Expression und funktionelle Analyse Rho-spezifischer Guaninnukleotid-Austauschfaktoren:
Gespeichert in:
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| Format: | Elektronisch Software E-Book |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Allgemeine Einführung 1
1.2 Signaltransduktion über transmembranäre Rezeptoren 1
1.3 Heterotrimere G Proteine 2
1.4 Monomere G Proteine 3
1.5 Ziele der Arbeit 16
2 Material 17
2.1 Chemikalien 17
2.2 Radioaktiv markierte Chemikalien 19
2.3 Enzyme und Kits 19
2.4 Verbrauchsmaterial 19
2.5 Säulen und Gele für die Chromatographie 20
2.6 Pro und eukaryontische Zellstämme 20
2.7 Plasmide und cDNAs 20
2.8 Primer zur DNA Sequenzierung 21
2.9 Molekulargewichtsmarker für die SDS Polyacrylamid Gelelektrophorese
(SDS PAGE) 21
2.10 Antikörper 22
2.11 Geräte 22
2.12 Software 23
3 Methoden 24
3.1 Mikrobiologische Methoden 24
3.2 Molekularbiologische Methoden 27
3.3 Proteinexpression in Bakterien 36
3.4 Eukaryontische Zellkultur 39
3.5 Proteinbiochemie 45
3.6 Chromatographische Methoden 51
3.7 Bestimmung der GTPyS Bindungsstellen 52
4 Ergebnisse 56
4.1 Expression von GST Fusionsproteinen der Rho GTPasen Racl, Rac2, RhoA
undCdc42HsundderMutanteRacl(T17N)in£I. coli 56
4.2 Expression von GST DH und GST DH/PH in E. coli 56
Inhaltsverzeichnis
4.3 Klonierung der cDNAs der Guaninnukleotid Austauschfaktoren in Baculo
Transfervektoren 59
4.4 Expression der Guaninnukleotid Austauschfaktoren 64
4.5 Messung der Guaninnukleotid Austauschaktivität 68
5 Diskussion 83
6 Zusammenfassung 97
7 Literaturverzeichnis 99
8 Appendix 109
9 Danksagung 112
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