Die funktionelle Relevanz humoraler und zellulärer Immunreaktionen gegen Campylobacter jejuni in der Pathogenese von Immunneuropathien:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 9
1 EINLEITUNG 11
1.1 GUILLAIN-BARRE SYNDROM (GBS) 11
1.1.1 KLINISCHE SYMPTOMATIK UND VERLAUF 11
1.1.2 PATHOLOGIE 12
1.1.3 PATHOGENESE 12
1.1.4 VERSCHIEDENE FORMEN DES GBS 14
1.1.4.1 ACUTE INFLAMMATORY DEMYELINATING POLYRADICULONEUROPATHY (AIDP)
15
1.1.4.2 ACUTE MOTOR AXONAL NEUROPATHY (AMAN) 15
1.1.4.3 ACUTE MOTOR AND SENSORY AXONAL NEUROPATHY (AMSAN) 16
1.1.4.4 MILLER FISHER SYNDROME (MFS) 16
1.1.5 ASSOZIATION VON INFEKTIONSKRANKHEITEN MIT DEM GBS 16
1.1.6 HYPOTHESEN ZUR ENTSTEHUNG DES GBS ALS POSTINFEKTIOESE
AUTOIMMUNERKRANKUNG 17
1.2 EXPERIMENTELLE AUTOIMMUNE NEURITIS (EAN) 19
1.3
CAMPYLOBACTER JEJUNI 21
1.3.1 GESCHICHTE UND BEDEUTUNG 21
1.3.2 BIOLOGIE 21
1.3.3 EPIDEMIOLOGIE UND UEBERTRAGUNG 21
1.3.4 KLINIK 22
1.3.5 PATHOGENESE 22
1.3.6 SEROTYPEN 22
1.4 ZIEL DER ARBEIT
23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
0 INHALTSVERZEICHNIS
2 ERGEBNISSE 25
2.1 EVALUATION DER NEURITOGENITAET VON
C. JEJUNI-ANTIGENPRAEPARATIONEN IN
RATTEN 25
2.1.1 IMMUNISIERUNG MIT GESAMT-C.
JEJUNI UND KONTROLLANTIGENEN 25
2.1.2 PROTEINFRAKTIONEN VON
C. JEJUNI 5646 UND 5647 26
2.1.3 IMMUNISIERUNG VON DA-RATTEN MIT GESAMT-C.
JEJUNI 27
2.2 MOEGLICHE BEEINFLUSSUNG EINER AT-EAN DURCH VORHERIGE INDUKTION EINER
IMMUNREAKTION GEGEN C.
JEJUNI 27
2.2.1
GESAMT-C. JEJUNI 27
2.2.2
C. JEJUNI-LPS 29
2.2.3 SEROLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 33
2.3 EINFLUSS VON
C. JEJUNI-LPS AUF DIE ORALE INDUKTION EINER ANTIGENSPEZIFISCHEN
IMMUNTOLERANZ DURCH FUETTERUNG VON BOVINEM MYELIN 34
2.3.1 KLINISCHER VERLAUF 34
2.3.2 SEROLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 37
2.4 EINFLUESSE ENTERALER
C. JEJUNI-ANTIGENE AUF DIE AKTIVE INDUKTION EINER
MYELIN-EAN 38
2.4.1 KLINISCHER VERLAUF 38
2.4.2 HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 45
2.5 ZELLULAERE UNTERSUCHUNGEN IN DER LEWIS-RATTE 48
2.5.1 GENERIERUNG C. Y'CY'WW-SPEZIFISCHER RATTEN-ZELL-LINIEN 48
2.5.2 I.V. GABE VON C. JEJUNI-SPEZIFISCHEN RATTEN-ZELLEN 50
2.5.3 PHAENOTYP C. YE/WM-SPEZIFISCHER RATTEN-ZELL-LINIEN 50
2.6 HERSTELLUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER GEGEN
C. JEJUNI-HPS 51
2.6.1 REAKTIVITAET IM ELISA 51
2.6.2 REAKTIVITAET DER MAK IM WESTERN BLOT 56
2.6.3 REAKTIVITAET IM DOT BLOT 58
2.6.4 MAKRO-PATCH-CLAMP UNTERSUCHUNGEN DES EFFEKTES C
YEY'NM-SPEZIFISCHER
ANTISEREN UND ANTIKOERPER AUF DIE NEUROMUSKULAERE UEBERTRAGUNG 59
3
2.7 ETABLIERUNG
C. /EYIF/U'-SPEZIFISCHER HUMANER T-ZELL-LINIEN 61
2.7.1 ZELLULAERE IMMUNANTWORT GEGEN GESAMTHOMOGENAT VON C.
JEJUNI 61
2.7.2 ZELLULAERE IMMUNANTWORT GEGEN C.
JEJUNI-PROTEIN UND C. JEJUNI-LPS 65
2.7.3 KREUZREAKTIVITAET C. YEYWM-SPEZIFISCHER T-ZELL-LINIEN MIT
MYELINANTIGENEN
69
2.7.4 C. YEYWW-SPEZIFISCHE HUMANE T-ZELLEN SIND MHC-KLASSE II
RESTRINGIERT 74
2.7.5 C. YEYWW-SPEZIFISCHE T-ZELL-LINIE NK-3 IST HLA-DR-11 RESTRINGIERT
78
2.7.6 PHAENOTYP
C. YEY WW-SPEZIFISCHER HUMANER T-ZELLEN 80
3 DISKUSSION 82
3.1 ZELLULAERE MECHANISMEN 82
3.1.1 AKTIVE IMMUNISIERUNG VON RATTEN MIT C. YEYWW-ANTIGEN 82
3.1.2 GENERIERUNG VON C. YEYWW-SPEZIFISCHEN RATTEN-T-ZELLEN 83
3.1.3 GENERIERUNG VON C. YEYUW-SPEZI FISCHEN HUMANEN T-ZELLEN 85
3.2 HUMORALE MECHANISMEN 90
3.2.1 IMMUNISIERUNG MIT C. YEYUM-ANTIGENEN UND INDUKTION EINER AT-EAN 90
3.2.2 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN VON C.
JEJUNI-IMMUNSEREN 93
3.2.3 GENERIERUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER GEGEN C. JEJUNI 94
3.3 IMMUNTOLERANZ 97
4 MATERIAL UND METHODEN 100
4.1 CHEMIKALIEN UND GERAETE 100
4.1.1 CHEMIKALIEN 100
4.1.2 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR 101
4.1.3 GERAETE 102
4.1.4 SONSTIGES 102
4.2 BAKTERIENSTAEMME 103
4.3 BAKTERIENANZUCHT 103
4
0 INHALTSVERZEICHNIS
4.4 ANTIGENGEWINNUNG 104
4.4.1 BAKTERIENGESAMTHOMOGENAT 104
4.4.2 AEUSSERE MEMBRAN-PROTEINE (OMPS) 104
4.4.3 FRAKTIONEN DER AEUSSEREN MEMBRAN-PROTEINE 104
4.4.4 LIPOPOLYSACCHARIDE 105
4.4.5 PRONASE-VERDAU VON LIPOPOLYSACCHARIDEN 105
4.4.6 MYELINPRAEPARATION (BPM) 105
4.4.7 PRAEPARATION DES MYELINPROTEINS P2 (P2-PROTEIN) 106
4.4.8 BASISCHES MYELINPROTEIN VOM MEERSCHWEINCHEN (GP-MBP) 107
4.5 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 108
4.5.1 VERSUCHSTIERE 108
4.5.2 INDUKTION VON ORALER TOLERANZ 108
4.5.3 INDUKTION VON AKTIVER EXPERIMENTELLER AUTOIMMUNER NEURITIS (EAN)
108
4.5.4 BEWERTUNG DES KRANKHEITSGRADES 109
4.6 HISTOLOGIE 109
4.6.1 PERFUSION UND PRAEPARATION 109
4.6.2 KUNSTHARZEINBETTUNG
11 O
4.6.3 PARAFFINEINBETTUNG
1 ] I
4.6.4 HAEMALAUN-EOSIN-FAERBUNG
111
4.6.5 IMMUNZYTOCHEMIE AN PARAFFINSCHNITTEN 112
4.7 ZELLKULTUR H3
4.7.1 STERILISATION
113
4.7.2 PROLIFERATIONSASSAY
113
4.8
ENZYM-GEKOPPELTER IMMUNOABSORPTIONS-ASSAY (ELISA) 113
4.9 SDS-GELELEKTROPHORESE
114
_5
4.10 HERSTELLUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER 116
4.10.1 B-ZELL-FUSION 116
4.10.2 AUSTESTUNG DER ANTIKOERPER-REAKTIVITAET 117
4.10.2.1 MITTELS ELISA 117
4.10.2.2 MITTELS WESTERN BLOT MIT IMMUNFARBUNG 117
4.10.2.3 MITTLES DOT BLOT 119
4.10.3 ISOLIERUNG DES ANTIKOERPERS AUS KULTURUEBERSTAND 119
4.11 HUMANE C. YE/IMI-SPEZIFISCHE T-LYMPHOZYTENLINIEN 120
4.11.1 ISOLIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN AUS DEM PERIPHEREN BLUT UND
PRIMAER
STIMULATION MIT
C. JEJUNI- ANTIGEN 120
4.11.2 ERSTE ANTI GENABHAENGIGE RESTIMULATION VON T-ZELL-KULTUREN 121
4.11.3 WEITERE RESTIMULATIONEN ZUR EXPANSION DER T-ZELL-LINIEN 121
4.11.4 PROLIFERATIONSASSAY UND AUSTESTUNG DER RESTRIKTION 121
4.11.5 BESTIMMUNG DES PHAENOTYPS MITTLES IMMUN-DURCHFLUSSZYTOMETRIE 122
4.12 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 122
5 ABKUERZUNGEN 123
6 LUERATUR 125
LEBENSLAUF 138
PUBLIKATIONSLISTE 139
ERKLAERUNG
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