Entwicklung einer Allel-spezifischen PCR zum Nachweis des Mutationsverhaltens des K-ras-Onkogens in Pankreaskarzinomen: klinisch-experimentelle Untersuchungen an humanen Tumoren sowie Tumorpassagen aus einem Tierversuchsmodell
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Beschreibung: | Hamburg, Univ., Diss., 2003 |
| Beschreibung: | 56 Bl. Ill., graph. Darst. : 30 cm |
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INHALT
1. EINLEITUNG.
1
1.1 VORBEMERKUNGEN. 1
1.1.1 DAS PANKREASKARZINOM. 1
1.1.2 RAS-GENE UND RAS-PROTEINE. 3
1.1.3 DAS RAS-ONKOGEN. 4
1.1.4 DIE POLYMERASEKETTENREAKTION ("POLYMERASE CHAIN REACTION", PCR).
5
1.2 ZIELSETZUNGEN DER ARBEIT. 8
1.3 FRAGESTELLUNGEN. 9
2. MATERIAL UND METHODEN. IO
2.1 ALLGEMEINES. 10
2.2 PUFFER UND LOESUNGEN. 10
2.3 TUMORMATERIAL. 10
2.3.1 TIERE. 12
2.3.2 TRANSPLANTATION. 12
2.4 ISOLIERUNG VON DNA. 13
2.4.1 ISOLIERUNG VON DNA AUS GEWEBETEILEN. 13
2.4.2 ISOLIERUNG VON DNA AUS FLUESSIGKEITEN. 14
2.5 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR). 14
2.5.1 ALLGEMEINES. 14
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.5.1.1 METHODEN ZUM NACHWEIS VON MUTIERTEN RAS-GENEN BASIEREND
AUF DER PCR. 14
2.5.1.2 ALLGEMEINES ZUR DURCHFUEHRUNG DER PCR. 16
2.5.2 AUSWAHL DER OLIGONUKLEOTID-PRIMER. 16
2.5.2.1 PRIMER DER 1. PCR. 17
2.5.2.2 ALLEL-SPEZIFISCHE PRIMER. 18
2.5.3 1. PCR. 19
2.5.4 YYNESTED"-PCR. 20
2.6 GELELEKTROPHORESE. 21
2.6.1 PRAEPARATION DER AGAROSEGELE. 21
2.6.2 ELEKTROPHORESE. 22
2.6.3 PHOTOGRAPHIE. 23
3. ERGEBNISSE.
24
3.1 ENTWICKLUNG EINER ALLEL-SPEZIFISCHEN PCR ZUM NACKWEIS VON
MUTATIONEN DES CODON 12 DES K-RAS ONKOGENS
. 24
3.1.1 1 .PCR UND "NESTED"-PCR. 24
3.1.2 VARIATION DER "AIMEALING"-TEMPERATUR. 25
3.1.3 NACHWEIS DER SPEZIFITAET DER OLIGONUCLEOTIDE. 26
3.2 ANWENDUNG DER ALLEL-SPEZIFISCHEN PCR
. 27
3.2.1 NACHWEIS VON K-RAS CODON 12 MUTATIONEN IN PANKREASKARZINOMGEWEBE
27
3.2.2 NACHWEIS VON K-RAS CODON 12 MUTATIONEN IN FLUESSIGKEITEN. 28
3.3 HAEUFIGKEITSVERTEILUNG DER NACHGEWIESENEN K-RAS CODON 12
MUTATIONEN IN DEN ORIGINAL-TUMOREN
. . 28
3.4 K-RAS CODON 12 MUTATIONEN IM VERLAUF MEHRERER "PASSAGEN". 29
3.5
K-RAS CODON 12 MUTATIONEN IN ENDOSKOPISCH GEWONNENEN SEKRETEN 32
4. DISSKUSSION.
33
4.1 DIE ALLEL-SPEZIFISCHE PCR: VERGLEICH MIT ANDEREN PCR-METHODEN
ZUM NACHWEIS DES K-RAS ONKOGENS. 33
4.2 HAEUFIGKEIT DER K-RAS CODON 12 MUTATIONEN IN
PANKREASKARZINOMEN. 34
4.3 MOEGLICHE KLINISCHE ANWENDUNG DER ALLEL-SPEZIFISCHEN PCR ZUR
DIAGNOSEFINDUNG BEIM PANKREASKARZINOM. 38
4.4 MUTATIONSVERHALTEN DES K-RAS GENS IN TUMORPASSAGEN.
40
4.5 EIGNUNG DES NACKTMAUSMODELLS IN DER TUMORFORSCHUNG. 41
5. ZUSAMMENFASSUNG.
43
6. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS. 44
7.
VERZEICHNIS DER ABBILDUNGEN UND TABELLEN
. 46
7.1 ABBILDUNGEN. 46
7.2 TABELLEN. 46
8. ALPHABETISCHES LITERATURVERZEICHNIS. 47
DANKSAGUNG
54
LEBENSLAUF.
55
ERKLAERUNG.
56 |
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