Entwicklung analytischer Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung von modifizierten DNA-Basen in humanen Körperflüssigkeiten:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
Theoretischer Teil
1 Einleitung 1
2 Expositionskontrolle 2
2.1 Ambient Monitoring 2
2.2 Biological Monitoring 3
2.2.1 Dosismonitoring 3
2.2.2 Biochemisches Effektmonitoring 4
2.2.3 Biologisches Effektmonitoring 5
2.3 Biochemisches Effektmonitoring unter Verwendung von DNA-Addukten im
Urin 7
3 Etheno-DNA-Addukte 9
3.1 Allgemeine Aspekte der Ethenobasen 9
3.2 Quellen der Etheno-DNA-Addukten 11
3.2.1 Bildung von Ethenobasen aus exogenen Quellen 11
3.2.2 Bildung von Ethenobasen aus endogener Quelle 14
3.3 Reparaturmechanismen der DNA 16
3.4 Promutagene Eigenschaften von Ethenobasen 19
4 Ziel der Arbeit 22
5 Stand der Technik der Ethenoadduktbestimmung 23
5.1 Stand der Technik für die Bestimmung von Etheno-DNA-Basen 23
5.1.1 Bestimmung von Etheno-DNA-Basen in Körpergewebe und Blut 23
5.1.2 Bestimmung von Etheno-DNA-Basen in Urin 29
Eigene Arbeiten
6 Synthese der zwei Ethenoguanin-Isomeren und der isotopenmarkierten Standards 33
6.1.1 Synthese 34
6.1.2 Charakterisierung 36
6.1.2.1 HPLC/MS/MS Charakterisierung 36
Abkürzungsverzeichnis
6.1.2.2 H-NMRund 3C-NMR 40
7 Analytische Verfahren für die Bestimmung von Ethenoguanin-Isomeren in
Humanurin 44
7.1 Bestimmung von Ethenoguanin-Isomeren in Humanurin mittels HPLC/MS/MS
44
7.1.1 Grundlage des Verfahrens 44
7.1.2 Geräte, Chemikalien und Lösungen 44
7.1.3 Probenaufarbeitung 47
7.1.4 Zweidimensionale HPLC mit Tandem MS Detektion 50
7.1.5 Tandem MS Detektion 52
7.1.6 Analytische Bestimmung 55
7.1.7 Optimierung der Probenaufarbeitung und des HPLC/MS/MS Systems.... 57
7.1.7.1 Optimierung der Probenaufarbeitung 57
7.1.7.2 Optimierung der hochdruckflüssigkeitschromatographischen Trennung
der Analyten 61
7.1.8 Kalibrierung und Berechnung der Analysenergebnisse 63
7.1.9 Qualitätssicherung 64
7.1.10 Beurteilung des Verfahrens 64
7.1.10.1 Präzision in der Serie 65
7.1.10.2 Präzision von Tag zu Tag 65
7.1.10.3 Wiederfindung 65
7.1.10.4 Robustheitstest durch Wiederfindungsversuche in unterschiedlichen
Urinmatrices 66
7.1.10.5 Nachweisgrenze 67
7.1.10.6 Vergleich einer Kalibration in Wasser und Urin 68
7.1.11 Diskussion des Verfahrens 70
7.2 Qualitative Bestätigung des Nachweises von Ethenoguanin-Isomeren in
menschlichem Ham mittels GC/MS 74
7.2.1 Grundlagen des Verfahrens 74
7.2.2 Geräte, Chemikalien und Lösungen 74
7.2.3 Probenaufarbeitung 75
7.2.4 GC/MS Bedingungen zum Nachweis der Ethenoguanin-Isomeren 76
7.2.5 Analytische Bestimmung 76
7.2.6 Diskussion des Verfahrens 79
Inhaltsverzeichnis III
7.3 Monitoring der Ethenoguaninausscheidung in menschlichem Urin 80
7.3.1 Kollektivbeschreibung 80
7.3.2 Ergebnisse 80
7.4 Ausscheidung von Ethenoguanin-Isomeren eines Patienten nach Verabreichung
des Zytostatikums Cyclophosphamid 85
7.4.1 Hintergründe 85
7.4.2 Probandenbeschreibung 87
7.4.3 Methoden 87
7.4.4 Ergebnisse 87
7.4.5 Diskussion 89
8 Diskussion der Arbeit 91
9 Zusammenfassung 97
10 Literaturverzeichnis 99
Lebenslauf
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