Enzymimmunoassay (ELISA) zum Koproantigennachweis der Monieziose des Schafes:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
EINLEITUNG
_
5
2
LITERATURUEBERSICHT
_
7
2.1
M
ONIEZIOSE
DES
S
CHAFES
.
7
2.1.1
ERREGER
.
7
2.1.2
ENTWICKLUNG
UND
EPIDEMIOLOGIE
.
11
2.1.3
PATHOGENESE
.
13
2.1.4
KLINISCHE
SYMPTOME
.
14
2.1.5
LABORDIAGNOSTIK
.
-
.
14
2.1.6
THERAPIE
.16
2.2
K
OPROANTIGENE
.
19
2.3
E
NZYME
-L
INKED
I
MMUNOSORBENT
A
SSAY
(ELISA)
.
21
2.3.1
ENZYMIMMUNOASSAY,
AUFBAU
.
21
2.3.2
PROBLEME
BEI
DER
VERWENDUNG
VON
KOTPROBEN
IM
ELISA
.25
2.3.3
VERAENDERUNGEN
AM
ELISA
UND
IHRE
MOEGLICHKEITEN
.26
2.4
P
OLYKLONALE
A
NTIKOERPER
,
V
ORTEILE
DES
H
UEHNERIMMUNGLOBULINS
.
28
2.4.1
EIGENSCHAFTEN
DER
IMMUNGLOBULINE
DES
HUHNES
.
28
2.4.2
DOTTERANTIKOERPER,
VORTEILE
UND
ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN
.
29
3
MATERIAL
UND
METHODEN
----------------------------------------------------------------
31
3.1
A
NTIGENHERSTELLUNG
.
31
3.1.1
PARASITENGEWINNUNG
.
31
3.1.2
PARASITENKULTIVIERUNG
.
31
3.1.3
ANTIGENPRAEPARATION
.
32
3.1.4
PROTEINBESTIMMUNG
.
32
3.2
A
NTIKOERPER
.
33
3.2.1
IMMUNISIERUNG
DER
VERSUCHSTIERE
.
33
3.2.2
SERUMGEWINNUNG
.34
3.2.3
TITERBESTIMMUNG
IM
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.34
3.2.4
ISOLIERUNG
VON
IGY:
.
37
INHALTSVERZEICHNIS
32.5
GEWINNUNG
DER
IGG
FRAKTION
AUS
DEM
SERUM
.
YY
.
39
3.2.6
POLYSTYROL
ALS
MATRIX
ZUR
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
VON
ANTIKOERPERN
.
40
3.3
I
NFEKTION
VON
S
CHAFEN
MIT
M
ONIEZIA
EXPANSA
.
.
.
43
3.3.1
ISOLIERUNG
DER
ORIBATIDEN
ALS
ZWISCHENWIRT
.43
3.3.2
EXPERIMENTELLE
INFEKTION
DER
ORIBATEN
.
.
.
-
.45
3.3.3
INFEKTION
DER
SCHAFE
MIT
REIFEN
ZYSTIZERKOIDEN
.
46
3.3.4
ENTNAHME
DER
KOTPROBEN
.
46
3.3.5
KOPROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
.
47
3.4
K
OPROANTIGEN
ELISA
.
47
3.4.1
HERSTELLUNG
DES
POLYSTYROL
GRANULATS
.
47
3.4.2
AUFBEREITUNG
DER
KOTPROBEN
.48
3.4.3
DURCHFUEHRUNG
DES
KOPROANTIGEN-ELISA
.48
3.4.4
ENZYMKONJUGATION
VON
IGY
.
51
3.4.5
BESTIMMUNG
DER
EXTINKTIONSWERTE
.53
3.4.6
BESTIMMUNG
DER
CUT-OFF-WERTE
.
53
4.1
E
XPERIMENTELLE
I
NFEKTION
VON
S
CHAFEN
MIT
M
ONIEZIA
Z
YSTIZERKOIDEN
.
54
4.1.1
INFEKTION
VON
SCHAFEN
MIT
REIFEN
ZYSTIZERKOIDEN
.
54
4.2
A
NTIGENGEWINNUNG
.
56
4.3
A
NTIKOERPERGEWINNUNG
.
56
4.3.1
AUSWIRKUNGEN
DER
IMMUNISIERUNG
UND
DER
SERUMGEWINNUNG
AUF
DIE
VERSUCHSTIERE
.
56
4.3.2
TITERVERLAEUJE
.58
4.3.3
GEWINNUNG
DER
ANTIKOERPER
AUS
DEM
SERUM
.
63
4.3.4
GEWINNUNG
DER
ANTIKOERPER
AUS
DEM
EIDOTTER
.
64
4.4
V
ERGLEICHENDE
E
RGEBNISSE
K
OPROANTIGEN
-ELISA
UND
K
OPROSKOPIE
.
64
4.4.1
KOPROANTIGEN-ELISA
.64
5
DISKUSSION.
70
5.1
D
ER
K
OPROANTIGEN
-ELISA
ZUR
D
IAGNOSE
DER
M
ONIEZIOSE
BEI
S
CHAF
UND
R
IND
.
70
5.1.1
KULTIVIERUNG
DER
PARASITEN
.
72
INHALTSVERZEICHNIS
5.1.2
ANTIKOERPERPRODUKTION
IN
DEN
VERSUCHSTIEREN
.
72
5.1.3
KOPROANTIGEN-ELISA
ZUM
NACHWEIS
VON
ZESTODENANTIGEN
BEI
SCHAFEN
.
73
6
ZUSAMMENFASSUNG
_
77
7
SUMMARY
_
79
8
LITERATURVERZEICHNIS
----------------------------------------------------------------------
81
9
ANHANG
-----------------------------------------------------------------------------------------------
101
9.1
A
NHANG
1:
P
UFFER
UND
R
EAGENZIEN
.
101
9.1.1
KULTIVIERUNG
DER
PARASITEN
.
101
9.1.2
PROTEINBESTIMMUNG
.
102
9.1.3
GEWINNUNG
DER
GAMMAGLOBULINFRAKTION
AUS
DEM
SERUM
AN
EINER
PROTEIN
A
SAEULE
.
102
9.1.4
GEWINNUNG
DER
GAMMAGLOBULINFRAKTION
AUS
DEM
EIDOTTER
DURCH
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
.
103
9.1.5
KOPPLUNG
VON
IMMUNGLOBULINEN
AN
POLYSTYREN
(PS)
.
103
9.1.6
KOTPROBENAUFBEREITUNG
.
104
9.1.7
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
104
9.1.8
KOPROSKOPIE
.
105
9.1.9
ELISA
.
105
10
DANKSAGUNG.
_
.
-
.
_
.
_
.
_
.107 |
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