Änderung der Genexpression in der Plazenta bei Präeklampsie und HELLP-Syndrom:
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Präeklampsie und HELLP-Syndrom
Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis häufig verwendeter Abkürzungen 7
Abstract 8
A. Einleitung 9
B. Material und Methoden 19
I.Material 19
1.1 Patientenauswahl 19
1.2 Asservierung des Materials 20
1.3 Labordaten/ Klinische Werte der Patienten für Atlas Arrays 20
1.4 Labordaten/ Klinische Werte der Patienten für Northern Blots 21
2. Methoden 22
2.1 Patientenerfassung in Datenbank 22
2.2 RNA-Extraktion 25
2.3 Array-Methodik 26
2.4 Auswertung der Atlas Arrays 31
2.5 Northern Blots 31
2.5.1 Anfertigung der Primer für die Northern Blot Sonden 31
2.5.2 Herstellung der Northern Blots 33
2.5.3 Hybridisierung der Northern Blots 35
2.6 Auswertung der Northern Blots 37
C. Ergebnisse 39
1. RNA Extraktion 39
2. Auswertung der Atlas Arrays 40
2.1 Auswertung der Präeklampsie Arrays 41
2.2 Auswertung der HELLP-Syndrom Arrays 46
2.3 Zusammenfassung der Ergebnisse 50
3. Auswertung der Northern Blots 51
3.1 Aufbau der Northern Blots 51
3.2 Hybridisierung der Estradiol-17ß-Dehydrogenase 52
5
3.3 Hybridisierung der Mevalonatkinase 54
3.4 Hybridisierung des Bone Proteoglycan Precursor 55
3.5 Hybridisierung des Retinoic Acid Receptor Alpha 56
3.6 Hybridisierung des Tenascin 57
D. Diskussion 58
1. Kandidatengene der Präeklampsie 58
1.1 Estradiol-17ß-Dehydrogenase 58
1.2 Mevalonatkinase 59
1.3 Bone/Proteoglycan Precursor 62
1.4 Retinoic Acid Receptor Alpha 62
1.5 Tenascin 64
2. Kandidatengene des HELLP-Syndroms 66
2.1 Apolipoprotein E 66
2.2 High Density Lipoprotein Binding Protein 67
2.3 Extrazelluläre Superoxid-Dismutase 67
2.4 Sterol Regulatory Element-Binding Transcription Factor-2 69
2.5 Phospholipid Transfer Protein 70
2.6 Cytochrome P450 VIIA1 70
3. Microarraytechnologie 72
3.1 Probleme bei der Gewinnung des zu hybridisierenden Materials 73
3.2 Schwachstellen in der Methodik der Microarrays 75
3.3 Schwierigkeiten bei der Auswertung der Microarrays 75
3.4 Fragliche Übertragbarkeit von Microarrayergebnissen auf 77
Proteinebene
E. Zusammenfassung 78
F. Abbildungsverzeichnis 80
G. Tabellenverzeichnis 82
H. Literaturverzeichnis 83
I. Anhang 90
1. Laborwerte und klinische Daten der Patientinnen 90
2. Abbildungen der verwendeten Atlas Arrays und Northern Blots 91
3. Verzeichnis der verwendeten Materialien 103
Schlusswort 104
6
F. Abbildungsverzeichnis
Abb. 1 Pathogenetische Zusammenhänge der Präeklampsie
Abb. 2 Invasion von Trophoblasten in mütterliche Blutgefäße
Abb. 3 Hybridisierung von Atlas Arrays
Abb. 4 Screenshot der Microsoft Access Datenbank
Abb. 5 Struktur der Datenbank
Abb. 6 Ethidiumbromid-Gel zur Kontrolle der Qualität der RNA
Abb. 7 Hybridisierung der RNA Probe von Plazenta 2 (Präeklampsie)
Abb. 8 Hybridisierung der RNA Probe von Plazenta 6 (Frühgeburt)
Abb. 9 Graphische Darstellung der Phosphorimagerwerte der Kandidatengene
bei präeklamptischen Plazenten
Abb. 10 Graphische Darstellung der Phosphorimagerwerte der Kandidatengene
bei den Kontrollplazenten für Präeklampsie
Abb. 11 Graphische Darstellung der Mittelwerte der Phosphorimagerwerte für
Kandidatengene der Präeklampsie
Abb. 12 Hybridisierung der RNA Probe von Plazenta 10 (HELLP- Syndrom)
Abb. 13 Hybridisierung der RNA Probe von Plazenta 12 (Frühgeburt)
Abb. 14 Graphische Darstellung der Phosphorimagerwerte der Kandidatengene
bei HELLP-Syndrom Plazenten
Abb. 15 Graphische Darstellung der Phosphorimagerwerte der Kandidatengene
bei den Kontrollplazenten für das HELLP-Syndrom
Abb. 16 Graphische Darstellung der Mittelwerte der Phosphorimagerwerte für
Kandidatengene des HELLP-Syndroms
Abb. 17 Hybridisierung der Retinoic Acid Receptor Alpha Sonde auf Blot 2
Abb. 18 Hybridisierung der 18S Sonde auf Blot 2
Abb. 19 EDH/ 18S Quotienten des Northern Blot 1
Abb. 20 Mevalonatkinase/ 18S Quotienten des Northern Blot 1
Abb. 21 Bone Proteoglycan Precursor/ 18S Quotienten des Northern Blot 2
Abb. 22 Retinoic Acid Receptor Alpha/ 18S Quotienten des Northern Blot 2
Abb. 23 Tenascin/ 18S Quotienten des Northern Blot 2
Abb. 24 Schema der Cholesterin Biosynthese
Abb. 25 Struktur des LDL
Abb. 26 Cholesterol und daraus abgeleitete Stoffgruppen
80
Abb. 27 Interaktionen von RXRA mit anderen Hormonen
Abb. 28 Regulation der Expression von SREBP-2
Abb. 23 Einfluss von Cholesterol und Gallensäuren auf die Expression von
CYP7A1
81
G. Tabellenverzeichnis
Tab. 1 «Matched Pairs» Bildung der Präeklampsie- und Kontrollpatientinnen
Tab. 2 «Matched Pairs» Bildung der HELLP- und Kontrollpatientinnen
Tab. 3 Primersequenzen der Sonden und Temperatur-Zeitprofile förderen
Herstellung mittels PCR
Tab. 4 Vergleichswerte der ausgewerteten Präeklampsie/ Kontrollpaare
Tab. 5 Vergleichswerte der ausgewerteten HELLP-Syndrom/ Kontrollpaare
Tab. 6 Kandidatengene der Präeklampsie
Tab. 7 Kandidatengene des HELLP-Syndroms
Tab. 8 Aufbau der Northern Blots 1 und 2
82
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