Myokardinfarkt-Größenreduzierung durch Zelltransplantation im Ischämiemodell der Ratte:
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2004
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis:
1. Einleitung
1.1 Myokardinfarkt und Herzinsuffizienz S.5
1.1.1 Epidemiologie S.5
1.1.2 Ätiologie und Pathogenese S.5
1.1.3 Symptome S.6
1.1.4 Diagnose S.6
1.1.5 Behandlung und Prognose des akuten Herzinfarktes S.7
1.1.6 Komplikationen S.9
1.1.7 Herzinsuffizienz als wichtigste Spätkomplikation S.9
1.1.8 Medikamentöse Therapie der Herzinsuffizienz S.10
1.1.9 Progredientes Herzversagen durch Kardiomyopathie S.ll
1.2 Legitimierung des Versuchsvorhabens S.13
1.3 Erste kausale Therapieansätze der Herzinsuffizienz mit S.13
Wachs tumsfaktoren und Zelltransplantationen
1.3.1 Therapie der Herzinsuffizienz mit Wachstumsfaktoren S.13
1.3.2 VEGF S.14
1.3.3 Geschichte der Zelltransplantation (Hintergrund und Vorarbeiten) S.15
1.4 Ziele der eigenen Versuchsvorhaben S.17
2. Methodik
2.1 Auswahl und Haltung der Tiere S.20
2.2 Gruppeneinteilung S.22
2.3 Messparameter S.25
2.4 Versuchsvorbereitung S.26
2.4.1 Perioperatives Vorgehen S.26
2.4.2 Anästhesie S.27
2.4.3 Intubation und Beatmung S.28
2.4.4 Überwachung der Tiere während den Operationen S.28
2.5 Operatives Vorgehen
2.5.1 Infarktoperation S.29
2.5.1.1 Thorakotomie und Okklusion des absteigenden Astes S.29
der linken Koronararterie (RIVA)
2.5.1.2 Verschluss des Thorax S.31
2.6 Aufwachphase S.32
2.7 Auslösung einer Kardiomyopathie S.33
2.8 Transplantationsoperation S.34
3
2.8.1 Thotakotomie und Transplantation S.34
2.8.2 Verschluss des Thorax S.35
2.9 Aufwachphase S.35
2.10 Maßnahmen zur Schmerzlinderung und S.35
Immunsuppression postoperativ
2.11 Kardiale Funktionsmessungen S.36
2.11.1 Echokaidiographie S.36
2.11.2 EKG-Messungen während der Operationen S.38
2.11.3 Langcndorff-Messung S.39
2.11.3.1 Perfusionslösungen S.42
2.11.3.2 Isoproterenol-Puffergemisch S.42
2.11.4 Versuchsende und Bearbeitung der Herzen S.42
2.12 Zellisolation und Zellpräparation S.44
2.12.1 Isolation von fetalen Herzmuskelzellen S.44
2.12.2 Zellaufreinigung und Kultivierung S.45
2.12.3 Zellpräparation zur Transplantation S.45
2.13 Metaphasenchromosomen-Präparation aus peripherem Rattenblut S.46
2.14 Identifikation der transplantierten Zellen S.48
2.14.1 Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) S.48
2.14.1.1 Isolierung von Ratten-DNA S.48
2.14.1.2 Herstellung der Sonde S.49
2.14.1.3 Generierung der Sonden durch PCR S.51
2.14.1.4 FISH mit Metaphase- Chromosomen (1. Tag) S.53
2.14.1.5 FISH- Detektion (2. Tag) S.54
2.14.2 In-situ-Hybridisierung der Gewebsschnitte S.55
2.14.2.1 Schnittvorbereitung (1. Tag) S.55
2.14.2.2 FISH- Detektion mit Gewebeschnitten (2. Tag) S.56
2.14.2.3 FISH- Detektion mit Gewebeschnitten (3. Tag) S.56
2.14.3 Identifikation der mit BrdU markierten Zellen S.57
2.15 Auswertung am Fluoreszenzmikroskop und Lichtmikroskop S.58
2.16 Identifikation von Herzmuskelzellen in Kultur vor Transplantation S.58
2.17 Versuchsdurchfuhrung S.59
2.17.1 Gruppeneinteilung S.59
2.18 Statistische Analyse S.60
3. Ergebnisse
3.1 Mortalität S.61
4 __
3.2 Histologie S.63
3.2.1 Anti-Alpha-sarcomeidc-actin-Färbungen S.63
3.2.2 Videoaufnahmen der Zellen S.65
3.2.3 Spezifitätsnachweis der FISH-Sonde S.65
3.2.4 BrdU-Färbungen und FISH S.67
3.3 2-D Echokatdiographie S.76
3.3.1 Echokardiographie-Daten der 2 Monats- und 6 Monatsgruppen S.79
3.4 3-D Echokardiographie S.91
3.5 Langendorff-Messungen S.94
3.6 Her2ftequenz- und Gewicht-Auswertungen S.101
4. Diskussion S.105
4.1 Entwicklung der Zelltransplantation S.106
4.2 Zelltransplantationsergebnisse im Vergleich mit anderen ArbeitsgruppenS.108
4.2.1 Erfolgreiche Transplantationen von embryonalen Herzmuskelzellen S.108
4.2.2 Neuartige histologische Methoden (FISH) im Vergleich mit S.l 10
etablierten Verfahren (BrdU)
4.3 Erklärungsmodelle für funktioneile Verbesserung nach S.113
Zelltransplantation
4.4 Verminderte Mortalität durch elektromechanische Kopplung S.116
des Empfängers mit dem Transplantat
4.5 Quantifizierung der nach 6 Monaten vorhandenen S.117
transplantierten Zellen
4.6 Stammzelltransplantation als Zukunftsmodell S.l 18
4.7 Zukunftschancen und Anwendung beim Menschen S.l 19
5.Zusammenfassung S.122
6.Literatur S.125
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