Studien zur Signaltransduktion im salizylsäureabhängigen programmierten Zelltod hypersensitiv reagierender Sojazellkultur:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG.1
1.1 DIE HYPERSENSITIVE REAKTION - EIN UEBERBLICK.2
PROGRAMMIERTER ZELLTOD (PCD)
.2
SIGNALE UND SIGNALWEITERLEITUNG.2
1.2 SALIZYLSAEURE.4
1.3 MITOGEN AKTIVIERTE PROTEINKINASEN (MAPK) IN DER PFLANZLICHEN
PATHOGENABWEHR. 6
1.4 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN IN DER PFLANZLICHEN PATHOGENABWEHR.7
DIE GCC-BOX UND ERFS.8
W-BOX UND WRKY-PROTEINE
.8
MRE-AEHNLICHE SEQUENZEN UND MYB-FAKTOREN.9
G-BOX, AS-1 AEHNLICHE ELEMENTE UND BZIP-FAKTOREN
.9
1.5 LEKTINE IN PFLANZEN.10
1.6 DAS SOJABOHNE -
PSEUDOMONAS SYRINGAE PV. G/YCMEA-PATHOSYSTEM.12
1.7 ZIELE DER ARBEIT.13
2. MATERIAL UND METHODEN.14
2.1 BAKTERIENANZUCHT.14
2.2 SOJAZELLKULTUR.15
2.3 BEHANDLUNG DER SOJAZELLKULTUR.15
2.4 RNA-ISOLATION.15
2.5 NORTHEM-BLOTTING.16
2.6 HYBRIDISIERUNG UND SONDONMARKIERUNG.17
2.7 DNA-SEQUENZIERUNG UND HOMOLOGIESUCHE.18
2.8 DNA-ISOLATION.19
2.9 RESTRIKTION VON DNA.19
2.10 LIGATION VON DNA.
20
2.11 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN.20
2.12
INSERT SCREENING UND INSERTVERMEHRUNG.20
2.13 ISOLIERUNG VON DNA AUS AGAROSEGELEN.23
2.14 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (PAGE).23
2.15 COOMASSIE-FAERBUNG.24
2.16 WESTEM-BLOTTING.25
2.17 ZELLTODFAERBUNG MIT EVANSBLAU.25
2.18
DDCA9 - EXPRESSION IN E. COLI.26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.18.1 KLONIERUNG DER
DDCA9-CDNA IN PQE 31.26
2.18.2 SUCHE NACH DEM ARABIDOPSIS-HOMOLOG ZU DDCA9.27
2.18.3 DENATURIERENDE REINIGUNG VON 6XHIS-TAGGED PROTEINEN AUS
E. COLI.27
2.18.4 NATIVE REINIGUNG VON REKOMBINANTEM DDCA9-PROTEIN AUS
E. COLI.29
2.18.5 HERSTELLUNG VON ANTIKOERPERN.31
2.18.6 WESTEMBLOT MIT ANTISEREN GEGEN DDCA9.31
2.18.7 ENZYMTESTS MIT DEM REKOMBINANTEN DDCA9-PROTEIN AUS
E. COLI.32
2.19 MAPKINASE.32
2.19.1 BESTIMMUNG VON MAPK-AKTIVITAET DURCH
IN-GEL-KINASE-ASSAYS.32
2.19.2 IMMUNOPRAEZIPITATION.34
2.19.3 KOMMERZIELLER MAPK-ANTIKOERPER.35
2.20 PROMOTORENANALYSE.36
2.20.1 PROMOTORSUCHE
(PRIMER WALKING).^.36
2.20.2 PROMOTORANALYSE MIT HILFE DER
PARTICLE INFLOW GUN (PARTIKELKANONE).37
2.20.2.1
REPORTERGENKONSTRUKTE.38
2.20.2.2
BELADUNG DER WOLFRAMPARTIKEL.38
2.20.2.3 HERSTELLEN DER PLATTEN MIT SOJAZELLKULTUR.39
2.20.2.4
BESCHIESSEN.39
2.20.2.5 AUSWERTUNG.40
2.20.3 PROMOTORANALYSE MIT HILFE DES
ELECTROMOBILITY-SHIFT-ASSAY (EMSA). 40
2.20.3.1
GEWINNUNG DER BENOETIGTEN DNA-FRAGMENTE DURCH PCR.40
2.20.3.2
ISOLATION VON ZELLKEMPROTEINEN.41
2.20.3.3 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER DNA.42
2.20.3.4
EMSA.42
2.20.4 SUCHE NACH TRANSKRIPTIONSFAKTOREN MIT HILFE DES
ONE-HYBRID-ASSAYS IN HEFE.43
2.20.4.1
HERSTELLUNG VON KONKATEMEREN AUS DSFAS3REV.44
2.20.4.2
HERSTELLUNG DER HEFE-REPORTERSTAEMME FUER DEN ONE-HYBRID-ASSAY.44
2.20.4.3 P.AD-GAL4-2.1 -FUSIONS-BIBLIOTHEK.45
2.20.4.4
ONE-HYBRID-ASSAY.45
2.20.4.5 PLASMIDPRAEPARATION AUS HEFE.45
3. ERGEBNISSE.47
3.1
DDCA9 - REGULATION DER TRANSKRIPTION.48
3.2 ISOLATION UND ANALYSE VON PROMOTOREN SA- UND FAS-INDUZIERBARER GENE
AUS SOJA 52
3.2.1 PROMOTORISOLATION DES GENES
DDCA9.52
3.2.2. PROMOTORUNTERSUCHUNG - PARTIKELKANONE UND
ELECTROMOBILITY-SHIFT-ASSAY
(EMSA).53
3.2.3 AUF DER SUCHE NACH DEM DNA-BINDEPROTEIN - DAS
HZFE-ONE-HYBRID-SYSTEM.
58
3.2.4 PROMOTOEREN FAS- UND SA-INDUZIERTER GENE.59
3.2.5 DOF-PROTEINE.68
3.3 UNTERSUCHUNGEN AN DDCA9.73
3.3.1 SEQUENZANALYSE DES GENS
DDCA9
.73
3.3.2 LOKALISATION VON DDCA9 IN DER ZELLE.76
3.3.3 EXPRESSION VON REKOMBINANTEM DDCA9 IN
ESCHERICHIA COLI
.78
3.3.4 NATIVE REINIGUNG VON REKOMBINANTEM DDCA9 AUS
ESCHERICHIA COLI
.79
3.3.5 BINDE-ANALYSE DES PROTEINS DDCA9.82
3.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR AKTIVIERUNG VON MAPKINASEN IN SOJAZELLKULTUR.87
3.4.1 MAPKINASEN IN SOJAZELLKULTUREN: SA UND FAS-SUBSTANZEN.88
3.4.2 IMMUNOPRAEZIPITATION ZUR BESTIMMUNG DER AKTIVEN MAPKINASEN.89
3.4.3 SOJA-MMKL UND HYPERSENSITIVE REAKTION (HR).94
3.4.4 REGULATION DER MAPKINASE.95
3.4.5 REGULATION DER TRANSKRIPTION DES SOJA-MMKL-HOMOLOGS.97
4. DISKUSSION.98
4.1 REGULATION DER TRANSKRIPTION VON
DDCA9
.98
4.2 PROMOTORANALYSE.
4.3 BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG UND FUNKTION DES DDCA9-PROTEINS. 107
4.4 MAPKINASE.112
4.5 EIN ERKLAERUNGSVERSUCH.116
5. ZUSAMMENFASSUNG.118
6. LITERATURVERZEICHNIS. 120
7. ANHANG. 129
7.1 ANHANG ZU KAPITEL 3.2.5.129
7.2 ANHANG ZU KAPITEL 3.3.1.130
7.3 ANHANG ZU KAPITEL 3.4.2.138
8. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.151 |
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