Ionenkanäle während der Nephrogenese: Expressionsmuster und funktionelle Bedeutung
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ARBEIT
(ABSTRACT)
1
1
EINLEITUNG
1.1
PRO
UND
MESONEPHROGENESE
3
1.2
METANEPHROGENESE
6
1.2.1
NEPHRON-GENESE
8
1.2.2
MOEGLICHE
EPITHELFUNKTIONEN
IN
DER
NEPHROGENESE
10
1.3
UNTERSUCHTE
LONENKANAELE
13
1.3.1
IC-KANAELE
DER
KIR-SUPERFAMILIE
13
1.3.2
DER
EPITHELIALE
NA*-KANAL
(ENAC)
15
1.3.3
DIE
CI
-KANAELE
CFTR,
CLC-2
UND
ICLN
16
1.4
LONENKANAL-UND
TRANSPORTEREXPRESSION
DER
ADULTEN
NIERE
18
1.5
ZIEL
UND
HINTERGRUND
DER
ARBEIT
19
INHALTSVERZEICHNIS
II
2
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1
MATERIAL
2.1.1
CHEMIKALIEN,
HORMONE
UND
ENZYME
21
2.1.2
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
MEDIEN
23
2.1.3
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
24
2.1.4
ANTIKOERPER
UND
VEKTOREN
26
2.1.5
ZELLULAERES
MATERIAL
UND
TIERE
27
2.1.6
GERAETE,
SOFTWARE
UND
SONSTIGES
27
2.2
METHODEN
2.2.1
ZELLKULTUR
2.2.1.1
SAMMELROHREPITHEL-MONOLAYER-PRIMAERKULTUR
29
2.2.1.2
FORSKOF/H-STIMULATION
VON
SAMMELROHREPITHEL-PRIMAERKULTUREN
33
2.2.1.3
IN
V/FRO-NEPHROGENESE-MODELL,
PROLIFERATIONSASSAY
34
2.2.1.4
HEK293-ZELLKULTUR,
PROLIFERATIONSASSAY
36
2.2.2
NUKLEINSAEURE-TECHNIKEN
2.2.2.1
RNA-PRAEPARATION
UND
REVERSE
TRANSKRIPTION
36
2.2.2.2 DNA-EXTRAKTION
37
2.2.2.3
PCR
(POLYMERASE-KETTENREAKTION)
37
2.2.2.4 GEL-ELEKTROPHORESE
38
2.2.2.5
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
39
2.2.2.6
QUANTIFIZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
40
2.2.3
PROTEIN-TECHNIKEN
2.2.3.1
POLYKLONALER
KIR6.1-ANTIKOERPER
42
2.2.3.2
POLYKLONALER
ROMK-ANTIKOERPER
44
2.2.3.3
HISTOLOGISCHE
PRAEPARATION
VON
NIEREN
45
2.2.3.4
IMMUNHISTOCHEMIE
46
INHALTSVERZEICHNIS
III
3
ERGEBNISSE
3.1
IC-KANAELE
IM
SAMMELROHREPITHEL
3.1.1
KIR6.1-,
SUR2-UND
ROMK-MRNA-EXPRESSIONSMUSTER
47
3.1.2
EINFLUSS
VON
CAMP
AUF
DIE
ROMK-MRNA-EXPRESSION
50
3.1.3
KIR6.
1
-
UND
ROMK-IMMUNHISTOCHEMIE
IM
SAMMELROHR
51
3.1.4
ZUSAMMENFASSUNG
55
3.2
K*-KANAELE
IM
NEPHRONEPITHEL
3.2.1
KIR6.1-IMMUNHISTOCHEMIE
IM
NEPHRON
57
3.2.2 ROMK-IMMUNHISTOCHEMIE
IM
NEPHRON
60
3.2.3
ZUSAMMENFASSUNG
62
3.3
FUNKTION
VON
K
A7P
-KANAELEN
(KIR6.1/SUR2(B))
IN
DER
NEPHROGENESE
3.3.1
EFFEKTE
DER
K
ATP
-KANALAKTIVIERUNG
AUF
NEPHRON-KULTUREN
IN
VITRO
63
3.3.2
EFFEKTE
DER
K
ATP
-KANAL-MODULATION
AUF
DAS
WACHSTUM
VON
HEK293
ZELLEN
65
3.4
NA*-KANAELE
IM
SAMMELROHREPITHEL
3.4.1
A-ENAC-MRNA-EXPRESSIONSMUSTER
66
3.5
CL'-KANAELE
IM
SAMMELROHREPITHEL
3.5.1
CFTR-MRNA-EXPRESSIONSMUSTER
68
3.5.2
CLC-2-MRNA-EXPRESSIONSMUSTER
70
3.5.3
ICLN-MRNA-EXPRESSIONSMUSTER
71
3.5.4
ZUSAMMENFASSUNG
73
INHALTSVERZEICHNIS
IV
4.
DISKUSSION
4.1
ERGEBNISSE
AUS
MONOLAYER-PRIMAERKULTUREN
4.1.1
VALIDITAET
DES
MODELLS
75
4.1.2
INTERPRETATION
DER
GEWONNEN
DATEN
75
4.1.3
SYNOPSIS
DER
EXPRESSIONSMUSTER
VON
LONENKANAL-MRNA
IM
SAMMELROHR
76
4.2
K
LW
-KANAELE
IN
DER
NEPHROGENESE
4.2.1
EXPRESSIONSMUSTER
77
4.2.2
FUNKTIONELLE
BEDEUTUNG
FUER
DIE
ZELLPROLIFERATION
81
4.3
K
LW
-KANAELE
IM
ADULTEN
PROXIMALEN
TUBULUS
83
4.4
ROMK-KANAELE
IN
DER
NEPHROGENESE
4.4.1
DIE
FRUEHE
SAMMELROHR
UND
NEPHRON-GENESE
85
4.4.2
DIE
POSTNATALE
REIFUNG
DES
SAMMELROHREPITHELS
85
4.4.3
DIE
ROMK-MRNA-EXPRESSION
IST
CAMP-ABHAENGIG
87
4.4.3.1
IMPLIKATIONEN
FUER
DIE
FUNKTION
DER
ADULTEN
NIERE
87
4.4.3.2
IMPLIKATIONEN
FUER
DIE
NEPHROGENESE
89
4.5
NA*-UND
CL
-KANAELE
IN
DER
NEPHROGESESE
4.5.1
A-ENAC-MRNA
IM
SAMMELROHREPITHEL
91
4.5.2
CFTR-MRNA
IM
SAMMELROHREPITHEL
94
4.5.3
CLC-2
UND
ICLN-MRNA
IM
SAMMELROHREPITHEL
96
4.6
ZELLULAERE
POLARISIERUNG
UND
DIFFERENZIERUNG
IN
DER
NEPHROGENESE
98
4.7
AUSBLICK
101
INHALTSVERZEICHNIS
V
5.
LITERATUR
103
ABKUERZUNGEN
UND
GLOSSAR
116
DANKSAGUNG
120
LEBENSLAUF
UND
VEROEFFENTLICHUNGEN
121 |
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