Molekularbiologische und histologische Analyse des VEGF-Signalwegs bei der Neoangiogenese zur Blutversorgung menschlicher Hirntumoren:
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2002
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SEITE
5
INHALTSVERZEICHNIS
I
NHALTSVERZEICHNIS
1.
Z
USAMMENFASSUNG
.
8
2.
E
INLEITUNG
.
10
2.1.
UEBER
TUMOREN
UND
DEREN
WACHSTUM
.
10
2.1.1.
ALLGEMEINE
EINFUEHRUNG
ZU
TUMOREN
.
10
2.1.2.
NEOANGIOGENESE
ALS
ESSENTIELLE
WACHSTUMSBEDINGUNG
FUER
SOLIDE
TUMOREN
.
11
2.2.
VEGF
UND
SEINE
REZEPTOREN
-
EIN
ZENTRALER
SIGNALWEG
IN
DER
ANGIOGENESE
.
13
2.3.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
ANGIOGENESE
IN
HIRNTUMOREN
.
16
3.
M
ATERIALIEN
UND
M
ETHODEN
.
21
3.1.
TUMOR-GEWEBSPROBEN
UND
TUMOR-ZELLINIEN
.
21
3.1.1.
TUMOR-GEWEBSPROBEN:
AUFBEREITUNG
FUER
IN-SITU
STUDIEN
.
21
3.1.2.
TUMOR-ZELLINIEN:
PRAEPARATION
FUER
IN-VITRO
EXPERIMENTE
.
21
3.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
STUDIEN
.
23
3.2.1.
ISOLATION
ZELLULAERER
RNA
.
23
3.2.2.
EXTRAKTION
ZELLULAERER
PROTEINE
.
24
3.2.3.
REVERSE-TRANSKRIPTION
UND
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
ZUR
MRNA-ANALYSE
.
24
3.2.4.
WESTERN
BLOTTING
ZUR
PROTEIN-ANALYSE
.
27
3.2.5.
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
ZUR
PROTEIN-ANALYSE
.
30
3.3.
HISTOLOGISCHE
STUDIEN
.
31
3.3.1.
IN-VITRO
TRANSKRIPTION
UND
AUFREINIGUNG
VON
IN-SITU
HYBRIDISIERUNGS-RNA-SONDEN
.
31
3.3.2.
IN-SITU
HYBRIDISIERUNG
(ISH)
ZUR
MRNA-DETEKTION
IN
HIRNTUMOREN
.
33
333.
IMMUNHISTOCHEMIE
UND
IMMUNZYTOCHEMIE
ZUR
PROTEIN-DETEKTION
IN
HIRNTUMOREN
.
34
33.4.
HAEMATOXYLIN-EOSIN-(H.-E.-)FAERBUNG
VON
TUMOR-GEWEBSPROBEN
.
36
33.5.
ISOTYPISIERUNG
VON
MONOKLONALEN
MAUS-ANTIKSRPERN
(MAK)
.
36
3.4.
STATISTISCHE
ANALYSEN
AUF
SIGNIFIKANTE
KORRELATIONEN
.
37
3.5.
MATERIALIENVERZEICHNIS
.
38
SEITE
6
INHALISVCIZCICHNIS
4.
E
RGEBNISSE
.
42
4.1.
EXPRESSIONSMUSTER
DES
ANGIOGENESEFAKTORS
VEGF
IN
HUMANEN
HIRNTUMOREN
{I73JTL.
.
42
4.1.1.
CHARAKTERISIERUNG
EINES
NEU
ENTWICKELTEN
MONOKLONALEN
MAUS-ANTIKOERPERS
GEGEN
HUMANES
VEGF-PROTEIN
.
42
4.1.2.
ASTROZYTAERE
HIRNTUMOREN:
EXPRESSION
VON
VEGF
KORRELIERT MIT
NEOANGIOGENESE,
ABER
NICHT
MIT
/,55-IMMUNREAKTIVITAET
.
43
4.1.3.
OLIGODENDROGLIOME
UND
OLIGO-ASTROZYTOME
(MISCHGLIOME):
OLIGODENDROGLIALE
TUMOR-ZELLEN
INDUZIEREN
NEOANGIOGENESE
UEBER
ANDERE
FAKTOREN
ALS
VEGF
.
44
4.1.4.
EPENDYMALE
HIRNTUMOREN:
STAERKE
(UND
NICHT
HAEUFIGKEIT)
VON
VEGF-EXPRESSION
NIMMT,
IM
GEGENSATZ
ZU
ASTROZYTOMEN,
MIT
STEIGENDEM
WHO-TUMORMALIGNITAETSGRAD
AB
.
44
4.1.5.
MEDULLOBLASTOME:
EXPRESSIONSSTATUS
VON
VEGF
IST
NUR
SELTEN
POSITIV
UND
WEDER
MIT/ 53
IMMUNREAKTIVITAET
NOCH
MIT
TUMOR-VASKULARISIERUNG
ASSOZIIERT
.
45
4.1.6.
MENINGEOME:
VEGF-EXPRESSION
IST
UNABHAENGIG
VON
TUMOR-VASKULARISIERUNG
UND
HAEUFIGER
IN
NIEDRIGERGRADIGEN
NEOPLASIEN
.
45
4.1.7.
HAEMANGIOBLASTOME:
VOR
ALLEM
INTERSTITIELLE,
DOCH
AUCH
ENDOTHELIALE
ZELLEN
SIND
IMMUNHISTOCHEMISCH
VEGF-POSITIV
.
45
4.1.8.
EXPRESSION
VON
VEGF
IN
NICHT
NEOPLASTISCHEN
ZELLEN
.
45
4.1.9.
WESTERN-BIOT-ANALYSE
DETEKTIERT
VERSCHIEDENE
PROTEIN-ISOFORMEN:
VEGFUI
UND
DOMINIERENDES
VEGF
165
.
48
4.1.10.
RT-PCR-ANALYSE
DETEKTIERT
ZUSAETZLICHE
MRNA-ISOFORMEN
VON
VEGF
.
51
4.2.
REGULATION
VON
VEGF
IN
MALIGNEN
GLIALEN
TUMOR-ZELLEN
IN
VITRO
L
253
)
.
52
4.2.1.
IL-1
UND
EGF
STIMULIEREN
UEBER
UNTERSCHIEDLICHE
MECHANISMEN
DIE
VEGF-SEKRETION
IN
GLIALEN
TUMOR-ZELLEN
.
53
4.2.2.
BLOCKADE
DES
IL-1
REZEPTORS
INHIBIERT
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
.
54
4.2.3.
VEGF-SEKRETION
AUS
INTRAZELLULAEREN
SPEICHERN
IM
VERGLEICH
ZU
DE-NOVO
SYNTHESE
.
54
4.2.4.
EFFEKTE
VON
IL-1
UND
EGF
AUF
DIE
VEGF-PRODUKTION
VERSCHIEDENER
GLIOM-ZELLINIEN
.
56
4.2.5.
UNTERSCHIEDLICHE
EFFEKTE
VON
IL-1
UND
EGF
AUF
GEN-TRANSKRIPTION
UND
SPLEISS-VARIANTEN
VON
VEGF
AUF
MRNA
UND
PROTEIN-NIVEAU
.
57
4.3.
INDUKTION
DES
ETS-L-TRANSKRIPTIONSFAKTORS
IN
HUMANEN
ASTROZYTAEREN
HIRNTUMOREN
UND
ASSOZIATION
MIT
FLT-L/VEGFR-L-EXPRESSION
SOWIE
NEOANGIOGENESE
252
)
.
59
4.3.1.
INDUKTION
VON
EFT-7-MRNA
IN
HUMANEN
GLIALEN
HIRNTUMOREN
.
59
4.3.2.
EXKLUSIVE
EXPRESSION
DER
VOLLAENGEN-E/S-7-MRNA-ISOFORM
.
59
433.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
DETEKTION
UND
DIFFERENTIELLE
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
VON
ETS-1
PROTEIN
WAEHREND
DER
TUMOR-ANGIOGENESE
.
61
4.3.4.
KOMPLEMENTAERES
EXPRESSIONSMUSTER
VON
VEGF
UND
ETS-1
IN
HUMANEN
ASTROGLIOMEN
.
62
SEITE
7
INHALTSVERZEICHNIS
43.5.
ETS-L-EXPRESSION
IN
ENDOTHELZELLEN
VON
MIKROGEFAESSSTRUKTUREN
KORRELIERT
MIT
DEM
INDUKTIONSMUSTER
VON
FLT-1
/VEGFR-1
UND
TUMOR-NEOANGIOGENESE
.
62
5.
D
ISKUSSION
.
66
5.1.
EXPRESSION
UND
VERTEILUNG
VON
VEGF
ALS
POTENTIELLEM
INDUKTOR
DER
NEOANGIOGENESE
IN
HUMANEN
HIRNTUMOREN
.
66
5.2.
REGULATION
VON
VEGF
IN
MALIGNEN
GLIALEN
TUMOR-ZELLEN
IN
VITRO
.
70
5.3.
INDUKTION
DES
ETS-L-TRANSKRIPTIONSFAKTORS
IN
HUMANEN
ASTROZYTAEREN
HIRNTUMOREN
UND
ASSOZIATION
MIT
FLT-L/VEGFR-L-EXPRESSION
SOWIE
NEOANGIOGENESE.
74
6.
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
78
7.
A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
95
8.
A
BBILDUNGS
-
UND
T
ABELLEN
-V
ERZEICHNIS
.
98
9.
D
ANKSAGUNG
.
99
10.
C
URRICULUM
V
ITAE
.
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