Lokalisation und mRNA-Regulation der nierenspezifischen Chloridkanäle CLC-K1 und CLC-K2 in der Ratte:
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2004
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Funktion der Niere 1
1.1.1 Resorption im Tubulussystem 1
1.1.2 Bedeutung der Henleschleife für Resorptionsvorgänge 2
1.1.3 Chloridtransport in der dünnen aufsteigenden Henleschleife 3
1.1.4 Natriumchloridabsorption in der dicken aufsteigenden Henleschleife
4
1.2 CLC-Chloridkanalfamilie 7
1.2.1 CLC-1 bis CLC-7 8
1.2.2 CLC-Kl und CLC-K2 11
1.3 CLC-Kl als Chloridkanal der dünnen aufsteigenden Henleschleife.. 13
1.4 CLC-K2 als Chloridkanal der dicken aufsteigenden Henleschleife... 14
1.5 Zusammenfassung 16
1.6 Fragestellung 16
2 Material und Methoden 17
2.1 Tiere 17
2.2 Organentnahme 17
2.3 Schnitte 18
2.4 In-situ-Hybridisierung 18
2.4.1 Fixierung 18
2.4.2 Prähy bridisierung 19
2.4.3 Hybridisierung 20
2.4.4 Waschvorgang 1 20
2.4.5 RNasebehandlung 21
2.4.6 Waschvorgang 2 21
2.5 Autoradiographie mit Röntgenfilmen 21
2.6 Autoradiographie mit Fotoemulsion 22
2.7 Färben der Schnitte 23
Inhaltsverzeichnis II
2.8 Mikroskopie 23
2.9 RNA-Extraktion 24
2.10 Reverse Transkriptase Reaktion 25
2.11 Polymerase-Kettenreaktion 26
2.12 Ligation der PCR-Produkte an den Vektor und Transformation 28
2.13 Isolation und Reinigung von Plasmiden aus E.coli 29
2.14 Linearisierung von Plasmiden für Sense- und Antisense-Proben 30
2.15 Herstellung der radioaktiv-markierten Sense- und Antisense- RNA
durch in-vitro-Transkription 31
2.16 Auswertung 33
3 Ergebnisse 37
3.1 Lokalisation von CLC-Kl und CLC-K2 37
3.1.1 Lokalisation von CLC-Kl 37
3.1.2 Lokalisation von CLC-K2 39
3.2 Transkriptionelle Regulation von CLC-Kl und -K2 44
3.2.1 Regulation von CLC-Kl 44
3.2.2 Regulation von CLC-K2 49
4 Diskussion 53
4.1 Lokalisation von CLC-Kl und CLC-K2 53
4.2 Transkriptionelle Regulation von CLC-Kl und -K2 58
4.2.1 Regulation von CLC-Kl 58
4.2.2 Regulation von CLC-K2 60
5 Zusammenfassung 63
6 Literaturverzeichnis 65
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