Transmigration von polymorphkernigen neutrophilen Granulozyten durch Endothelzellmonolayer nach Stimulation mit Eschericha coli Hämolysin und Staphylokokkus aureus a-Toxin:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG. 1
1.1. AKUTES ATEMNOTSYNDROM DES ERWACHSENEN (ARDS). 1
1.2. POLYMORPHKERNIGE NEUTROPHILE GRANULOZYTEN (PMN). 5
1.3. ENDOTHELZELLEN.;. 5
1.4. TRANSMIGRATION UND ENDOTHELZELLMONOLAYER. 6
1.4.1. ADHAESION. 7
1.4.1.1. SELEKTINE. 9
1.4.1.2. INTEGRINE. 9
1.4.1.3. IMMUNGLOBULIN-GENSUPERFAMILE. 10
1.4.2. MIGRATION. 11
1.4.3. BOTENSTOFFE. 12
1.5. BEDEUTUNG DES ZYTOSKELETTES.13
1.6. BAKTERIELLE TOXINE. 14
1.6.1.
ESCHERICHA COLI HAEMOLYSIN. 15
1.6.2.
STAPHYLOKOKKUS AUREUS A-TOXIN. 15
1.7. FRAGESTELLUNG. 16
2. MATERIAL UND METHODEN. 17
2.1. ENDOTHELZELLKULTUR. 17
2.1.1. ISOLATION VON HUMAN UMBILIKAL VENOESEN ENDOTHELZELLEN (HUVEC). 17
2.1.2. CHARAKTERISIERUNG VON ENDOTHELZELLEN. 19
2.1.3. SUBKULTIVIEMNG (SPLITTEN) VON ENDOTHELZELLEN. 19
2.2. POLYMORPHKERNIGE NEUTROPHILE GRANULOZYTEN (PMN)./.20
2.2.1. ISOLATION DER GRANULOZYTEN.20
2.2.2. MARKIERUNG DER GRANULOZYTEN.21
2.3. DERTRANSMIGRATIONSASSAY.21
2.3.1. DAS TRANSMIGRATIONSMODELL.21
2.3.2. VORBEREITUNG DER MEMBRANEN.22
2.3.3. BEPFLANZEN DER MEMBRANEN.22
2.3.4. KONTROLLE DES MONOLAYERS.23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.3.5. VERSUCHSDURCHFUEHRUNG.23
2.3.6. BESTIMMUNG DER TRANSMIGRATIONSRATE.24
2.4. CHECKERBOARDANALYSE.25
2.5. LAKTATDEHYDROGENASE (LDH) BESTIMMUNG. 25
2.6. ZELLOBERFLAECHEN-ELJSA (YYCELL SURFACE ELISA").26
2.6.1. VORBREITUNG DER VERSUCHSPLATTEN.:. 26
2.6.2. ELISA-DURCHFUEHRUNG. 26
2.7. DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS). 27
2.8. VORBEREITUNG DER TOXINE. 28
2.8.1.
ESCHERICHA COLI HAEMOLYSIN (TITERBESTIMMUNG).28
2.6.2.
CLOSTRIDIUM BOTULINUM C
2
-TOXIN (AKTIVIERUNG). 28
2.9. SUBSTANZEN UND MATERIALIEN.29
2.9.1. MEDIEN. 29
2.9.2. PUFFER. 29
2.9.3. STIMULI. 29
2.9.4. ANTIKOERPER UND REZEPTORANTAGONISTEN. 30
2.9.5. SONSTIGE REAGENTIEN. 30
2.9.6. ZELLKULTURMATERIALIEN. 31
2.9.7. SONSTIGES. 31
2.10. STATISTISCHE METHODEN. 31
3. ERGEBNISSE. 32
3.1. FMLP-INDUZIERTE TRANSENDOTHELIALE MIGRATION. 32
3.1.1. ZEIT-UND DOSISREIHE. 32
3.1.2. EINFLUSS VON EGLIN, SUPEROXIDDISMUTASE UND KATALASP. 33
3.1.3. BEDEUTUNG ENDOTHELIALER ADHAESIONSMOLEKUELE. 35
3.1.4. BEDEUTUNG GRANULOZYTAERER ADHAESIONSMOLEKUELE. 36
3.1.5. CHECKERBOARD ANALYSE FUER FMLP. 38
3.2.
ESCHERICHA COLI HAEMOLYSIN-INDUZIERTE TRANSMIGRATION. 39
3.2.1. ZEIT-UND DOSISREIHE. 39
3.2.2. BEDEUTUNG ENDOTHELIALER ADHAESIONSMOLEKUELE. 41
3.2.3. BEDEUTUNG GRANULOZYTAERER ADHAESIONSMOLEKUELE. 43
3.2.4. LAKTATDEHYDROGENASEBESTIMMUNG (LDH). 47
3.2.5. CHECKERBOARD ANALYSE FUER HLYA. 48
3.2.6. BEDEUTUNG DES PLAETTCHENAKTIVIERUNGSFAKTORS (PAF).49
3.2.7. BEDEUTUNG VON LEUKOTRIEN B 4 (LTB
4
). 51
3.2.8. BEDEUTUNG VON INTERLEUKIN
8
(IL
8
). 52
3.2.9. FIXATION MIT PARAFORMALDEHYD (PFA). 53
3.3.
STAPHYLOKOKKUS AUREUS A-TOXIN-INDUZIERTE TRANSMIGRATION. 54
3.4. BEDEUTUNG DES ZYTOSKELETTES. 54
3.4.1. C
2
-TOXIN VORINKUBATION UND STIMULATION MIT HLYA U. FMLP.54
3.4.2. TCDB 10463 VORINKUBATION U. STIMULATION MIT HLYA U. FMLP.57
4. DISKUSSION. 59
4.1. TRANSENDOTHELIALE MIGRATION.
.
7
;
. 60
4.1.1. BEDEUTUNG DER ADHAESIONSMOLEKUELE. 60
4.1.1.1. ENDOTHELIALE ADHAESIONSMOLEKUELE.60
4.1.1.2. GRANULOZYTAERE ADHAESIONSMOLEKUELE. 63
4.1.2. BEDEUTUNG PROINFLAMMATORISCHER MEDIATOREN. 64
4.1.2.1. PAF. 64
4.1.2.2. LTB4. 65
4.1.2.3. IL
-8
. 65
4.1.3. CHEMOTAXIS UND CHEMOKINESE. 67
4.1.4. BEITRAG DER ENDOTHELZELLEN UND PMN ZUR TRANSMIGRATION.
68
4.1.5. BEDEUTUNG DES ZYTOSKELETTES. 69
4.2. REFLEXION UND KLINISCHER AUSBLICK. 70
5. ZUSAMMENFASSUNG. 72
6. LITERATURVERZEICHNIS. 75
7. ABKUERZUNGEN. 97
8. ANHANG. 101
8.1. DANKSAGUNG.101
8.2. ERKLAERUNG AN EIDES STATT.102
8.3. LEBENSLAUF. 103 |
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