Fischgeruch im Hühnerei: quantitativer Nachweis und Charakterisierung molekularer Polymorphismen
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| Published: |
Kiel
Inst. für Tierzucht und Tierhaltung
2003
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| Series: | Schriftenreihe des Instituts für Tierzucht und Tierhaltung der Christian-Albrechts-Universität Kiel
144 |
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| adam_text | Titel: Fischgeruch im Hühnerei
Autor: Reese, Kristina
Jahr: 2003
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
VERZEICHNIS DER TABELLEN IV
VERZEICHNIS DER ABBILDUNGEN V
VERZEICHNIS DER ABKÜRZUNGEN VII
1 Problemstellung 1
2 Literaturübersicht 2
2.1 Stoffwechsel 2
2.2 Einflüsse auf den Stoffwechsel 7
2.2.1 Genetik 7
2.2.2 Fütterung 14
2.2.2.1 Glucosinolate 14
2.2.2.2 Tannine 15
2.2.3 Reaktionen auf eine reduzierte FMO3 Aktivität 16
2.2.4 Antibiotika 17
2.3 Trimethylaminbestimmung 18
3 Material und Methoden 19
3.1 Versuchstiere 19
3.1.1 Versuchstiere für die organoleptische Prüfung der
F2-Generation 19
3.1.2 Versuchstiere für die Bestimmung des
TMA-N-Gehaltes im Eidotter 19
3.1.3 Statistische Auswertung 20
3.2 Fütterung 20
3.3 Organoleptik 22
3.3.1 Statistische Auswertung 23
3.4 Trimethylaminbestimmung im Eidotter 23
3.4.1 Verwendete Geräte für die
Trimethylaminbestimmung 23
3.4.2 Reagenzien für die Trimethylaminbestimmung 24
3.4.3 Beschreibung der chemischen Analyse 24
3.4.4 Berechnung des TMA-N-Gehaltes im Eidotter
in ng/g Eidotter 26
3.4.5 Methodik des TMA-N-Nachweises 27
3.4.5.1 Regression 27
3.4.5.2 Bestimmung einer Regressionsgleichung
in Fütterungsperiode I, II und III 28
3.4.5.3 Methodisch bedingte Variation 28
3.4.5.4 Biologische Matrix 28
3.4.5.5 Herstellung einer Eichlösung II mit
Trimethylaminhydrochlorid 30
3.4.5.6 Verifizierung der Messungen mit dem
Gaschromatographen 30
3.4.5.7 Statistische Auswertung 30
3.5 Genotypisierung 31
3.5.1 Desoxyribonukleinsäure-Isolation (DNA-Isolation) 31
3.5.2 Gelelektrophorese 33
3.5.2.1 Agarose-Gelelektrophorese 33
3.5.2.2 Polyacrylamid-Gelelektrophorese 33
3.5.3 Mikrosatelliten 34
3.5.4 Sequenzierung des FMO3-Gens 36
3.5.4.1 Primerdesign 36
3.5.4.2 Polymerase Chain Reaction 37
3.5.4.3 Aufreinigung des PCR-Produktes 38
3.5.4.4 Cycle Sequencing 38
3.5.5 Restriktionsenzym TSP45I 40
3.5.6 Statistische Auswertung 42
4 Ergebnisse 43
4.1 Organoleptik 43
4.2 Quantitativer Nachweis von Trimethylamin im Eidotter 45
4.2.1 Methodik für die TMA-N-Bestimmung 45
4.2.1.1 Kalibrierung 45
4.2.1.2 Methodisch bedingte Variation 46
4.2.1.3 Biologische Matrix 47
4.2.1.4 Erstellung einer Eichlösung II mit
Trünethylaminhydrochlorid 48
4.2.1.5 Verifizierung der Ergebnisse
mit dem Gaschromatographen 49
4.2.2 TMA-N-Gehalt im Eidotter 50
4.2.3 Leistungsdaten 55
4.3 Genotypisierung 56
4.3.1 Mikrosatelliten 56
4.3.2 Sequenzierung 61
4.3.2.1 Polymorphismen des FMO3 Gens 62
4.3.2.1.1 Polymorphismen im Exon 66
4.3.2.1.2 Polymorphismen im Intron 67
4.3.3 Typisierung der F2-Generation mit dem
Restriktionsenzym TSP45I 67
5 Diskussion 72
6 Zusammenfassung 90
7 Summary 92
8 Literatur 94
9 Anhang 107
DI
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