Massenspektrometrische Analyse, chemische Modifizierung und Synthese von Lipoproteinen:
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| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
München
Hieronymus
[2003]
|
| Series: | Biochemie : Analytische Chemie
|
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| Item Description: | Zugl.: Konstanz, Univ., Diss., 2002 |
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1
EINLEITUNG
1
1.1
STRUKTUR
UND
FUNKTION
VON
LIPOPROTEINEN
1
1.2
BIOSYNTHESE
VON
FETTSAEUREACYLIERTEN
PROTEINEN
5
1.3
DARSTELLUNG
MODIFIZIERTER
PROTEINE
DURCH
KOMBINATION
VON
GENTECHNISCHEN
UND
PROTEINCHEMISCHEN
METHODEN
7
1.4
PROTEINCHEMISCHE
UMSETZUNGEN
ZUR
MODIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
8
1.5
ANALYTISCHE
METHODEN
ZUR
STRUKTURAUFKLAERUNG
VON
PEPTIDEN
UND
PROTEINEN
10
1.6
MASSENSPEKTROMETRISCHE
METHODEN
ZUR
STRUKTURAUFKLAERUNG
VON
BIOPOLYMEREN
13
1.7
ZIELSETZUNGEN
DER
ARBEIT
18
2
ALLGEMEINER
TEIL
20
2.1
FETTSAEUREACYLIERUNG
VON
CYSTEINRESTEN
IN
PEPTIDEN
UND
PROTEINEN
20
2.1.1
MODELLUNTERSUCHUNG
ZUR
SPEZIFISCHEN
ACYLIERUNG
VON
PEPTIDEN
MIT
INTERNEN
CYSTEINEN
DURCH
TRANSTHIOESTERIFIZIERUNG
21
2.1.1.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DES
PH-WERTES
AUF
DIE
SPEZIFITAET
DER
ACYLIERUNGSREAKTION
21
2.1.1.2
NACHWEIS
DER
HOMOGENITAET
DES
ACYLIERUNGSPRODUKTES
UND
IDENTIFIZIERUNG
DER
ACYLIERUNGSSTELLE
24
2.1.1.3
DIREKTE
VERLAUFSANALYSE
DER
ACYLIERUNGSREAKTION
DURCH
NANOELEKTROSPRAY
MASSENSPEKTROMETRIE
29
2.1.2
MODELLUNTERSUCHUNG
ZUR
SELEKTIVEN
ACYLIERUNG
VON
PEPTIDEN
MIT
N-TERMINALEM
CYSTEIN
32
2.1.2.1
KONZEPT
ZUR
SELEKTIVEN
N-TERMINALEN
ACYLIERUNG
32
2.1.2.2
MODELLUNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DES
REAGENZUBERSCHUSSES
UND
DES
ZUSATZES
V.
THIOLEN
33
2.1.2.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
MODIFIZIERUNGSSTELLE
DURCH
CHEMISCHE
UND
MASSENSPEKTROMETRISCHE
METHODEN
38
2.1.2.4
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
DER
MODELLUNTERSUCHUNG
44
2.1.3
SELEKTIVE
N-TERMINALE
ACYLIERUNG
DES
HUMANEN
SONIC
HEDGEHOG
PROTEINS
HSHH(24-197)
46
2.1.3.1
STRUKTUR,
FUNKTION
UND
BIOSYNTHESE
VON
HSHH(24
197)
46
2.1.3.2
PRIMAERSTRUKTURCHARAKTERISIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
HSHH(24-197)
50
2.1.3.3
SELEKTIVE
CHEMISCHE
ACYLIERUNG
DES
SYNTHETISCHEN
N-TERMINALEN
PEPTIDES
HSHH(24-30)
56
2.1.3.4
SELEKTIVE
CHEMISCHE
ACYLIERUNG
VON
HSHH(24-197)
62
2.1.3.5
IDENTIFIZIERUNG
DER
ACYLIERUNGSSTELLE
DURCH
MASSENSPEKTROMETRISCHE
PEPTIDE-MAPPING-ANALYSE
66
2.2
IDENTIFIZIERUNG,
STRUKTURCHARAKTERISIERUNG
UND
SYNTHESE
VON
SURFACTANTPROTEINEN
70
2.2.1
ZUSAMMENSETZUNG
UND
PHYSIOLOGISCHE
FUNKTION
DES
LUNGENSURFACTANTS
70
2.2.2
HYDROPHOBE
SURFACTANTPROTEINE
UND
SYNTHETISCHE
ANALOGA
72
2.2.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
STRUKTUR
UND
SUPRAMOLEKULAREN
ASSOZIATION
DES
LUNGENSURFACTANTPROTEINS
SP-C
76
2.2.3.1
NACHWEIS
EINES
SPEZIFISCHEN
DIMEREN
DURCH
ESI-FT-ICR-MS
76
2.2.3.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SEKUNDAER
UND
QUARTARSTRUKTUR
VON
SP-C
DURCH
SPEKTROSKOPISCHE
UND
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
79
2.2.4
FESTPHASENSYNTHESE
VON
SPC
(FFI)
85
2.2.4.1
SYNTHESE
VON
SP-C
(FFI)
MIT
KONVENTIONELLER
FMOC-STRATEGIE
AUF
BASIS
DES
BOC/PBF
SEITENKETTENSCHUTZGRUPPENSYSTEMS
86
2.2.4.2 URSACHEN
DER
AGGREGATION
VON
SYNTHETISCHEM
SP-C
(FFI)
89
2.2.4.3
FMOC-SYNTHESE
VON
SP-C
(FFI)
MIT
SAEUREHOCHEMPFINDLICHEN
LINKERN
UND
SEITENKETTENSCHUTZGRUPPEN
90
2.2.4.4
PRIMAERSTRUKTURCHARAKTERISIERUNG
DES
SYNTHETISCHEN
SP-C
(FFI)
99
2.2.4.5
ABSPALTUNGSVERSUCHE
IN
ISOPROPANOLHALTIGEN
LOESUNGEN
102
2.2.4.OE
ABSPALTUNGSVERSUCHE
IN
HALOGENHALTIGEN
LOSUNGSMITTELGEMISCHEN
103
2.2.4.7
DISKUSSION
DER
SYNTHESE
VON
SP-C
(FFI)
109
2.2.5
FESTPHASENSYNTHESE
VON
SP-B
UND
KL4
HO
2.2.6
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
DES
ALVEOLARPROTEOMS
117
2.2.6.1
PROTEOMANALYTISCHE
VERFAHREN
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
KOMPLEXEN
BIOLOGISCHEN
MATRIZES
117
2.2.6.2
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
BRONCHOALVEOLARLAVAGE
DURCH
KOMBINATION
VON
2D
GELEKTROPHORESE
MIT
MASSENSPEKTROMETRISCHEN
METHODEN
119
2.2.6.3
PROTEINIDENTIFIZIERUNG
NACH
VORFRAKTIONIERUNG
DURCH
LIPID-EXTRAKTION
135
3
EXPERIMENTELLER
TEIL
140
3.1
VERWENDETE
REAGENZIEN
UND
MATERIALIEN
140
3.2
FESTPHASENPEPTIDSYNTHESE
140
3.2.1
AUTOMATISCHE
PEPTIDSYNTHESE
MIT
DEM
SYNTHESIZER
140
3.2.2
KUPPLUNG
DER
ERSTEN
AMINOSAEURE
AN
DAS
HARZ
142
3.2.3
ABSPALTUNG
DES
SYNTHETISCHEN
PEPTIDES
VOM
HARZ
142
3.2.4
SYNTHESE
VON
SP-C
(FFI)
143
3.2.4.1
KUPPLUNG
DER
ERSTEN
AMINOSAEURE
AN
DAS
2-CHLORTRITYLCHLORID-HARZ
143
3.2.4.2 KUPPLUNG
DER
ERSTEN
AMINOSAEURE
AN
DAS
TGT-ALKOHOL-HARZ
143
3.2.4.3
SCHUETZEN
DES
N-TERMINUS
MIT
4-METHYLTRITYLCHLORID
143
3.2.4.4
ENTSCHUETZEN
DES
ORNITHINS
144
3.2.4.5
GUANYHERUNG
DES
ORNITHINS
ZUM
ARGININ
144
3.2.4.6
KAISER-TEST
ZUR
DETEKTION
FREIER
AMINOGRUPPEN
144
3.2.4.7
ABSPALTEN
DES
SP-C
(FFI)
VOM
HARZ
144
3.3
PROTEINCHEMISCHE
UMSETZUNGEN
145
3.3.1
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
VON
PEPTIDEN
UND
PROTEINEN
145
3.3.1.1
BUTANOYLIERUNG
VON
YS16
145
3.3.1.2
SPEZIFISCHE
DEACYLIERUNG
VON
BUTANOYLIERTEM
YS
16
145
3.3.1.3
BUTANOYLIERUNG
VON
VASOPRESSIN
145
3.3.1.4
ACYLIERUNG
VON
HSHH(24-3O)
146
3.3.1.5
ACYLIERUNG
VON
HSHH(24-197)
147
3.3.1.6
PROTEOLYTISCHER
ABBAU
VON
HSHH(24-197)
148
3.3.1.7 SYNTHESE
VON
THIOPAIMITINSAEUREETHYLESTER
148
3.3.2
EDMAN-SEQUENZIERUNG
149
3.3.2.1
AUTOMATISCHE
EDMAN-SEQUENZIERUNG
MIT
HPLC-DETEKTION
149
3.3.2.2
MANUELLER
EDMAN-ABBAU
IN
KOMBINATION
MIT
MALDI-MS
149
3.4
GELELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
150
3.4.1
EINDIMENSIONALE
GELELEKTROPHORESE
150
3.4.1.1
PROBENFRAKTIONIERUNG
DURCH
LIPIDEXTRAKTION
150
3.4.1.2
SDS-PAGE
NACH
LAEMMLI
150
3.4.1.3
SDS-PAGE
MIT
BIS-TRIS-FERTIGGELEN
152
3.4.2
ZWEIDIMENSIONALE
GELELEKTROPHORESE
152
3.4.3
KOLLOIDALE
COOMASSIE-FARBUNG
NACH
NEUHOFF
152
3.4.4
SILBERFAERBUNG
NACH
HEUKESHOVEN
UND
DEMICK
153
3.4.5
TRYPTISCHER
IN-GEL-VERDAU
153
3.5
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
155
3.5.1
UMKEHRPHASEN
HOCHDRUCK-FLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
155
3.5.2
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
155
3.5.3
PROBENENTSALZUNG
DURCH
FESTPHASENEXTRAKTION
157
3.6
CD-SPEKTROSKOPIE
157
3.7
MASSENSPEKTROMETRISCHE
METHODEN
158
3.7.1
MALDI-TOF-MASSENSPEKTROMETNE
158
3.7.2
PROBENPRAEPARATION
UND
KALIBRIERUNG
FUER
DIE
MALDI-TOF-MS
158
3.7.3
ESI-MASSENSPEKTROMETNE
MIT
QUADRUPOLANALYSATOR
159
3.7.4
FOURIER-TRANSFORM
LONEN-ZYCLOTRON
MASSENSPEKTROMETRIE
160
3.7.4.1
ESI-FT-ICR
MASSENSPEKTROMETRIE
160
3.7.4.2
MALDI-FT-ICR
MASSENSPEKTROMETRIE
162
3.7.4.3
FT-ICR
TANDEM-MASSENSPEKTROMETRIE
163
3.8
METHODEN
DER
BIOINFORMATIK
164
4
ZUSAMMENFASSUNG
165
5
LITERATURVERZEICHNIS
169 |
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