Bindungsfähigkeit und Wärmeausbeute von magnetischen Nanopartikeln an Endothelzellen in Kultur:
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| adam_text | Titel: Bindungsfähigkeit und Wärmeausbeute von magnetischen Nanopartikeln an Endothelzellen in Kultur
Autor: Kießling, Andreas
Jahr: 2004
Inhaltsverzeichnis
Verzeichnis der verwendeten Symbole und Abkürzungen 7
Verzeichnis der verwendeten Indices 8
1 Einleitung 9
2 Arbeitsutensilien 22
2.1 Materialien und Chemikalien 22
2.2 Geräte 23
3 Methoden 25
3.1 Zellkulturexperimente 25
3.1.1 Charakterisierung der endothelialen Zelllinie S VEC4 -10 25
3.1.2 Kultivierung der SVEC4-10 Zelllinie 25
3.1.3 Subkultivierung der SVEC4-10 Zellen 26
3.1.4 Zellzahlbestimmung einer Zellsuspension 26
3.1.5 Einfrieren der SVEC4-10 Zellen 27
3.1.6 Kontrolle der Zellkultur auf Mycoplasmenkontamination mittels
DAPI-Test 28
3.2 Voruntersuchungen am verwendeten Modellferrofluid 28
3.2.1 Charakterisierung des Modellferrofluids 28
3.2.2 Teilchengrößenbestimmung mittels Photonenkorrelations¬
spektroskopie 29
3.2.3 Teilchengrößentrennung der im Modellferrofluid enthaltenen
magnetischen Nanopartikel 30
3.2.4 Stabilitätsuntersuchungen des verwendeten Modellferrofluids im
Kulturmedium der SVEC4-10 Zellen 31
3.2.5 Bestimmung der spezifischen Absorptionsrate (SAR) des
verwendeten Modellferrofluids 32
3.2.5.1 Bestimmung des Massenanteils an Eisenoxid im Modellferrofluid 32
3.2.5.2 Aufnahme der Temperaturkurve im magnetischen Wechselfeld und
Berechnung der SAR des verwendeten Modellferrofluids 33
3.3 Versuche zur chemischen Bindung magnetischer Nanopartikel an
Endothelzellen 35
3.3.1 Chemische Bindung der magnetischen Nanopartikel an
Endothelzellen 35
3.3.2 Bestimmung der Zahl mit magnetischen Nanopartikeln gebundenen
Endothelzellen 37
3.3.3 Nachweis der Bindung der magnetischen Nanopartikel mittels
Magnetrelaxometrie (MRX) 38
3.3.4 Vorbereitung der chemisch mit magnetischen Nanopartikeln
gebundenen Endothelzellen für die Elektronenmikroskopie 40
-4-
3.4 Versuche zur antikörpervermittelten Bindung magnetischer
Nanopartikel an Endothelzellen 41
3.4.1 Immunfluoreszenznachweis von VCAM auf SVEC4-10 Zellen 41
3.4.1.1 Vorbereitungen für die immunhistochemische Färbung 41
3.4.1.2 Fixierung und Färbung : 42
3.4.2 Antikörpervermittelte Bindung magnetischer Nanopartikel an
Endothelzellen 43
3.5 Versuche zur Erwärmung chemisch mit magnetischen
Nanopartikeln gebundenen Endothelzellen im Magnetwechselfeld.... 45
3.5.1 Entfernen nicht gebundener magnetischer Nanopartikel nach der
chemischen Kopplungsreaktion 45
3.5.2 Evaluierung der Temperaturerhöhung von chemisch mit
magnetischen Nanopartikeln gebundenen Endothelzellen im
magnetischen Wechselfeld 45
3.5.3 Bestimmung der Masse des chemisch an die Endothelzellen
gebundenen Eisenoxides 46
4 Ergebnisse 48
4.1 Test auf Kontamination durch Mycoplasmen (DAPI - Test) 48
4.2 Ergebnisse der Voruntersuchungen am verwendeten
Modellferrofluid 50
4.2.1 Ergebnis der Teilchengrößentrennung der im Modellferrofluid
enthaltenen magnetischen Nanopartikel 50
4.2.2 Ergebnisse der Stabilitätsuntersuchung des verwendeten
Modellferrofluids im Kulturmedium der SVEC4-10 Zellen 51
4.2.3 Ergebnis der SAR-Bestimmung des verwendeten Modellferrofluids...52
4.3 Ergebnisse der chemischen Bindung magnetischer Nanopartikel
an Endothelzellen 54
4.3.1 Nachweis der chemischen Bindung der magnetischen Nanopartikel
an Endothelzellen mittels Magnetrelaxometrie 54
4.3.2 Nachweis der chemischen Bindung der magnetischen Nanopartikel
an Endothelzellen mittels Elektronenmikroskopie 56
4.4 Ergebnisse der antikörpervermittelten Bindung magnetischer
Nanopartikel an Endothelzellen 59
4.4.1 Nachweis von VCAM auf den Endothelzellen 59
4.4.2 Nachweis der antikörpervermittelten Bindung magnetischer
Nanopartikel an Endothelzellen mittels Magnetrelaxometn e 60
4.5 Ergebnisse der Erwärmung von chemisch mit magnetischen
Nanopartikeln gebundenen Endothelzellen im Magnetwechselfeld.... 63
4.5.1 Entfernen nicht gebundener magnetischer Nanopartikel nach der
chemischen Kopplungsreaktion 63
4.5.2 Temperaturerhöhung nach Exposition chemisch mit magnetischen
Nanopartikeln gebundenen Endothelzellen im Magnetwechselfeld ....64
4.5.3 Masse des chemisch an Endothelzellen gekoppelten Eisenoxides 66
-5-
5 Diskussion 67
5.1 Überprüfung der Sterilität der Zellkultur 67
5.2 Voruntersuchungen am verwendeten Modellferrofluid 68
5.3 Chemische Bindung der magnetischen Nanopartikel an
Endothelzellen 69
5.4 Antikörpervermittelte Bindung der magnetischen Nanopartikel an
Endothelzellen 75
5.5 Wärmebehandlung von mit magnetischen Nanopartikeln
gekoppelten Endothelzellen 80
6 Zusammenfassung 85
7 Literaturverzeichnis 87
Danksagung 94
Lebenslauf 95
Ehrenwörtliche Erklärung 96
-6-
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