-
ZELLEN
84
1113.2.4
KORRELATION
VON
CD38
EXPRESSION
UND
EHZYMAKTIVITAET
DER
KG-LA
ZELLEN
NACH
INKUBATION
MIT
NOVOBIOCIN
85
III3.2.5
EFFEKT
DES
ADP-RIBOSYLIERUNGSHEMMSTOFFES
NOVOBIOCIN
AUF
DIE
ZELLMORPHOLOGIE
87
HI.3.2.6
EFFEKT
DES
ADP-RIBOSYLIERUNGSHEMMSTOFFES
NOVOBIOCIN
AUF
DNA
SYNTHESE
UND
ZELLZAHL
DER
MYELOIDEN
ZELLLINIEN
88
IV.
DISKUSSION
90
IV.L
MONOZYTEN
UND
NAD
+
90
IV.2
MONOZYTEN
UND
CD38
103
IV3
MYELOIDE
ZELLLINIEN
UND
CD3
8
114
V.
ZUSAMMENFASSUNG
122
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
127
VII.
VEROEFFENTLICHUNGEN
142 |
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