Mutationsanalyse im Präcore-Gen bei chronischer HBeAg-negativer Hepatitis B:
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINFUEHRUNG 8
1.1. KLINISCHE VERLAUFSFORMEN DER AKUTEN UND CHRONISCHEN HEPATITIS
9
1.2. HISTOLOGISCHE BEURTEILUNG DER AKUTEN UND CHRONISCHEN HEPATITIS
11
1.3. THERAPIE DER AKUTEN UND CHRONISCHEN HEPATITIS B
12
1.4. CHARAKTERISIERUNG DES HEPATITIS B- VIRUS
15
1.4.1. AUFBAU DES VIRUS 15
1.4.2. AUFBAU DES HBV-GENOMS 15
1.4.3. DIE VIRUSPROTEINE 17
1.4.3.1. DIE BILDUNG DES HBEAG 18
1.5. LABORDIAGNOSTIK DER HEPATITIS B
19
1.6. HEPATITIS B-VIRUSMUTANTEN
24
1.6.1. DIE BEDEUTUNG VERSCHIEDENER VORKOMMENDER
HEPATITIS B-VIRUSMUTANTEN 24
1.6.2. HBEAG-NEGATIVITAET UND MUTATIONEN IM PRAECORE-GEN 26
1.7. FRAGESTELLUNG DER ARBEIT
27
2. MATERIAL 30
2.1. PATIENTENMATERIAL
30
2.2. BAKTERIENSTAEMME
30
2.3. MEDIEN, PUFFER, LOESUNGEN
30
2.3.1. MEDIEN FUER BAKTERIENKULTUR 30
2.3.2. MOLEKULARBIOLOGISCHE PUFFER UND REAGENZIEN 30
2.4. NUKLEINSAEUREN
31
2.4.1. PLASMID 31
2.4.2. OLIGONUKLEOTIDE 31
2.5. REAGENZSYSTEME
32
3. METHODEN 33
3.1. SEROLOGIE
33
3.1.1. VORBEREITUNG DER SEREN 33
3.1.2. SEROLOGISCHE METHODEN 33
3.2. A USWAHL DER SEREN FUER DIE PRAECORE-GENSEQUENZANALYSE
33
3.3. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
33
5
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.3.1. DNS-EXTRAKTION AUS SERUM 3 3
3.3.2. PCR 34
3.3.2.1. HERSTELLUNG DER POSITIVKONTROLLE 34
3.3.2.2. PCR IM HBS-GEN 35
3.3.2.3. PCR IM PRAECORE/CORE-GEN 37
3.3.2.4. DETEKTION DER PCR-PRODUKTE 39
3.3.3. AUFREINIGEN DES PCR-PRODUKTES 39
3.3.4. SEQUENZIERUNG 39
3.4. REINIGUNG DER SEQUENZIERPRODUKTE UND VORBEREITUNG DER
ELEKTROPHORESE
41
3.5. ELEKTROPHORESE DER SEQUENZIERPROBEN
41
3.6. A USWERTUNG DER ERHALTENEN SEQUENZEN 4
1
4. ERGEBNISSE 42
4.1. PATIENTENGUT
42
4.2. PCR
43
4.3. SEQUENZIERUNG
43
4.4. SEQUENZUNTERSUCHUNGEN UND RELEVANTE MUTATIONEN
45
4.4.1. UNTERSUCHTE SEQUENZEN 45
4.4.2. RELEVANTE MUTATIONEN 46
4.5. MUTATIONSVERTEILUNG IN DEN PATIENTENGRUPPEN
48
4.5.1. KOLLEKTIV DER HBEAG-NEGATIVEN PROBANDEN 48
4.5.2. DIE KONTROLLJ*RUPPE 48
4.6. ZUSAMMENFASSUNG DER ERMITTELTEN MUTATIONSVERTEILUNG
48
4.
7. VERAENDERUNGEN VON VIRUSSTAEMMEN BEI LONGITUDINALER BEOBACHTUNG 52
5. DISKUSSION 55
5.
1. MUTATIONEN IM PRAECORE-GEN DES UNTERSUCHTEN PATIENTENKOLLEKTIVES
UND IHRE BEDEUTUNG FUER DIE BILDUNG DES HBEAG
57
5.2. DIE MUTATIONSVERTEILUNG IN DEN PATIENTENGRUPPEN
59
5.3. AUSWIRKUNGEN DER ERGEBNISSE AUF DIE ENTWICKLUNG UND
ANWENDUNG ANDERER MUTATIONSSPEZIFISCHER TESTSYSTEME 62
5.4 BEMERKUNGEN ZU DER LONGITUDINALEN TESTREIHE IM RAHMEN EINER
THERAPIESTUDIE
64
6
ZUSAMMENFASSUNG DER ARBEIT
LITERATUR
ANLAGEN
(DANKSAGUNG, LEBENSLAUF, ERKLAERUNG) |
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