Rolle und Regulation von Calcium-permeablen Kationenkanälen der TRP-Familie in neutrophilen Granulozyten:
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Aachen
Shaker
2003
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| Item Description: | Zugl.: Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2003 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
C
ALCIUM
ALS
INTRAZELLULAERER
B
OTENSTOFF
.
1
1.1.1
CALCIUM-FREISETZUNGAUS
INTRAZELLULAEREN
SPEICHERN
.
2
1.1.2
CALCIUM-INFLUX
.
3
1.2
D
IE
R
OLLE
VON
C
ALCIUM
BEI
DER
A
KTIVIERUNG
VON
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
.
4
1.2.1
DIE
FUNKTION
DER
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
BEI
DER
UNSPEZIFISCHEN
IMMUNABWEHR
.
5
1.2.2
DIE
ERHOEHUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CALCIUMKONZENTRATION
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
7
13
C
ALCIUM
-
PERMEABLE
K
ATIONENKANAELE
DER
TRP
F
AMILIE
.
8
1.31
TRPC
SUBFAMILIE
.
10
1.3.2
TRPV
SUBFAMILIE
.
10
1.3.3
TRPM
SUBFAMILIE
.
11
2
ZIELE
DER
ARBEIT
.
14
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
16
3.1
C
HEMIKALIEN
UND
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
.
16
3.2
O
LIGONUKLEOTIDE
.
16
3.3
V
EKTOREN
.
17
3.4
B
AKTERIENSTAEMME
.
18
3.5
M
EDIEN
UND
L
OESUNGEN
.
18
3.6
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
19
3.6.1
KULTIVIERUNG
PROKARYOTISCHER
ZELLEN
.
19
3.6.2
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
E.
COLI
.
19
3.6.3
ELEKTROPORATION
VON
E.
COLI
.
20
3.6.4
TRANSFORMATION
CHEMISCH
KOMPETENTER
E.
COLI
.
20
3.6.5
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
21
3
6.6
RESTRIKTION
VON
DNA
.
21
3.6.
7
AUFTRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IN
DER
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
21
3.6.8
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
22
3.6.9
DNA-LIGATION
.
22
3.6.10
DNA-SEQUENZIERUNG
.
22
3.6.11
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
23
3.6.12
PRAEPARATION
VON
RNA
UND
MRNA-ISOLIERUNG.
.
23
3.6.13
DNASE
VERDAU
.
24
3.6.14
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
24
3.6.15
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
25
3.6.16
KLONIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
.
25
3.7
Z
ELLBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
26
3.7.1
KULTIVIERUNG
EUKARYOTISCHER
ZELLLINIEN
.
26
3.7.2
DIFFERENZIERUNG
VON
HL-60
ZELLEN
.
26
3.7.3
TRANSFEKTION
.
27
3.7.4
ISOLIERUNG
NEUTROPHILER
GRANULOZYTEN
AUS
HUMANEM
BLUT
.
27
3.7.5
PANOPTISCHE
FAERBUNG
NACH
PAPPENHEIM
.
31
3.8
E
LEKTROPHYSIOLOGISCHE
M
ESSUNGEN
.
31
3.9
M
ESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
FREIEN
C
ALCIUMKONZENTRATION
.
33
4
ERGEBNISSE
.
35
4.1
RT-PCR
A
NALYSE
DES
E
XPRESSIONSMUSTERS
VON
TRP
K
ANAELEN
IN
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
UND
IN
HL-60
Z
ELLEN
.
35
4.1.1
PRIMER
AUSWAHL
UND
ETABLIEREN
DER
PCR-BEDINGUNGEN
.
35
4.1.2
EXPRESSIONSMUSTER
VON
TRP
KANAELEN
IN
HUMANEN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
36
4.1.3
EXPRESSIONSMUSTER
VON
TRP
KANAELEN
IN
HL-60
ZELLEN
.
38
4.2
E
LEKTROPHYSIOLOGISCHE
U
NTERSUCHUNG
VON
K
ATIONENSTROEMEN
IN
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
UND
IN
HL-60
Z
ELLEN
.
41
4.2.1
KATIONENSTROEME
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
UND
HL-60
ZELLEN
INDUZIERT
DURCH
ADPRUNDNAD
.
41
4.2.2
EINZELKANALEREIGNISSE
IN
LTRPC2-TRANSFIZIERTEN
HEK
293 ZELLEN
INDUZIERT
DURCH
ADPR
.
45
4.2.3
EINZELKANALEREIGNISSE
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
INDUZIERT
DURCH
ADPRUNDNAD
.
46
4.2.4
SPEICHERABHAENGIGE
CALCIUM-SELEKTIVE
STROEME
IN
HL-60
ZELLEN
.
49
4.2.5
LONOMYCIN-INDUZIERTE
STROEME
IN
HL-60
ZELLEN
.
50
4.2.6
MAGNESIUM-NUKLEOTID-REGULIERTE
STROEME
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
52
4.2.7
CHARAKTERISTISCHE
STIMULI
FUER
WEITERE
TRP
KANAELE,
DIE
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
UND
IN
HL-60
ZELLEN
KEINE
STROEME
INDUZIEREN
.
54
II
5
DISKUSSION
.
55
5.1
E
XPRESSION
VON
TRP
K
ANAELEN
IN
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
UND
IN
HL-60
Z
ELLEN
.
55
5.2
LTRPC2
UND
SEINE
F
UNKTION
ALS
C
ALCIUM
-
PERMEABLER
K
ATIONENKANAL
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
60
5.2.1
WASSERSTOFFPEROXID
UND
SEINE
RELEVANZ
ALS
PHYSIOLOGISCHER
STIMULUS
ENDOGENER
LTRPC2
KANAELE
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
64
5.2.2
MOEGLICHE
ROLLE
FUER
ADPR
ALS
SEKUNDAERER
BOTENSTOFF,
DER
LTRPC2
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
AKTIVIERT
.
67
5.2.3
POTENTIELLE
AKTIVIERUNGSWEGE
DES
LTRPC2
IN
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN
.
68
5.3
S
PEICHERABHAENGIGER
C
ALCIUM
-I
NFLUX
IN
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
.
71
5.4
S
TIMULI
FUER
VR1
UND
TRPC6
HABEN
KEINEN
E
FFEKT
AUF
S
TROEME
IN
NEUTROPHILEN
G
RANULOZYTEN
.
72
5.5
M
OEGLICHE
B
EDEUTUNG
DES
LTRPC7
FUER
NEUTROPHILE
G
RANULOZYTENALS
M
AGNESIUM
-N
UKLEOTID
-
REGULIERTER
K
ANAL
.
74
5.6
A
USBLICK
.
74
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
77
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
79 |
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