Bedeutung von Mutationen, DNA-Protein-Interaktionen und DNA-Methylierung bei der Karzinogenese:
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| adam_text | Titel: Bedeutung von Mutationen, DNA-Protein-Interaktionen und DNA-Methylierung bei der Karzinogenese
Autor: Leistenschneider, Peter
Jahr: 2004
Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen III
1. Einleitung 1
1.1 Gegenstand der Arbeit 1
1.2 Genetische Regulation 2
1.2.1 Larynxkarzinome (Kehlkopfkrebs) 3
1.2.2 Connexine und Tumorerkrankungen 5
1.2.2.1 Connexin 31.1 6
1.3. Epigenetische Regulation 7
1.3.1 DNA Methylierung 8
1.3.2 Repetitive Sequenzen 10
1.3.2.1 Centromere 12
1.3.2.2 Das 48 bp-Repeat 14
1.3.3 Kleeblattpeptide und Magenkarzinome 16
1.3.3.1 Struktur und Funktion der Kleeblattpeptide 16
1.3.3.2 Expression von Kleeblattpeptiden in pathophysiologischen Zuständen
18
1.3.3.3 Magenkrebs 19
1.3.3.4 Die Rolle von TFF1 bei der Krebsentstehung im Magen 20
1.4 Thema und Ziele der Arbeit 22
2. Material und Methoden 23
2.1 Häufig verwendete Lösungen und Puffer 23
2.2 Mutationsanalyse des humanen Connexin 31.1-Gens 24
2.2.1 Patientenkollektiv 24
2.2.2 DNA Isolierung aus Blut/Gewebe 24
2.2.3 Amplifikation des Cx31. f-Gens 24
2.2.4 Sequenzierung des Cx31.1-Gens 25
2.3 Charakterisierung eines DNA-Bindeproteins 26
2.3.1 Kernproteinisolierung 26
2.3.2 Dialyse 27
2.3.3 Electro-Mobility-Shift-Assay (EMSA) 28
2.3.4 Isolierung eines DNA-Bindeproteins mittels Magnetpartikel 30
2.3.5 Isolierung eines DNA-Bindeproteins mittels NHS-aktivierter Sepharose .. 30
2.3.6 Isolierung eines DNA-Bindeproteins mittels Streptavidin-Sepharose 31
2.3.6.1 Biotin Labeling der 48 bp-DNA 31
2.3.6.2 Chromatographie 32
2.3.7 Konzentrieren der Proteine durch Microcon-Säulen 33
2.3.8 SDS Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) 33
2.3.9 Silberfärbung 34
2.3.10 Coomassie-Färbung 35
2.3.11 Matrix-assisted laser desorption/ionisation-time of flight mass
spectrometry (MALDI-TOF MS) 35
2.4 Epigenetische Regulation der TFF7-Expression in Magenkarzinomen 36
2.4.1 Zellkulturtechniken 36
2.4.2 RNA-Isolierung aus Zellkulturmaterial 37
2.4.3 Reverse Transkription (RT) 37
2.4.4 Multiplex-PCR 38
2.4.5 Quantitative Realtime-PCR (qPCR) 39
2.4.6 Statistische Auswertung 42
3. Ergebnisse 43
3.1 Genetische Regulation 43
I
Inhaltsverzeichnis
3.1.1 Untersuchung von Connexin 31.1 -Mutationen in Larynxkarzinomen 43
3.2 Epigenetische Regulation 44
3.2.1 Charakterisierung eines DNA-Bindeproteins 44
3.2.2 Epigenetische Regulation der TFFI-Expression in Magenkarzinomen 49
4. Diskussion 53
4.1 Krebserkrankungen 53
4.2 Genetische Regulation 54
4.2.1 Untersuchung von Connexin 31.1 Mutationen in Larynxkarzinomen 54
4.3 Epigenetische Regulation 58
4.3.1 Charakterisierung eines DNA-Bindeproteins 58
4.3.2 Epigenetische Regulation der 7FF1-Expression in Magenkarzinomen 60
4.4 Zusammenfassung 64
5. Literatur 66
Lebenslauf 80
II
|
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