Beeinflussung zellulärer Proliferationsmechanismen durch das Proto-Onkogen MYCN in humanen Neuroblastomen:
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Marburg
Görich & Weiershäuser
2002
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681 |
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EINLEITUNG
.
'
P
ROLIFERATIONSKONTROLLE
DURCH
MYCN
IM
N
EUROBLASTOM
.
7
G
RUNDLAGE
ZELLULAERER
P
ROLIFERATION
-
D
ER
Z
ELLZYKLUS
.
8
GL-PHASE
REGULIERENDE
CYKLIN-CDK-KOMPLEXE
.
8
INHIBITOREN
DER
CYKLIN-CDK-KOMPLEXE
.
9
DER
RB/E2F-KONTROLLPUNKT
.
W
DIE
E2F-TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
H
A
NTIPROLIFERATIVE
M
ECHANISMEN
-
S
ENESZENZ
UND
K
RISE
.
14
TELOMERSTRUKTUR
.
TELOMERFUNKTION
.
SENESZENZ,
KRISE
UND
TELOMER
.
ENZYMSTRUKTUR
DER
TELOMERASE
.
ROLLE
DER
TELOMERASE
IN
IMMORTALISIERUNG
UND
KARZINOGENESE
.
16
MYC
.
18
FUNKTIONEN
VON
MYC.
.
19
MYC
UND
TRANSFORMATION
.
20
MYC
UND
APOPTOSE
.
21
MYC
UND
ZELLZYKLUS
.
22
D
AS
N
EUROBLASTOM
.
24
HISTOLOGIE
.
24
DIAGNOSTIK
.
24
INZIDENZ
.
25
THERAPIE
.
25
PROGNOSE
.
26
GENETIK
.
26
VERAENDERUNGEN
DER
GENEXPRESSION
.
27
AMPLIFIKATION
VON
MYCN.
.
28
FRAGESTELLUNG
.
30
MATERIAL
/
METHODEN
.
31
T
UMORMATERIAL
.
31
E
XPRESSIONSANALYSE
VON
C
YKLIN
A,
PCNA
UND
P
R
B
.
32
HERSTELLUNG
VON
PROTEINLYSATEN
AUS
PRIMAEREN
TUMOREN
.
32
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD.
.
33
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
33
WESTERN-BLOT.
.
35
BEWERTUNGSKRITERIEN
WESTERN-BLOT
.
38
RT-PCR-A
NALYSE
DER
E
XPRESSION
DER
E2F-T
RANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
39
RNA-ISOLIERUNG
.
39
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
40
PCR
MIT
FIIR
DIE
JEWEILIGEN
CDNA-SEQUENZEN
SPEZIFISCHEN
PRIMER
.
40
GELELEKROPHORESE
DER
PCR-PRODUKTE
.
43
S
OUTHERN
-
BLOT
-U
NTERSUCHUNG
ZUR
B
ESTIMMUNG
DER
T
ELOMERLANGEN
.
44
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
NEUROBLASTOMPROBEN
.
44
QUANTIFIZIERUNG
DER
DNA
.
44
RESTRIKTIONSENZYMATISCHER
VERDAU
DER
DNA
.
45
GELELEKTROPHORESE
FUER
SOUTHEM-BLOT
.
45
DER
DNA-TRANSFER
.
46
MATERIAL
.
.
.
46
INKUBATION
DER
SOUTHERN-MEMBRAN
MIT
EINER
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
OLIGONUKLEOTID-
SONDE
.
47
WASCHEN
DER
SOUTHEM-MEMBRANEN
UND
AUTORADIOGRAPHISCHE
DETEKTION
TELOMER-
SPEZISCHER
SIGNALE
.
48
B
ESTIMMUNG
DER
T
ELOMERASE
-A
KTIVITAET
.
49
TELOMERASE-PCR-ELISA
.
49
BEWERTUNGSKRITERIEN
FUER
TELOMERASE-PCR-ELISA
.
51
STATISTIK
.
51
ERGEBNIS
.
52
A
NALYSE
DES
P
ROLIFERATIONSVERHALTENS
HUMANER
N
EUROBLASTOME
.
52
CYKLIN
A
UND
PCNA
SIND
IN
NEUROBLASTOMEN
KOREGULIERT
UND
WERDEN
MYCN
-
ABHAENGIG
IN
UNTERSCHIEDLICHER
HOEHE
EXPRIMIERT.
.
52
IN
NEUROBLASTOMEN
KOMMT
ES
UNABHAENGIG
VOM
STADIUM
DER
ERKRANKUNG
ZU
EINEM
ALTERSABHAENGIGEN
PROLIFERATIONSARREST,
DER
DURCH
MYCN
DURCHBROCHEN
WIRD.
.
56
DIE
ALLEINIGE
BESTIMMUNG
DES
PROLIFERATIONSVERHALTENS
HUMANER
NEUROBLASTOME
ERLAUBT
KEINE
PROGNOSTISCHEN
AUSSAGEN
.
59
A
NALYSE
DES
E
INFLUSSES
VON
MYCN
AUF
DEN
R
B
/E2F-K
ONTROLLPUNKT
.
61
DAS
RB-PROTEIN
ZEIGT
MIT
ZUNEHMENDEM
ALTER
DER
PATIENTEN
EINE
ABNAHME
DER
EXPRESSIONSHOEHE
SOWOHL
IN
MYCN
AMPLIFLZIERTEN
ALS
AUCH
IN
NICHT-AMPLIFIZIERTEN
TUMOREN.
61
UNTERSCHIEDLICHE
EXPRESSIONSLEVEL
DER
E2F-FAMILIENMITGLIEDER
IN
PRIMAEREN
NEUROBLASTOMEN
.
64
DIE
E2F-FAMILIENMITGLIEDER
E2F-1,
-4
UND
-6
WERDEN
ALTERSABHAENGIG
UND
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
AMPLIFIKATION
DES
MYCN-GENS
REGULIERT
.
67
T
ELOMERASEAKTIVITAET
UND
K
ONTROLLE
DER
T
ELOMERLAENGEN
IN
N
EUROBLASTOMEN
.
70
TELOMERASEAKTIVITAET
IN
HUMANEN
NEUROBLASTOMEN
IST
EIN
VOM
ALTER
DER
PATIENTEN
UND
DEM
STADIUM
DER
ERKRANKUNG
UNABHAENGIGER
PROGNOSTISCHER
MARKER
.
70
EINE
UEBEREXPRESSION
VON
MYCN
INDUZIERT
TELOMERASEAKTIVITAET
AUCH
IN
TUMOREN
VON
PATIENTEN,
DEREN
ALTER
ZUM
ZEITPUNKT
DER
DIAGNOSE
UEBER
18
MONATE
LAG.
.
73
TELOMERASEAKTIVITAET
IST
MIT
ERHOEHTER
PROLIFERATION
ASSOZIIERT
UND
IST
IN
TUMOREN
MIT
EINER
AMPLIFIKATION
VON
MYCN
HINREICHENDE
BEDINGUNG
FUER
DIE
INDUKTION
PROLIFERATIVER
PROZESSE
.
75
DIE
REGULATION
DER
TELOMERLAENGEN
IN
HUMANEN
NEUROBLASTOMEN
ERFOLGT
ALTERSUNABHAENGIG.
.
77
MYCN-AMPLIFIZIERTE
TUMORE
SIND
VERMEHRT
MIT
KURZEN
TELOMEREN
ASSOZIIERT.
.
80
DISKUSSION
.
82
ZUSAMMENFASSUNG
.
92
LITERATURVERZEICHNIS
.
94
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