Etablierung eines Tiermodells zum Gentransfer ins ZNS:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2002 |
| Beschreibung: | 80 Bl. Ill., graph. Darst. |
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2
1 EINLEITUNG.5
1.1 ENTWICKLUNG UND AUFBAU DES ZENTRALNERVENSYSTEMS.5
1.2 NEURALE STAMMZELLEN.
7
1.3 THERAPIE ZENTRALNERVOESER ERKRANKUNGEN DURCH
STAMMZELLTRANSPLANTATION.9
1.4 RELEVANZ DER UNTERSUCHUNGEN.11
2 MATERIAL UND METHODEN.13
2.1 ZELLKULTURTECHNIKEN.13
2.1.1 KULTIVIERUNG NEURALER STAMMZELLEN.13
2.1.2 ETABLIERUNG PRIMAERER ZELLKULTUREN AUS KNOCHENMARK.13
2.1.3 UNTERSUCHUNG VON ZELLKULTUREN AUF KONTAMINATION.14
2.1.4 ENZYMHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON LAC7^_.14
2.1.5 UNTERSUCHUNG CHEMOTAKTISCHER EIGENSCHAFTEN NEURALER STAMMZELLEN.15
2.1.5.1 HERSTELLUNG VON PROTEINEXTRAKTEN AUS MURINEN GEWEBEN.15
2.1.5.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION.15
2.1.5.3 TRANSWELL-KULTUR.16
2.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE TECHNIKEN.16
2.2.1 CHEMIKALIEN.16
2.2.2 STAMMLOESUNGEN UND PUFFER.18
2.2.3 DNA-ISOLIERUNG.18
2.2.3.1 DNA-ISOLIERUNG AUS MURINEN GEWEBEN.19
2.2.3.2 DNA-ISOLIERUNG AUS MAEUSEBLUT UND KULTIVIERTEN ZELLEN.19
2.2.4 QUANTIFIZIERUNG GENOMISCHER DNA.19
2.2.5 KONZENTRIERUNG GENOMISCHER DNA.20
2.2.6 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.20
2.2.6.1 HERSTELLUNG VON AGAROSEGELEN.20
2.2.6.2 ELEKTROPHORESE./.20
2.2.6.3 SICHTBARMACHEN DER DNA IM AGAROSEGEL.21
2.2.7 DNA-AMPLIFIKATION DURCH PCR.21
2.2.1.X
OUEGONUKLEOTIDPRIMER. 22
2.2.1.2 POLYMERASE UND PUFFER.22
2.2.7.3 REAKTIONSANSATZ.23
2.2.7.4 SENSITIVITAET.24
2.2.8 HERSTELLUNG VON PROTEINEXTRAKTEN FUER WESTERN BLOT ANALYSEN.24
2.2.9 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE.26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/966049829
3
2.2.9.1 HERSTELLUNG VON SDS-POLYACRYLAMID-GELEN.26
2.2.9.2 ELEKTROPHORESE. TI
2.2.10 WESTERN BLOT ANALYSE.28
2.2.10.1 PROTEINTRANSFER VON SDS-POLYACRYLAMID-GELEN.28
2.2.10.2 ANFARBEN DER AN DIE NITROZELLULOSEMEMBRAN GEBUNDENEN
PROTEINE.29
2.2.10.3 COOMASSIE-FAERBUNG UND TROCKNEN VON SDS-POLYACRYLAMID-GELEN.29
2.2.10.4 BLOCKIERUNG UNSPEZIFISCHER BINDUNGSSTELLEN AUF DER
NITROZELLULOSEMEMBRAN.30
2.2.10.5 ANTIKOERPER-INKUBATIONEN. 30
2.2.10.6 DETEKTION DER PROTEINE DURCH CHEMOLUMINISZENZ.31
2.2.10.7 ENTFERNUNG GEBUNDENER ANTIKOERPER VON DER
NITROZELLULOSEMEMBRAN.31
2.2.11 ENZYMHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON SS-GALAKTOSIDASE AM GEKLAERTEN
MURINEN
2.2.11.1 X-GAL-FAERBUNG VON MURINEN GEWEBEN.32
2.2.11.2 KLAERUNG VON MUTINEN GEWEBEN.32
2.3 TIEREXPERIMENTELLE UNTERSUCHUNGEN.33
2.3.1 MAEUSE.33
2.3.2 TRANSPLANTATION NEURALER STAMMZELLEN DURCH INTRAVENOESE
INJEKTION.33
2.3.3 SEKTION VON MAEUSEN.34
2.4 STATISTISCHE AUSWERTUNGEN. 35
3 ERGEBNISSE.37
3.1 NACHWEIS I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN IM X-GAL GEFAERBTEN UND GEKLAERTEN
UEHIM37
3.2 NACHWEIS I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN IM GEHIRN DURCH PCR
AMPLIFIKATION.39
3.2.1 EINFLUSS DER ZAHL INJIZIERTER ZELLEN AUF DIE IMPLANTATION IN DAS
GEHIRN.41
3.2.2 EINFLUSS DES REZIPIENTENALTERS AUF DIE IMPLANTATION VON NS ZELLEN
IN DAS GEHIM42
3.2.3 EINFLUSS DES GESCHLECHTS DER REZIPIENTEN AUF DIE IMPLANTATION VON
NS ZELLEN IN
DAS GEHIRN.44
3.3 GENEXPRESSION I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN JM GEHIRN.45
3.4 ENZYMHISTOCHEMISCHER NACHWEIS I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN IN
GROSSHIRN,
KLEINHIRN UND HIMSTAMM.46
3.5 PCR-NACHWEIS I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN IN GROSSHIRN, KLEINHIRN UND
HIMSTAMM.49
3.6 LOKALISATION I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN INNERHALB DER
GROSSHIRNHEMISPHAERE. 49
3.7 NACHWEIS I.V. INJIZIERTER NS ZELLEN IN BLUT, LUNGE UND MILZ VON
REZIPIENTEN
DURCH PCR AMPLIFIKATION.50
4
3.8 UNTERSUCHUNG DES MIGRATIONSVERHAITENS VON NS ZELLEN AUF
CHEMOTAKTISCHE
EINFLUESSE. 52
3.9 EINFLUSS EINER AETHEMARKOSE AUF DIE TRANSPLANTATION VON NS ZELLEN INS
ZNS
DURCH I.V. INJEKTION.55
3.10 EINFLUSS EINER AETHEMARKOSE AUF DIE VERTEILUNG I.V. INJIZIERTER NS
ZELLEN IM
MURINEN ZNS.57
3.11 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE.59
4 DISKUSSION.61
4.1 TRANSPLANTATION VON NEURALEN STAMMZELLEN ALS THERAPIEANSATZ.61
4.2 TRANSPLANTATION DURCH I.V. INJEKTION.61
4.2.1 BLUT-HIM-SCHRANKE ALS LIMITIERENDER FAKTOR BEI DER TRANSPLANTATION
VON ZELLEN IN
DAS ZNS DURCH I.V. INJEKTION.^.63
4.2.1.1 MODULATION DER PERMEABILITAET DER BBB.63
4.2.2 ZUSAETZLICHE EINFLUESSE AUF DIE TRANSPLANTATIONSEFFIZIENZ NEURALER
STAMMZELLEN.64
4.2.2.1 KRITISCHE BETRACHTUNG DER ANALYSEN. 66
4.3 VERTEILUNG VON NS ZELLEN IM ORGANISMUS NACH I.V. INJEKTION.67
4.4 AUSBLICK.69
5 ZUSAMMENFASSUNG.71
6 VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN.72
7 LITERATURVERZEICHNIS.74
8 DANKSAGUNG.80 |
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