Untersuchungen von p53-Mutationen und Mikrovaskularisationsdichte primärer kolorektaler Karzinome und korrespondierender Lebermetastasen:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. ZIELSTELLUNG 5
2. EINLEITUNG 6
2.1. EINFUEHRUNG IN DIE PROBLEMATIK DER TUMOR-ASSOZIIERTEN ANGIOGENESE 6
2.2. DAS P53-TUMORSUPPRESSORGEN: STRUKTUR UND FUNKTION 8
3. MATERIAL 15
3.1. CHARAKTERISIERUNG DES PATIENTENGUTES 15
3.2. GERAETE 16
3.3. REAGENZIEN 17
3.4. FARBSTOFFE 18
3.5. ENZYME 18
3.6. KITS 18
3.7. PUFFER UND STAMRR.OESUNGEN 18
3.8. ANTIKOERPER 19
3.9. SONSTIGE MATERIALIEN UND VERBRAUCHSMITTEL 20
T
4. METHODEN 20
4.1. IMMUNHISTOCHEMIE 20
4.1.1. SCHNITTHERSTELLUNG UND FAERBEVORGANG AM KRYOMATERIAL 20
4.1.2. BESTIMMUNG DER MIKROVASKULARISATIONSDICHTE 23
4.1.3. KRITERIEN FUER DIE AUSWERTUNG DER VEGF-IMMUNHISTOCHEMIE 26
4.1.4. KRITERIEN FUER DIE AUSWERTUNG DER P53-LMMUNHISTOCHEMIE 26
4.2. MUTATIONSANALYSE DES P53-TUMORSUPPRESSORGENS 27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
4.2.1. DNA-EXTRAKTION AUS DEM GEFRIERGEWEBE 27
4.2.2. PHOTOMETRISCHE QUANTIFIZIERUNG UND REINHEITSBESTIMMUNG
DER DNA 28
4.2.3. POLYMERASEKETTENREAKTION 29
4.2.3.1. PRIMER 30
4.23.2. DNA-AMPLIFIKATION
31
4.2.3.3. AUFTRENNUNG UND ANALYSE DER PCR-PRODUKTE IM AGAROSEGEL 33
4.2.4. AUFREINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 34
4.2.5. SEQUENZIERUNG DER PCR-PRODUKTE 35
4.2.5.1. SEQUENZIERUNGSREAKTION-DYE TERMINATOR CYCLE SEQUENZIERUNG 35
4.2.5.2. FAELLUNG DER SEQUENZIERPRODUKTE 37
4.25.3. DNA-SEQUENZIERUNG 38
4.2.54. SEQUENZANALYSE 38
4.3. STATISTISCHE METHODEN 39
5. ERGEBNISSE 40
5.1. IMMUNHISTOCHEMIFCHE BESTIMMUNG DER
MIKROVASKULARIS' LIONSDICHTE UND DER VEGF-EXPRESSION 40
5.1.1. MIKROVASKULANSATIONSDICHTE IN PRIMAERTUMOREN UND LEBERMETASTASEN
40
5.1.2. VEGF-EXPRESSION 42
5.1.3. KORRELATION ZWISCHEN MIKROGEFAESSDICHTE UND VEGF-EXPRESSION 43
5.2. P53 - MUTATIONEN IN EXONS 4-9 44
5.2.1. DIREKTE SEQUENZIERUNG 44
5.2.2. IMMUNHISTOCHEMISCHE UEBEREXPRESSION DES P53-PROTEINS 48
5.3. KORRELATION ZWISCHEN MIKROVASKULARISATIONSDICHTE
UND P53-MUTATIONEN 49
5.4. KORRELATION ZWISCHEN P53-MUTATION UND VEGF-EXPRESSION 53
SEITE
6. DISKUSSION 54
7. ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK
69
8. VERWENDETE ABKUERZUNGEN
70
9. LITERATURVERZEICHNIS
72
10. ANHANG
90 |
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